分子生物学重点习题

分子生物学重点习题分子生物学重点习题分子生物学重点习题V:1.0精细整理，仅供参考分子生物学重点习题日期：20xx年X月一、名词解释：1．基因：是核酸中储存有功能的蛋白质多肽链或RNA序列信息及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。2．基因组：细胞或生物体一套完整单倍体的遗传物质的总称。3．基因表达：是指原核生物和真核生物基因组中特定的结构基因所携带的遗传信息，经过转录、翻译等一系列过程，合成具有特定的生物学功能的各种蛋白质，表现出特定的生物学效应的全过程。4．启动子：RNA聚合酶特异识别结合和启动转录的DNA序列。5．多顺反子：原核生物的一个mRNA分子带有几个结构基因的遗传信息，利用共同的启动子及终止信号，组成操纵子的基因表达调控单元。6．单顺反子：一个结构基因转录生成一个mRNA分子。7．顺式作用元件：某些能影响基因表达但不编码蛋白质和RNA的DNA序列，按照功能分为启动子、增强子、负调控元件-沉默子。8．核心启动子：指足以使RNA聚合酶Ⅱ转录正常起始所必需的、最少的DNA序列。包括“转录起始位点”即相当于mRNA的CAP位点及其上游－25～－30bp处的富含TA的典型元件“TATA”盒。核心启动子单独起作用时，其功能为确定转录起始位点并产生基础水平的转录。9．上游启动子元件：TATA合上游的一些特定的DNA序列，反式作用因子，可与这些元件结合，调控基因转录的效率。10．增强子：指位于启动子上游或下游并通过启动子增强邻近基因转录效率的DNA顺序，但增强子本身不具备启动子活性。11．沉默子：在真核基因内能抑制基因转录的DNA序列。它们与反式作用因子相互结合而起作用。不受距离和方向的限制，并可对异源基因的表达起作用。12．反式作用因子：指能直接或间接地识别或结合在各顺式作用元件8～12bp核心序列上，参与调控靶基因转录效率的一组蛋白质。在结构上含有与DNA结合的结构域。13．选择性剪接：在高等真核细胞中，某个内含子5ˊ的供点可以在特定条件下与另一个内含子3ˊ受点进行剪接，同时删除这两个内含子及其中间的全部外显子或内含子，即一个外显子或内含子是否出现在成熟的mRNA中是可以选择的，这种剪接方式称为选择性剪接。14．点突变：在基因一级结构某个位点上，一个碱基被另一个碱基取代产生的DNA一级结构改变称为点突变。15．基因工程：是指在体外对DNA分子按照既定的目的和方案，对DNA进行剪切和重新连接，然后把它导入宿主细胞，从而能够扩增有关DNA片段，表达有关基因产物，进行DNA序列分析、基因治疗，研究基因表达的调节元件（如启动子、增强子等），以及研究基因的功能等。16．限制性核酸内切酶：限制性核酸内切酶是一种核酸内切酶，又称限制性内切酶，能识别双链DNA分子内部的特异位点并且裂解磷酸二酯键。17．质粒：存在于包括细菌、酵母在内的多种微生物中，在宿主细胞的染色体外以稳定的方式遗传。结构上，它是一种双链环状的DNA分子，含有复制起始点，此复制起始点与其他一些顺式调控因子构成复制子，能利用细菌染色体DNA复制和转录的同一套酶系统，在细菌体内独立地进行自我复制及转录。18．cDNA文库：以特定的组织或细胞mRNA为模板逆转录产生的cDNA与适当的载体重组得到的重组DNA克隆群。19．断裂基因：真核生物基因在编码区内含有非编码的插入序列，结构基因不连续，即。20．结构基因：基因中用于编码RNA或蛋白质的DNA序列为结构基因。21．非结构基因：结构基因两侧一段不编码的DNA片段，含有基因调控序列。22．内含子：真核生物结构基因内非编码的插入序列。23．质粒：存在于包括细菌、酵母在内的多种微生物中，在宿主细胞的染色体外以稳定的方式遗传。结构上，它是一种双链环状的DNA分子，含有复制起始点，此复制起始点与其他一些顺式调控因子构成复制子，能利用细菌染色体DNA复制和转录的同一套酶系统，在细菌体内独立地进行自我复制及转录。24．操纵子：多个功能相关的结构基因成簇串联排列，与上游共同的调控区和下游转录终止信号组成的基因表达单位。25．DNA指纹：利用人类染色体上小卫星DNA的核心序列为探针进行RFLP分析时，检测到大量的高度可变区，产生相应的图谱，并具有高度的个体特异性，达到了如同人类指纹那样的高度专一性，所以称其为DNA指纹图谱。26．基因组学：阐明基因组结构、结构与功能的关系及基因与基因之间相互作用的一门科学。27．短串联重复：卫星DNA中重复单位为2-6bp的DNA序列，常见为(AC)n和(TG)n，重复次数10-60次，总长度小于150bp，高度多态性，可作遗传标记。28．基因型：逐代传递下去的的成对基因的集合，一个来自父本，一个来自母本。29．RNA干扰：是由双链RNA诱发的基因沉默现象:与其有同源序列的mRNA被降解，从而抑制了该基因的表达。30．核酶：是具有酶活性的RNA，可降解特异的mRNA序列。用于基因治疗的核酶分子由三个部分组成，中间是保守序列（能够组成酶活性结构域），两端是引导序列。与一般的反义RNA相比，核酶具有较稳定的空间结构，不易受到RNA酶的攻击。更重要的是，核酶在切断mRNA后，又可从杂交链上解脱下来，重新结合和切割其它的mRNA分子。31．蛋白质组学：是应用各种技术手段来研究蛋白质组的一门新兴科学，是在整体水平上研究细胞内蛋白质组成及其活动规律的科学。32．免疫共沉淀：免疫沉淀是抗原和抗体之间专一性地相互作用而沉淀，从而保留下来，其是一种经典的检测蛋白质相互作用的方法。其实验过程比较简单，裂解细胞后，加入抗体，抗原被沉淀下来后洗涤，去除非特异性结合，再分析复合体。抗体可以是单克隆，也可以是多克隆。33．等电聚焦：是依据蛋白质分子的净电荷或等电点进行分离的技术。在等电聚焦过程中，电场所采用的载体两性电解质含有脂肪族多氨基多羧酸，可在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续pH梯度。蛋白质分子在一个载体两性电解质形成的连续而稳定的线性pH梯度中电泳，当蛋白质迁移到其等电点位置时，净电荷为零，在电场中不再移动。因此可将各种不同等电点性质的蛋白质分离开来。34．Southern杂交：是利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与其互补的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的技术。因为该技术由Southern于1975年创建，所以称为Southern印迹杂交技术。35．Northern杂交：指将RNA变性及电泳分离后，将其转移到固相支持物上，再与其互补的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定RNA分子的的量与大小。因该技术与DNA印迹技术相对应，故被称为Northern印迹杂交。36．聚合酶链式反应PCR：是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。37．基因芯片：指固定有寡核苷酸、基因组DNA或cDNA等的生物芯片。利用这类芯片与标记的生物样品进行杂交，可对样品的基因表达谱生物信息进行快速定性和定量分析。38．限制性片断长度多态性：基因组中存在着许多限制性核酸内切酶位点，当用某种或几种限制性核酸内切酶对某一段基因消化时，就会产生大小不同的特定片段，这些片段称为限制性片段。在同种生物不同个体中出现的不同长度限制性片段类型就称为限制性片段长度多态性。如果由于缺失、重排或核苷酸置换使DNA分子中原有的某种限制性核酸内切酶的识别位点发生改变，使原有的酶切位点消失或形成了新的酶切位点，于是用这种酶进行酶切后，生成的DNA片段的长度或数目随之发生改变。这种变化如与某种遗传病的基因有关，就可作为这种遗传病的诊断指标。39．单核苷酸多态性：指基因组水平上由于单个核苷酸位置上存在转换或颠换等变异所引起的DNA序列多态性。SNP在人类基因组中广泛存在，是人类可遗传变异中最常见的一种。40.分子克隆：在分子水平上提供一种纯化和扩增特定DNA片段的方法。常含有目的基因，用体外重组方法将它们插入克隆载体，形成重组克隆载体，通过转化与转导的方式，引入适合的寄主体内得到复制与扩增，然后再从筛选的寄主细胞内分离提纯所需的克隆载体，可以得到插入DNA的许多拷贝，从而获得目的基因的扩增。41.组成性基因表达：无论表达水平高低，管家基因较少受环境因素影响，而是在个体各个生长阶段的大多数或几乎全部组织中持续表达，或变化很小。区别于其他基因，这类基因表达被视为组成性基因表达。42.管家基因：在生命的全过程都是必需的，在一个生物体的几乎所有细胞中持续表达的基因。43.干扰RNA：含22个左右核苷酸的双链RNA，参与RNA诱导的沉默复合物（RISC）的组成，这是一种多成分核酸酶，可使特异的mRNA降解，阻断该mRNA进行翻译。44.等电点：在某一pH的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，所带净电荷为零，呈电中性，此时溶液的pH称为该氨基酸的等电点。45.结构域：结构域是在二级结构或超二级结构的基础上形成三级结构的局部折叠区，一条多肽链在这个域范围内来回折叠，但相邻的域常被一个或两个多肽片段连结。通常由50-300个氨基酸残基组成，其特点是在三维空间可以明显区分和相对独立，并且具有一定的生物功能如结合小分子。模体或基序（motif）是结构域的亚单位，通常由2～3二级结构单位组成，一般为α螺旋、β折叠和环（loop）。46.蛋白质的四级结构：指蛋白质的多条多肽链之间相互作用所形成的更为复杂聚合物的一种结构形式，主要描述蛋白质亚基空间排列以及亚基之间的连接和相互作用，不涉及亚基内部结构。47.模体：表示具有特定功能的或作为一个独立结构域一部分的相邻的二级结构的聚合体，它一般被称为功能模体或结构模体，相当于超二级结构。模体和结构域一起组成了蛋白质的三级结构。二、单项选择题1.以下哪项属于真核生物基因的顺式作用元件：（C）A.内含子B.外显子C.增强子D.操纵子E.转座子2.原核生物与真核生物基因组比较，以下哪项是原核生物的特点：（A）A.基因密度高B.无操纵子结构C.有多基因家族和假基因D.多复制起点品E.有大量重复序列3.以下哪项是真核生物基因组结构特点（B）A．只有一个复制起点B.有大量重复序列C.大部分是编码序列D.有操纵子结构E.转录的RNA为多顺反子4.增强子的作用是（B）A.增强DNA复制B.增强基因转录C.增强基因稳定性D.增强RNA的稳定性E．被RNA聚合酶识别结合5.以下哪项是原核生物基因组的结构特点（C）A.由DNA或RNA组成B.有单链、双链之分C.操纵子结构D.与组蛋白结合E.基因重叠6.以下哪项属于启动子元件（C）A.内含子B.外显子C.TATA盒D.终止子E.CAAT盒7.下列关于启动子的论述正确的是下列关于启动子的描述正确的是：（C）A．可以表达基因产物B．能专一地与阻遏蛋白结合C．是RNA聚合酶的结合部位D．是DNA聚合酶的结合部位E.是结构基因8.不属于真核基因表达调控的顺式作用元件的是：（C）A．启动子B．增强子C．操纵子D．沉默子E.反应元件9.由AATAAA和富含GT或T序列共同组成的顺式作用元件是（D）A.启动子B.增强子C.反应元件D.加尾信号E.沉默子10.有关真核基因转录调控的反式作用因子描述不正确的是（C）A.包括基本和特异性转录因子B.通常含有DNA结合结构域C.基因组上一段DNA序列D.通常还有与其它蛋白结合的结构域E.含有转录活化域11.下列哪项不属于真核基因转录调控的顺式作用元件（D）A.启动子B.增强子C.TATA盒D.一种RNAE.沉默子12.有关基因表达描述错误的是（A）A.其过程总是经历基因转录及翻译的过程B.某些基因表达经历基因转录及翻译等过程C.某些基因表达产物是蛋白质分子D.某些基因表达产物不是蛋白质分子E.某些基因表达产物是RNA分子13.关于管家基因叙述错误的是（C）A．在生物个体的几乎所有细胞中持续表达B．在生物个体的几乎各生长阶段持续表达C．在一个物种的几乎所有个体中持续表达D．在生物个体的某一生长阶段持续表达E．在生物个体全生命过程的几乎所有细胞中表达14.大多数基因表达调控的最基本环节是（C）A.复制水平B.转录水平C.转录起始水平D.转录后加工水平E.翻译水平15.当培养基内色氨酸浓度较大时，色氨酸操纵子处于（B）A.诱导表达B.阻遏表达C.基本表达D.组成表达E.协调表达16.顺式作用元件是指（E）A.基因的5侧翼序列B.基因的3侧翼序列C.基因的5、3侧翼序列D.基因5、3侧翼序列以外的序列E.具有转录调节功能的特异DNA序列17.一个操纵子通常含有（B）A.一个启动序列和一个编码基因B.一个启动序列和数个编码基因C.数个启动序列和一个编码基因D.数个启动序列和数个编码基因E.两个启动序列和数个编码基因18.反式作用因子是指（D）A.具有激活功能的调节蛋白B.具有抑制功能的调节蛋白C.对自身基因具有表达调控的蛋白D.对另一基因具有表达调控的蛋白E.对另一基因具有功能的调节蛋白19.阻遏蛋白结合乳糖操纵子的（B）A、P序列B、O序列C、CAP结合位点D、I基因E、Z基因20.对大多数基因来说，CpG序列甲基化（A）A、抑制基因转录B、促进基因转录C、与基因转录无关D、对基因转录影响不大E、以上都不是21.别乳糖对乳糖操纵子的作用是（C）A.作为阻遏物结合于操纵基因B.作为辅阻遏物结合于阻遏蛋白C.使阻遏蛋白变构而不能结合DNAD.抑制阻遏基因的转录E.使RNA聚合酶变构而活化22.有关操纵子学说的正确论述是（B）A.操纵子调控系统是真核生物基因调控的主要方式B.操纵子调控系统是原核生物基因调控的主要方式C.操纵子调控系统由结构基因、启动子和操纵基因组成D.诱导物与操纵基因结合启动转录E.诱导物与启动子结合而启动转录23.属于反式作用因子的是（E）A.启动子B.增强子C.终止子D.RNA聚合酶E.转录因子24.RNA聚合酶结合于操纵子的（E）A.结构基因起始区B.阻遏物基因C.诱导物D.阻遏物E.启动子25.增强子是（D）A.特异性高的转录调控因子B.真核生物细胞内的组蛋白C.原核生物的启动子在真核生物中的别称D.增强启动子转录活性的DNA序列E.在结构基因的5'-端的DNA序列26.下列哪些不是操纵子的组成部分（A）A.阻遏蛋白B.启动子C.操纵基因D.结构基因E.Pribnow盒27.转录前起始复合物是指（C）A.RNA聚合酶与TATAAT序列结合B.RNA聚合酶与TATA序列结合C.各种转录因子与DNA模板、RNA聚合酶结合D.σ因子与RNA聚合酶结合E.阻遏物变构后脱离操纵基因复合物28.下述关于管家基因表达的描述最确切的是（B）A.在生物个体的所有细胞中表达B.在生物个体生命全过程几乎所有细胞中持续表达C.在生物个体生命全过程部分细胞中持续表达D.特定环境下，在生物个体生命全过程几乎所有细胞中持续表达E.特定环境下，在生物个体生命全过程部分细胞中持续表达。29.紫外线照射引起DNA损伤时，细菌DNA修复酶基因表达增强，这种现象被称为（A）A.诱导B.阻遏C.基本的基因表达D.正反馈E.负反馈30.顺式作用元件的最确切定义是（B）A.TATA盒和CCAAT盒B.具有调节功能的各种DNA序列C.具有调节功能的5’侧翼序列D.具有调节功能的3’侧翼序列E.所有非编码序列31.反式作用因子是（A）A.转录调节蛋白B.RNA聚合酶C.DNA聚合酶D.DNA酶IE.RNA酶32.构成最简单的启动子的常见功能组件是（A）A.TATA盒B.CAAT盒C.GC盒D.上游调控序列（UAS）E.以上都不是33.关于转录调节因子叙述错误的是（A）A．所有转录因子结构均含有DNA结合域和转录激活域B．有些转录因子结构可能含有DNA结合域或转录激活域C．通过DNA-蛋白质或蛋白质-蛋白质相互作用发挥作用D．转录因子调节作用是DNA依赖的或DNA非依赖的E．大多数转录因子的调节作用属反式调节34.DNA聚合酶Ⅰ大片段不具有下面哪些功能：（C）A.5ˊ→3ˊ聚合酶活性B.3ˊ→5ˊ核酸外切酶活性C.5ˊ→3ˊ核酸外切酶活性D.补齐双链DNA的3ˊ末端E.3ˊ末端标记35.质粒：（B）A不能在细菌体内进行自我复制B是存在于细菌和某些真核生物染色体外的双链环状的DNA分子C能容纳大于10kb的外源DNA片段D有限制性内切酶的多个切点E能够溶解细菌36.大肠杆菌表达载体中不含有：（E）A复制起始位点B抗性基因C克隆位点D启动子E增强子37.在进行蓝-白筛选时，pUC载体的lacZ基因位点插入外源DNA，转化细菌后插入了外源DNA的重组质粒的：（B）A细菌不能在含氨苄青霉素的培养板上生长B细菌在含有X-gel和诱导剂IPTG的琼脂培养板上形成白色菌斑C细菌在含有X-gel和诱导剂IPTG的琼脂培养板上形成蓝色菌斑D细菌在含有X-gel和诱导剂IPTG的琼脂培养板上形成透明的无色菌斑E无菌落形成38.校正和置换致病基因是用正常的基因整合入细胞中的（A）A．基因组B．线粒体C．蛋白质D．细胞质E．RNA39.基因转移的生物学方法是以什么作为基因转移系统（B）A．质粒载体B．病毒载体C．脂质体D．粘粒E．磷酸钙40.有关核酶的哪种表述是不正确的（E）A．具有引导序列B．具有锤头状结构C．切断目的mRNA而自身没有消耗D．核酶两端的引导序列与靶分子序列互补E．使mRNA不能转录41.将外源治疗性基因导入哺乳动物细胞的方法不包括（D）A．显微注射法B．电穿孔法C．DEAE-葡聚糖法D．MgCI2沉淀法E．病毒介导的基因转移42.紫外线照射使DNA分子碱基之间形成二聚体,其中最常见的形式是（D）A.C-CB.C-TC.T-UD.T-TE.U-C43.E.coli核苷酸切除修复过程中，UvrA的作用是（B）A.识别损伤部位B.解旋双链C.3’末端内切D.5’末端内切E.DNA合成44.有关Sanger测序描述正确的是（A）A.ddNTP底物带来了延伸终止B.利用高温终止延伸反应C.以RNA链合成反应为基础D.反应底物为dNTP或NTPE.四个延伸终止反应可合并进行45.有关DNA序列自动分析技术描述正确的是（C）A.电泳分离步骤可省略B.四个延伸终止反应必须独立进行C.ddNTP分别采用了四种不同荧光标记D.荧光染料标记在引物E.不需要DNA聚合酶46.有关核酸分子杂交描述正确的是（A）A.探针是核酸B.不能用于基因表达定量研究C.探针不须与待测核酸互补D.不能用于基因的结构分析E.探针多是双链核酸47.Southern印迹杂交是（A）A.分析RNA的技术B.用于DNA的定性或定量研究C.只能用于基因突变分析D.利用了DNA聚合酶ⅠE.不需要电泳分离48.Northern印迹杂交是（B）A.用限制性核酸内切酶消化待测核酸B.可鉴定特定mRNA的含量和大小C.将探针转移到固相支持物上D.分析DNA的技术E.不需要电泳分离49.有关核酸分子杂交描述错误的是（C）A.可以在组织切片上直接进行B.主要用于核酸的检测C.也可用于蛋白质的检测D.斑点杂交无需电泳分离E.可用于核酸拷贝数的检测50.有关PCR描述正确的是（E）A.需要DNA限制性核酸内切酶B.退火是为了模板复性C.退火的温度越低越好D.延伸的温度越高越好E.引物浓度要适中51.PCR的引物是（B）A.一段RNA序列B.限定了PCR产物的长度C.可以无限长D.3?端可以任意修饰E.3?端可以互补重叠52.PCR的产物是（D）A.一段单链DNAB.与循环数呈3的指数倍增长C.只取决于模板D.产量与初始模板数有关E.模板的完全拷贝53.TaqDNA聚合酶是（E）A.具有3→5聚合酶活性B.具有3→5外切酶活性C.依赖RNA模板D.活性非依赖于Mg2+E.具有较高的热稳定性54.以下哪项可以做PCR扩增中的模板:（B）A.dNTPB.DNA片段C.RNA片段D.蛋白质E.肽核酸55.有关PCR引物描述错误的是（C）A.为一段核酸序列B.限定了产物的长度C.与反应的特异性无关D.不能太长E.引物之间不应有互补56.可用于分析基因转录水平变化的是（B）A.Southernblot杂交B.RT-PCRC.PCR-SSCPD.DNA测序E.Western免疫印迹57.以下不属于蛋白质组功能模式研究技术的是（C）A.双向凝胶电泳B.质谱技术C.酵母双杂交D.生物信息学E.定量蛋白质组学58.有关基因诊断描述错误的是（E）A.是对基因结构或表达异常的检测B.检测对象包括DNA或RNAC.可以利用连锁的遗传标记进行间接诊断D.靶基因包括病原微生物的特定基因E.仅适合遗传病的诊断59.利用几根毛发进行基因诊断主要体现了基因诊断的哪项特点（C）A．高特异性B.应用广泛性C.高灵敏性D.早期诊断性E.唯一性60.下列方法不属于基因诊断范畴的是（A）A．光学显微镜下观察到镰刀型红细胞推测患者可能罹患镰状细胞贫血病B．以古生物化石标本中残液为模板进行多态性位点相关的PCR以判别生物种类C．用RT-PCR对乙肝病毒携带者进行病毒复制水平检测D．用反向点杂交方法对高风险家庭进行β-珠蛋白生成障碍性贫血的产前诊断E．用基因表达芯片分析肿瘤相关基因表达变化61.常用核酸分子杂交技术不包括（C）A.Southern印迹杂交B.Northern印迹杂交C.Western印迹杂交D.菌落原位杂交E．反向斑点杂交62.有关间接基因诊断描述正确的是（E）A.突变基因的异常结构检测B.针对是基因的表达产物C.比直接诊断效果好D.完全可以替代直接诊断E.利用连锁遗传标记进行连锁分析63.当点突变没有带来限制性酶切位点的改变时，不可以采用的诊断技术是（B）A.测序B.RFLPC.PCR-ASOD.AS-PCRE.核酸分子杂交64.导致特异性限制性内切酶位点改变的基因点突变最常采用的基因诊断方法是（D）A．PCRB.序列分析C.PCR-SSCP分析D.限制性酶谱分析E.核酸杂交65.使用了限制性核酸内切酶的技术是（B）A.寡核苷酸探针杂交B.RFLPC.RT-PCRD.DNA测序E.Westernblot66.有关基因诊断的描述正确的是（D）A.仅限于对基因突变的检测B.不可以利用连锁的遗传标记进行C.致病基因未知时无法进行D.可以检测基因的表达产物E.不适应于病毒性疾病的诊断三、简答题1．列举几种真核基因的顺式作用元件。答：（1）启动子：Hogness盒，CAAT盒；（2）增强子：SV40病毒中，位于早期启动子5ˊ上游约200bp，内含2个72bp的重复序列，其核心序列为GGTGTGGAAAG；（3）沉默子：SV40中的AGGTTTTTT序列为终止转录调控元件。2．简述基因克隆的主要过程。DNA导入受体细胞；④DNA重组体的筛选和鉴定；⑤DNA重组体的扩增、表达和其他研究。3．简述乳糖操纵子的结构。答：编码β-半乳糖苷酶、半乳糖苷通透酶和硫代半乳糖苷转乙酰基酶的基因称为结构基因，结构基因加上调控元件：启动子和操纵基因，即构成乳糖操纵子。4.简述RNA干扰的作用机制。答：RNA干扰包括起始阶段和效应阶段。在起始阶段，加入的小分子RNA被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰RNA片段。证据表明；一个称为Dicer的酶，是RNaseIII家族中特异识别双链RNA的一员，它能以一种ATP依赖的方式逐步切割由外源导入或者由转基因，病毒感染等各种方式引入的双链RNA，切割将RNA降解为19-21bp的双链RNAs(siRNAs)，每个片段的3’端都有2个碱基突出。在RNAi效应阶段，siRNA双链结合一个核酶复合物从而形成所谓RNA诱导沉默复合物（RNA-inducedsilencingcomplex,RISC）。激活RISC需要一个ATP依赖的将小分子RNA解双链的过程。激活的RISC通过碱基配对定位到同源mRNA转录本上，并在距离siRNA3’端12个碱基的位置切割mRNA。5.上游启动子元件是什么答：A合上游的一些特定的A序列，反式作用因子可与这些元件结合，调控基因转录的效率。6.GT-AG法则是什么答：真核生物基因的内含子5′端大多数是以GT开始，3′端大多数是以AG结束，构成RNA剪接的识别信号。7.蓝-白筛选的原理。答：有些载体含有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和氨基端145个氨基酸的编码序列，这个编码区中插入了一个多克隆位点，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶羧基端部分序列的宿主细胞。宿主和载体编码的β-半乳糖苷酶片段各自均无酶活性，但它们可以互补形成具有酶学活性的蛋白质，使X-gal转化成蓝色的代谢产物，出现蓝色的菌落（菌斑）。如果在多克隆位点上插入外源DNA片段，将使载体的lacZ基因灭活，不能互补形成有活性的β-半乳糖苷酶，结果菌落（菌斑）呈现白色。由于这种颜色标志，重组克隆和非重组克隆的区分一目了然，这种筛选方法称为“蓝-白筛选”。8.真核生物基因组有哪些特点答：每一种真核生物都有一定的染色体数目；远大于原核基因组，结构复杂,基因数庞大；真核生物基因转录为单顺反子；有大量重复序列;真核基因为断裂基因;非编码序列多于编码序列;功能相关基因构成各种基因家族。9.PCR反应条件的优化应注意哪些环节？

答：变性温度和时间：92-95℃，富含G和C的序列，可适当提高，但过高或时间过长都会导致酶活性损失；

退火温度与时间：引物中G、C含量高、长度长并与模板完全配对时，应提高温度。温度越高，产物特异性越高，通常37-55℃、1-2分钟；

延伸温度和时间：72℃，接近Taq酶的最适75℃；延伸时间过长会导致产物非特异性增加。但对低浓度的目的序列，则可适当增加时间；

循环次数：循环过多，非特异性产物大量增加10.用于基因表达定量研究的方法有哪些？

答：蛋白表达水平的研究：定量检测分析：westernbiltting、ELISA、HPLC蛋白质功能分析：蛋白质亚细胞定位分析：荧光免疫技术；蛋白质相互作用研究：酵母双杂交、免疫共沉淀、荧光共振能量转移；酶活性检测：ELISA、HPLC。mRNA表达水平检测：半定量RT-PCR，Northernblot，实时荧光定量PCR。11.同一生物不同的组织细胞的基因组成和表达是否相同为什么

答：基因表达调控具有时间和空间特异性，在多细胞生物，个体发育的各个阶段，基因表达严格按细胞分化、个体发育的顺序开启或关闭；在同一生长发育阶段，基因表达在不同组织细胞空间顺序出现，基因表达不相同。12.与原核基因结构相比，真核基因结构有何特点？答：真核生物与原核生物基因组特点的异同：⑴真核生物基因分布在多个染色体上，而原核生物只一个染色体；⑵真核生物基因组远大于原核生物基因组；⑶真核生物细胞中DNA与组蛋白和大量非组蛋白结合，并有核膜将其与细胞质隔离，结果真核细胞的转录和翻译在时间上和空间上都是分离的，而原核细胞的基因转录和翻译是同步的；⑷真核生物的基因是不连续的，中间存在不被翻译的内含子序列，而原核生物几乎每一个基因都是完整的连续的DNA片段；⑸真核生物基因组中非编码序列远多于编码序列；⑹真核生物基因组存在重复序列，重复次数从几次到几百万次不等；⑺真核生物基因组的复制起点多，缺少明显的操纵子结构，而原核生物基因组一般是一个复制子；⑻真核生物与原核基因组中存在转座因子。13.什么叫反式作用因子与顺式作用元件结合部位的结构形式有哪些

答：是指能直接或间接的识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上参与调控靶基因转录效率的蛋白质。大多数真核转录调节因子由某一基因表达后，可通过另一基因的特异的顺式作用元件相互作用，从而激活另一基因的转录，这种调节蛋白称反式作用因子。其DNA结构域的常见形式有：锌指结构、碱性亮氨酸拉链、碱性螺旋-环-螺旋。14.什么叫顺式作用元件常见的顺式作用元件有哪些

答：基因中能影响基因表达，但不编码RNA和蛋白质的DNA序列。顺式作用元件主要包括启动子、增强子、负调控元件等。15.列出5中常用的分子生物学技术并简述各自原理？答：PCR，Sanger双脱氧链终止法，等电聚焦，Southern杂交，Northern杂交。16.DNA芯片的原理？答：是以斑点杂交为基础建立的高通量检测基因表达的一种方法，它是通过某些特殊的微加工技术将大量已知序列的寡核苷酸或cDNA探针有序的固定于固相支持物表面作为探针，然后与标记的待测核酸进行杂交，通过对杂交信号的检测分析，获得待测核酸的各种序列及表达信息。17.PCR的基本原理及反应条件？答：基本原理是以待扩增的DNA分子为模板，以一对人工合成的、分别与模板的5’端及3’端互补的单链寡核苷酸作为引物，在耐热DNA聚合酶的催化下，按照半保留复制的原则合成两个子代DNA；接着以子代DNA为模板，再次进行合成，如此反复循环数十次，最终将原是模板放大数百万倍。18.Sanger双脱氧链终止法的原理?答：DNA合成是在DNA聚合酶的催化下，以单链或双链DNA模板，以四种2’-脱氧核苷三磷酸(dNTP)为底物，在引物或新和成子链的3’-OH末端依次连接上新的脱氧核苷一磷酸，使新生链不断延长。DNA分子中核苷酸是通过3’,5’磷酸二酯键相互连接。如果在底物中加入2’,3’-双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。那么当ddNTP掺入到新生链中时，由于ddNTP没有3’-OH，不能与其他dNTP上的磷酸集团形成磷酸二酯键，DNA新链的合成就会终止，此即为双脱氧末端终止法测序的基本原理。四、论述题1．双脱氧末端终止法测序的基本步骤包括哪些？答：1)分离待测核酸模板，模板可以是DNA，也可以是RNA，可以是双链，也可以是单链。2)在4只试管中加入适当的引物、模板、4种dNTP(包括放射性标记dATP，例如?32PdATP和DNA聚合酶（如以RNA为模板，则用反转录酶），再在上述4只管中分别加入一种一定浓度的ddNTP(双脱氧核苷酸)。

3)与单链模板（如以双链作模板，要作变性处理)结合的引物，在DNA聚合酶作用下从5’端向3’端进行延伸反应，32P随着引物延长掺入到新合成链中。当ddNTP掺入时，由于它在3’位置没有羟基，故不与下一个dNTP结合，从而使链延伸终止。ddNTP在不同位置掺入，因而产生一系列不同长度的新的DNA链。4)用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳同时分离4只反应管中的反应产物，由于每一反应管中只加一种ddNTP(如ddATP)，则该管中各种长度的DNA都终止于该种碱基(如A)处。所以凝胶电泳中该泳道不同带的DNA3’末端都为同一种双脱氧碱基。5)放射自显影。根据四泳道的编号和每个泳道中DNA带的位置直接从自显影图谱上读出与模板链互补的新链序列。2．真核mRNA选择性剪接的方式有那些举例说明其基本生物学意义是什么

答：（1）选择