选修1《生物技术实践》一轮复习知识梳理

选修1《生物技术实践》一轮复习知识梳理选修1《生物技术实践》一轮复习知识梳理8/8选修1《生物技术实践》一轮复习知识梳理选修1《生物技术实践》一轮复习知识梳理专题1传统发酵技术的应用课题1果酒和果醋和制作【补充知识】发酵1、见解：利用微生物或其他生物的细胞在有氧或无氧条件下生殖或积累其代谢产物的过程。传统发酵技术(都是采用自然发酵的工艺),如：传统的葡萄酒酿造，就是葡萄破裂入罐此后，不人为地增加任何菌种，靠葡萄自己携带的自然界的酵母菌，在葡萄浆或分别后的葡萄汁里自觉地生殖，最后发酵成葡萄酒。3、种类：⑴依据能否需要氧气分为：需氧发酵和厌氧发酵。⑵依据产生的产物可分为：酒精发酵、乳酸发酵、醋酸发酵等。一、基础知识（一）果酒制作的原理⑴果酒发酵的菌种：酵母菌，属于真核生物⑵酵母菌的代谢种类是：异养兼性厌氧型酶有氧时，进行有氧呼吸，反响式为：C6H12O6+6H2O+6O2→6CO2+12H2O+能量；大量生殖，无氧时，能进行酒精发酵，反响式为：

C6H12O6

酶→

2C2H5OH+2CO

2+能量。⑶酵母菌的生殖方式：出芽生殖(主要)分裂生殖孢子生殖.⑷酵母菌生殖的最适温度20℃左右，酒精发酵一般控制在18～25℃。⑸传统发酵技术所使用的酵母菌的根源：主假如附着于葡萄皮上的野生型酵母菌。也能够在果汁中加入人工培育的酵母菌。注意：①在发酵过程中,随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒表现深红色.②酒精发酵过程中，要保持缺氧、酸性环境。在缺氧呈酸性的发酵液中，酵母菌能够生长生殖，而绝大部分其他微生物都因无法适应这一环境而遇到限制。.酒精发酵过程中，要“先通气后密封”？“通气”的目的是使酵母菌进行有氧呼吸大量生殖。“密封”的目的是使酵母菌进行无氧呼吸产生酒精。（二）果醋制作的原理⑴菌种是醋酸菌，属于原核生物⑵醋酸菌的代谢种类为异养需氧型。有两条门路生成醋酸：直接氧化和以酒精为底物的氧化。当氧气、糖源都充分时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸，当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变成乙醛，再将乙醛变成醋酸，反响简式为C25酶OH+O2→CH32。HCOOH+HO⑶醋酸菌的生殖方式：生殖方式为二分裂.⑷醋酸菌最适生长温度为30～35℃。⑸菌种根源：到生产食醋的工厂或菌种珍藏中心购置，或从食醋中分别醋酸菌。注意：①醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即便但是短时间中止通入氧气，也会惹起醋酸菌死亡。只有在氧气充分时，才能进行旺盛的生命活动。变酸的酒表面察看到的菌膜就是醋酸菌在液面大量生殖形成的。②醋酸菌最适生长温度为30～35℃。，控制好发酵温度，使发酵时间缩短，又减少杂菌污染的机会。二、实验设计1、流程图优选葡萄

冲刷

榨汁

酒精发酵

醋酸发酵果酒

果醋充气口是在醋酸发酵时连结充气泵进行充气用的；使用该装置制酒时，应当封闭充气口；制醋时，应将充气口连结气泵，输入氧气。排气口是在酒精发酵时用来排出CO2的；排气口要经过一个长而波折的胶管与瓶身连结，其目的是防范空气中微生物的污染，其作用近似巴斯德的鹅颈瓶。出料口是用来取样的。2、制作实例实验资料葡萄、榨汁机、纱布、醋酸菌（或醋曲）、发酵瓶（如右图）、气泵、体积分数为70%的酒精等。实验步骤1．对发酵瓶、纱布、榨汁机等实验用具进行冲刷并消毒。榨汁机要冲刷洁净，并晾干。发酵瓶要冲刷干净，用体积分数为70%的酒精消毒，晾干待用。2．取葡萄500g(新鲜的葡萄)。3．用清水冲刷葡萄1－2遍除掉污物。（注意不要频频多次冲刷。）(榨汁前应当先冲刷，此后再除掉枝梗，以防范除掉枝梗时惹起葡萄损坏，增加被杂菌污染的机会。)4．用榨汁机榨取葡萄汁后，将其装入发酵瓶中。（假如没有合适的发酵装置，可用500mL的塑料瓶取代。但注入的果汁量不要超出塑料瓶整体积的2/3。要留出大概1/3的空间。）装入葡萄汁后，封闭充气口。5．将发酵瓶置于合适的温度（

18－25℃）下发酵。6．由于发酵旺盛期

CO2的产量特别多，因此需要实时

排气，以防范发酵瓶爆裂。（假如是简单发酵装置，每日

拧松瓶盖

2～4

次。进行排气。）7．10天后(10～12d左右)，取样查验。比方，能够查验酒味、酒精的含量、进行酵母菌的镜检等工作。果汁发酵后能否有酒精产生，能够用重铬酸钾来查验。在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反响表现灰绿色。检测时，先在试管中加入发酵液2mL，再滴入物质的量的浓度为3mol/L的H2SO43滴，振荡混匀，最后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液3滴。振荡试管，察看颜色.8．当果酒制成此后，可在发酵液中加入醋酸菌（或醋曲），此后移至30－35℃条件下发酵，时间控制在7～8d左右，合时用气泵向发酵液中充气。（假如没有充气装置，能够将瓶盖翻开，在瓶口上盖上纱布。以减少空气中尘土等的污染。）注意：⑴应当从发酵制作的过程进行全面的考虑防范发酵液被污染？如，榨汁机、发酵装置要冲刷洁净；每次排气时只需拧松瓶盖、不要完好揭开瓶盖等。⑵制葡萄酒时，温度控制在18～25℃发。温度是酵母菌生长和发酵的重要条件。20℃左右最合适酵母菌生殖。因此需要将温度控制在其最适温度范围内。制葡萄醋时，要将温度控制在30～35℃。醋酸菌是嗜温菌，最适生长温度为30～35℃，因此要将温度控制在30～35℃。⑶制葡萄醋时，醋酸菌是好氧菌，在将酒精变成醋酸时需要氧的参加，因此要合时向发酵液中充气。（二）练习2.提示：大规模生产时需要进行更加全面周详的考虑，如原料的根源与选择、菌种的培育与选择、发酵的设备、发酵条件的自动化控制，以及怎样严格控制杂菌污染；等等。其他，不论是葡萄酒或葡萄醋，实验时所检测的发酵液，其实不是商品意义上的产品。在实质生产中还需积淀过滤、灭菌装瓶等获得成品酒或醋。葡萄酒还需在必定设备和条件下（如橡木桶和地窖）进行后续发酵，以获得特定的风味和色彩。3.提示：需考虑厂房、设备投资、原资料采买、工人人数及薪资、产品种类、生产周期、销售渠道、收益等问题。课题2腐乳的制作一、基础知识腐乳制作的原理⑴腐乳的发酵有多种微生物(如青霉、酵母、曲霉、毛霉等)的共同作用，其中起主要作用的是毛霉，它是一种真核生物⑵新陈代谢种类是异养需氧型。营腐生生活。毛霉等微生物产生的蛋白酶能够将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶能够将脂肪水解成甘油和脂肪酸。与醇类作用生成酯，形成细腻、鲜香等豆腐乳特色。⑶生殖方式是孢子生殖。⑷发酵的温度为15～18℃⑸菌种根源：传统腐乳的生产中，豆腐块上生长的毛霉来自空气中的毛霉孢子。现代的腐乳生产是在严格的无菌条件下，将优秀毛霉菌种直接接种在豆腐上，这样能够防范其他菌种的污染，保证产品的质量。注意:优秀菌种的选择：不产生毒素；生长生殖快，且抗杂菌力强；生长的温度范围大，不受季节的限制；有蛋白酶、脂肪酶、肽酶等酶系；使产品气味正常优秀。二、实验设计1、实验流程让豆腐长出毛霉→加盐腌制→加乳汤装瓶→密封腌制。2、制作实例实验资料：含水量70%的豆腐，粽叶，盘子，盐，黄酒，米酒，糖，香辛料等，广口玻璃瓶，高压锅等。实验步骤1．将豆腐切成3cm×3cm×1cm若干块。所用豆腐的含水量为70％左右。用含水量过高的豆腐制腐乳，不易成形，且影响毛霉有氧呼吸。用含水量过少不利于毛霉生长，毛霉生长离不开水。样品水分含量（%）计算公式以下：(烘干前容器和样质量量-烘干后容器和样质量量)/烘干前样质量量2．将豆腐块平放在铺有干粽叶的盘内（粽叶能够供给菌种，并能起到保温的作用），每块豆腐等距离排放，周围留必定的缝隙。豆腐上面再铺上洁净的粽叶。天气干燥时，将平盘用保鲜膜包裹，但不要封严，省得湿度太高，不利于毛霉的生长。3．将平盘放在温度为

15～18℃的地方，毛霉渐渐生长，大概

5d

后，豆腐上生长的白毛是毛霉的

白色菌丝。严格地说是直立菌丝，在豆腐中还有爬行菌丝。4．当毛霉生长旺盛，并呈淡黄色时，去除保鲜膜及铺在上面的粽叶，使豆腐块的热量和水分能够快速消失，同时散去霉味，这一过程一般连续36h以上。5．豆腐凉透后，将豆腐间的连在一同的菌丝拉断，并齐整排在容器内，准备腌制。6．长满毛霉的豆腐块（以下称毛坯）分层摆放，分层加盐，并随层高而增加盐量，在凑近瓶口表面盐要铺厚一些，以防范杂菌污染，约腌制8d。（豆腐与盐质量分数比为5︰1）盐的作用⑴控制微生物的生长，防范腐败变质⑵析出水分，是豆腐变硬，在后期制作过程中不易酥烂.调味作用，给腐乳以必要的咸味⑷.浸提毛酶菌丝上的蛋白酶。盐的浓度过低，不足以控制微生物的生长，可能致使豆腐腐败；盐的浓度过高，会影响腐乳的口胃。注意：先发酵后加盐7．将黄酒、米酒和糖、香辛料等混淆制成卤汤。卤汤酒精含量控制在12%左右为宜。（卤汤直接关系到腐乳的色、香、味。）乳汤中酒的含量应控制在12%左右。酒精含量过低，蛋白酶的活性高，加速蛋白质的水解，而且不足以控制微生物生长，豆腐易腐败，难以成块。酒精含量过高，对蛋白酶的控制作用也越大，腐乳成熟的时间将会延伸。酒的作用：⑴防范杂菌污染以防腐⑵与有机酸联合形成酯，恩赐腐乳风味⑶.酒精含量的高低与腐乳后期发酵时间的长短有很大关系。香辛料的作用：⑴调味作用，不能够增加营养。⑵杀菌防腐作用⑶参加并促使发酵过程0卤汤和辅料后，要用胶条将瓶口密封；封瓶时，最好将瓶口经过酒精灯的火焰，防范瓶口被污染。。在常温下，一般六个月即能够成熟。注意、酿造腐乳的主要生产工序是将豆腐进行先期发酵和后期发酵。先期发酵的主要作用：1.创办条件让毛霉生长。2.使毛酶形成菌膜包住豆腐使腐乳成型。后期发酵主假如酶与微生物共同参加生化反响的过程，经过各样辅料与酶的缓解作用，生成腐乳的香气。注意：①用来腌制腐乳的玻璃瓶，刷洁净后要用开水消毒。②吃腐乳时，你会发现腐乳外面有一层致密的“皮”。这层“皮”是先期发酵时在豆腐表面上生长的菌丝（爬行菌丝），它能形成腐乳的“体”，使腐乳成形。“皮”对人体无害。课题3制作泡菜并检测亚硝酸盐含量一、泡菜制作原理菌种⑴乳酸菌常有种类：乳酸链球菌和乳酸杆菌。⑵代谢种类:异养厌氧型，在无氧条件情况下，将葡萄糖分解成乳酸。酶反响式为：C6H12O62C3H6O3+能量⑶生殖方式分裂方式:二分裂⑷培育温度:常温⑸散布：散布宽泛，空气、土壤、植物体表、人或动物的肠道⑹应用：常用于生产_酸奶。注意：含抗生素牛奶不能够生产酸奶的原因是抗生素能杀死乳酸菌。腌制条件时间温度食盐的用量水和盐为4∶1温度过高、食盐用量不足10％，腌制时间很短，简单造成细菌大量生殖，亚硝酸盐含量增加。3.亚硝酸盐⑵应用：在食品生产中常用作食品增加剂。⑶散布：自然界中散布宽泛。据统计，亚硝酸盐在蔬菜中的平均含量约为4mg/kg，咸菜中平均含量在7mg/k以上，而豆粉中的平均含量可达10mg/kg。⑷对人体的影响：饮食中的亚硝酸盐一般不危害人体健康，当人体摄入总量达0.3～0.5g时，会惹起中毒；当摄入总量达3g时，会惹起死亡。⑸我国卫生标准：国家规定肉制品中不超出30mg/kg，酱腌菜中不超出20mg/kg，婴儿奶粉中不超出2mg/kg。⑹绝大部分亚硝酸盐随尿液_排出，但在特定条件下，即合适的pH、温度和必定的微生物_作用，会转变成致癌物质亚硝胺。测定亚硝酸盐含量的原理（1）在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反响后，与N—1—萘基乙二胺盐酸盐联合形成玫瑰红_色染料。2）将显色反响后的样品与已知浓度的标准显色液目测进行比较，能够大概估计出泡菜中亚硝酸盐的含量。三、泡菜腌制过程泡菜坛的选择（1）应采用火候好、无裂纹、无砂眼、坛沿深、盖子吻合好的泡菜坛。（2）检查时可将坛口向上压入水中，看坛内有无渗水_现象。腌制1）过程：①将新鲜蔬菜开初办理成条状或片状。②泡菜盐水按清水和盐为4∶1质量比配制煮沸冷却备用。③预办理的新鲜蔬菜装至半坛时放入蒜瓣、生姜、香辛料等佐料，(假如希望发酵快些，可将蔬菜在开水中浸1分钟后入坛，再加上一些白酒。)并连续装至八成满。④倒入配制好的盐水，使盐水没过全部菜料。⑤盖上泡菜坛盖子，并用水密封发酵。以保证坛内为无氧环境。发酵时间遇到温度影响。注意：①水封闭坛口起着使坛内与坛外空气间隔的作用，空气中21％是氧气，这是最简单的造成无氧环境的方法。这样，坛内可利用蔬菜中天然存在的乳酸菌进行乳酸发酵。如不封闭，则会有好多需氧菌生长，蔬菜会腐化。②泡菜发酵分为：发酵先期：蔬菜刚入坛时，表面带入的微生物，主假如以不抗酸的大肠杆菌和酵母菌等较为活跃，它们进行异型乳酸发酵和稍微的酒精发酵产生好多的乳酸、酒精、醋酸和二氧化碳等，二氧化碳以气泡从水槽内放出，渐渐使坛内形成嫌气状态。发酵产物中除乳酸外，还有其他，如乙醇、CO2等称异型乳酸发酵。●泡菜坛内有时会长一层白膜，形成白膜是由于产膜酵母的生殖。●酵母菌是兼性厌氧微生物，泡菜发酵液营养丰富，其表面氧气含量也很丰富，合适酵母菌的生殖。发酵中期：由于先期乳酸的积累，pH下降，嫌气状态的形成，乳酸杆菌活跃进行活跃的同型乳酸发酵，乳酸积累pH达3.5~3.8.大肠杆菌、酵母菌、霉菌等的活动遇到控制。这一期为完好成熟阶段。发酵产物中只有乳酸，称为同型乳酸发酵。发酵后期：连续进行乳酸发酵，乳酸积累达1.2％以上时，乳酸杆菌的活性遇到控制，发酵速度渐渐变缓甚至停止。腌制1周左右即可开坛食用。也可随时加入新鲜蔬菜，不断取用。假如加入一些已经腌制过的泡菜汁更好，这相当于接种已经扩增的发酵菌，可减少腌制时间。一般在腌制10天后亚硝酸盐含量开始降低，故在10天此后食用最好。四、亚硝酸盐的测定测定步骤配制溶液→制备标准显色液→制备样品办理液→比色。1.配制溶液：对氨基苯磺酸溶液N-1－萘基乙二胺盐酸盐溶液亚硝酸钠溶液提取剂（氯化镉、氯化钡）：作用：增大亚硝酸钠的溶解度氢氧化铝乳液（作用：作吸附剂，充分使滤液脱色）2.5mol/l的氢氧化钠溶液（中和过多盐酸，创办碱性环境）2.制备标准显色液用移液管吸取0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.00ml、1.50ml亚硝酸钠溶液，分别置于50ml比色管中，再取1支比色管作为空白比较。并分别加入2.0ml对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3～5分钟后，再分别加入1.0mlN-1－萘基乙二胺盐酸盐溶液，加蒸馏水至50ml，混匀，察看亚硝酸钠溶液颜色的梯度变化。亚硝酸钠溶液对氨基苯磺酸溶液静置N-1-萘基乙二胺盐酸盐3.制备样品办理液的步骤是3～5分钟①称取0.4kg泡菜，粉碎榨汁，过滤得约200mL汁液。②取100mL汁液倒入500mL容量瓶，增加200mL蒸馏水和100mL提取剂，摇床振荡1h，再加40mL氢氧化钠溶液，最后用蒸馏水定容到500mL并立刻过滤获得滤液。③将滤液60mL移入100mL容量瓶，用氢氧化铝乳液（吸附脱色）定容后过滤，获得无色透明的滤液。汁液蒸馏水取泡菜榨汁过滤+4.比色：①将40mL滤液移入50mL比色管中，并编号。②分别依次加入2.0mL的对氨基苯磺酸溶液和1.0mL的N-1-萘基乙二胺盐酸溶液15min。③察看颜色变化，并与标准显色液比较，记录亚硝酸盐含量。亚（1）亚硝酸盐含量在第6天达到最顶峰。硝酸（2）亚硝酸盐含量高升的原因是由于泡菜在开始腌制时，坛内环境盐细菌的生殖（包括一些硝酸盐复原菌），这些细菌能够促使硝酸盐还含酸盐。量3）亚硝酸盐含量降低的原因：随着腌制时间的延伸，乳酸细菌也大量生殖，对硝酸盐复原菌产生必定的控制作用，使其生长生殖受到影响，同时形成的亚硝酸盐又被分解，造成泡菜中亚硝酸盐的含量又有所下降。

加氢氧化钠定容氢氧化铝乳液定容，并定容到50mL，混匀静置有利于某些原为亚硝发酵时间（d）④计算样品滤液（40mL）中亚硝酸盐含量。计算公式是：样品中亚硝酸盐含量（mg）取样量（40mL滤液的质量，Kg）专题2微生物的培育与应用课题1微生物的实验室培育一、基础知识培育基培育基：人们依据微生物对营养物质的不同样需求，配制出供其生长生殖的营养基质，是进行微生物培育的物质基础。1）培育基分类依据物理性质可分为液体培育基：应用于工业或生活生产半固体培育基：主要用于判断微生物运动力固体培育基：应用于微生物的分别、计数和判断注意：在液体培育基中加入凝结剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培育基中用作凝结剂）后，制成琼脂固体培育基。微生物在固体培育基表面生长，能够形成肉眼可见的菌落。依据菌落的特色能够判断是哪一种菌。②依据成分培育基可分为人工合成培育基：用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比率明确，常用于微生物的分别鉴定天然培育基：是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实质工业生产。③依据培育基的用途，可将培育基分为选择培育基：是指在培育基中加入某种化学物质，以控制不需要的微生物生长，促使所需要的微生物的生长。（如：加入青霉素分别获得酵母菌和霉菌）?加入高浓度食盐的培育基分别金黄色葡萄球菌?不加氮源的无氮培育基分别固氮菌?不加含碳有机物的无碳培育基分别自养型微生物?加入青霉素等抗生素的培育基分别导入了目的基因的受体细胞判断培育基：是依据微生物的特色，在培育基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴识不同样类其他微生物。（伊红和美蓝培育基可鉴识大肠杆菌）（2）培育基的化学成分一般都含有水、无机盐、碳源、氮源、四类营养成分。·碳源：能为微生物的代谢供给碳元素的物质。如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类（最常用的碳源，特别是葡萄糖）、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能够作为碳源。·氮源：能为微生物的代谢供给氮元素的物质。如-+N、NH、NO、NH4（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉233膏、蛋白胨（有机氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2。氮源主要用于合成蛋白质、核酸以及有的碳源只能是碳源;如CO有的碳源可同时是氮源。如NHHCO有的碳源可同时是能源，如葡萄糖23有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨含氮的代谢产物.●在供给上述几种主要营养物质的基础上，培育基还需要知足微生物生长对PH、特别营养物质（生长因子）以及氧气等的要求。比方：培育乳酸杆菌时需要在培育基中增加维生素；培育霉菌时需要将培育基的PH调至酸性；培养细菌时需要将培育基的PH调至中性或微碱性；培育厌氧微生物时需要供给无氧的条件。2.无菌技术1）获得纯净培育物的要点是防范外来杂菌的入侵。防范杂菌污染的方法主要包括以下四个内容：①对实验操作的空间、操作者的穿着和手，进行洁净和消毒。②将用于微生物培育的器皿、接种用具和培育基等用具进行灭菌。③为防范周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰周边进行。④实验操作时应防范已经灭菌办理的资料用具与周围的物品相接触。无菌技术除了用来防范实验室的培育物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？答：无菌技术还能够有效防范操作者自己被微生物感染。消毒是指派用较为平易的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。灭菌是指派用强烈的理化因素杀死物体内外全部的微生物，包括芽孢和孢子。●消毒和灭菌的比较比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒较为平易部分生活状态的微生物不能够灭菌强烈全部微生物能（2）实验室常用的消毒方法是煮沸消毒法，巴氏消毒法（关于一些不耐高温的液体），其他，人们也常使用化学药剂进行消毒，如用_酒精、氯气、等。常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。，其他，实验室里还用紫外线_或_化学药物（石碳酸或煤酚皂）进行消毒。灭菌方法：①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；③培育基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅

。④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯注意：无菌技术除了用来防范实验室的培育物被其他外来微生物污染外，

。还能够有效防范操作者自己被微生物感染。二、实验操作1.制备牛肉膏蛋白胨固体培育基（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培育基的方法步骤：计算→称量→溶化_→灭菌→倒平板注意：培育基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。能够用手触摸盛有培育基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就能够进行倒平板了。2）倒平板的过程①将灭过菌的培育皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培育基的锥形瓶，左手拔出棉塞。②右手拿锥形瓶，将瓶口快速经过分焰。（经过灼烧灭菌，防范瓶口的微生物污染培育基。）③用左手的拇指和食指将培育皿翻开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培育基（约10～20mL）倒入培育皿，左手立刻盖上培育皿的皿盖。④等待平板冷却凝结，大概需5～10min。此后，将平板倒