室内检验员专业技术知识之重量、活力等测定

室内检验员专业技术知识之重量、活力等测定1第十二章章重重量测定定

第一一节概概述述一、种子子千粒重重的含义义种子重量量测定是是指测定定一定数数量种子子的重量量,通常常是指测测定1000粒粒种子的的重量,,即千粒粒重。种子千粒粒重是指指种子质质量标准规定定水分的1000粒种种子的重重量,以以克为单单位。千粒重测测定原则则是从充充分混合合的净种子中随机数数取一定定数量的的种子,,称其重重量。2第一节概概述二、千粒重测测定目的的和意义义1.种子子千粒重重反映种种子的饱饱满程度度,是种种子质量量的指标标之一。。2.根据据千粒重重,可以以做到精精量播种种,节约约用种。。3.千粒粒重是作作物产量量构成的的要素之之一。3第二节测测定定程序一、测定定方法分为百粒法、、千粒法法和全量量法三种。二、百粒粒法测定定程序1.数取取试样::从净度度分析后后充分混混合的净净种子中中,随机机数取试试验样品品8个重重复,每每个重复复100粒。2.试样样称重::8个重重复分别别称重,,小数位位点保留留位数与与净度分分析中的的规定相相同。3.检查查重复间间的容许许变异系系数,计计算实测测千粒重重。4.换算算成规定定水分下下的千粒粒重。5.结果果报告。。4第二节测测定定程序三、千粒粒法测定定程序1.数取取试样::从净度度分析后后充分混混合的净净种子中中,随机机数取试试验样品品2个重重复,大大粒种子子每个重重复500粒,,中小粒粒种子每每个重复复1000粒。。2.试样样称重::2个重重复分别别称重,,小数位位点保留留位数与与净度分分析中的的规定相相同。3.检查查重复间间的容许许变异系系数,计计算实测测千粒重重.两份重量量的差数数与平均均数之比比不能超超过去5%,否则再做做一份重重复,直直至达到到要求..取差数数最小的的两份重重复平均均数来计计算千粒粒重。4.换算算成规定定水分下下的千粒粒重。p1525.结果果报告。。5第二节测测定定程序四、全量量变法测测定程序序1.数取取试样::数取净净度分析析后的全全部净种种子的种种子总粒粒数。2.试样样称重::小数位位点保留留位数与与净度分分析中的的规定相相同。3.换算算成规定定水分下下的千粒粒重。4.结果果报告。。6第十四章章生生活力的的四唑测测定实际工作作中如种种子贸易易时常需需要在短短时间内内掌握种种子批的的生活力力状况，，如果种种子处于于休眠状状态则难难以通过过发芽测测定得到到结果。。种子生活活力测定定可以满满足这一一需要，，四唑测定定可以测测定出休休眠种子子样品的的生活力力百分率率。四唑测定定方法于于1942年由德国国的G.Lakon教授发明明，第2次世界大大战期间间传入美美国。随随着四唑唑测定技技术的发发展，ISTA(国际种子子检验协协会)于1950年成立四四唑测定定技术委委员会，，致力于于种子四四唑测定定技术的的发展。。2003年出版《ISTA四唑测定定工作手册册》，列有120种农业和和122种林业种种、属的的四唑测测定方法法。7第一节概概述述一、生活活力概念念种子生活活力（seedviability）是是种子发发芽的潜潜在能力力或种胚胚具有的的生命力力。8第一节概概述述二、种子子生活力力测定的的意义1.可以测定定休眠种种子的生生活力2.快速预测测种子发发芽能力力种子贸易易中，常常因时间间紧迫，，不可能能采用正正规的发发芽试验验来测定定发芽力力，这是是因为发发芽试验验所需的的时间更更长。林木种子子可用生生活力代代替发芽芽力。9第一节概概述述三、四唑唑染色测测定的原原理在种子组组织活细细胞内脱氢酶的作用下下，无色色的氯化三苯苯基四氮氮唑，接收活活种子代代谢过程程中呼吸吸链上的的氢，在在活细胞胞里变成成还原态态的红色色、稳定定、不扩扩散的三三苯基甲甲月替替(TriphenylFormazam)。可根据据四唑染成成的颜色色和部位位，区分分种子红色的有生活活力部分分和无色的死亡部部分。102，3，5-氯化三苯苯基四氮氮唑三苯基甲甲月替(无色)(红色)11第一节概概述述种子有无无生活力力主要取取决于胚胚和(或)胚乳(或配子体体)坏死组织织的部位位和面积积的大小小，而不不一定在在于颜色色的深浅浅。颜色的差差异主要要是将健健全的、、衰弱的的和死亡亡的组织织判别出出来。根根据以上上理由和和所用指指示剂，，把这种种测定称称为“局局部解剖剖图形的的四唑测测定”(topographicaltetrazoliumtest)。这就是说说，是根根据种子子胚和活活营养组组织局部部解剖染染色部位位及颜色色状况，，鉴定种种子胚的的死亡部部分，查查明种子子死亡的的原因。。12第一节概概述述四、四唑唑测定适适用的范范围收获后需需马上播播种的种种子；具有深休休眠的种种子；发芽缓慢慢的种子子；要求估测测发芽潜潜力的种种子。另外，也也适用于于测定发发芽末期期个别种种子的生生活力，，特别是是怀疑有有休眠时时；测定定已萌发发种子，，或收获获期间存存在的不不同类型型和/或加工的的损伤（（热害、、机械损损伤或虫虫蛀等））种子；；解决发发芽试验验中存在在的问题题，如不不清楚不不正常幼幼苗产生生的原因因或怀疑疑杀菌剂剂的处理理效果等等。13第一节概概述述五、四唑唑测定方方法的特特点四唑测定定是一种种世界公公认、广广泛应用用、实用用方便、、省时快快速、结结果可靠靠的种子子生活力力检验方方法。具具体地说说具有以以下几个个特点：：1.原理可靠靠，结果果准确。。如能正确确使用四四唑测定定方法，，四唑测测定结果果与发芽芽率误差差一般不不会超过过3%～5%。2.不受休眠眠限制。。3.方法简便便、省时时快速。。4.成本低廉廉。四唑测定定也有其其缺陷：：如对种种子检验验员经验验和技能能要求较较高；结结果不能能提供休休眠的程程度；处处理种子子不会像像发芽试试验能反反映药害害情况。。14第二节试试剂剂的配制制和仪器器设备一、试剂剂的配制制1．四唑溶溶液2．磷酸缓缓冲液3．乳酸苯苯酚透明明液采用乳酸酸苯酚透透明液，，是使小小粒豆类类和牧草草种子经经四唑染染色后使使种皮、、稃壳或或胚乳变变为透明明,以便透过过这些部部分清楚楚地观察察其胚主主要构造造的染色色情况。。15第二节试试剂剂的配制制和仪器器设备二、仪器器和设备备四唑测定定的主要要仪器设设备与发发芽试验验设备相相同，可可采用其其设备：：如电热热恒温箱箱或发芽芽箱、冰冰箱。四唑测定定需配备备的小器器具有：：种子切切割工具具如解剖剖刀或刀刀片、小小针、切切割垫板板等；种种子预湿湿需要纸纸、毛巾巾、烧杯杯等器具具；染色色时，要要准备有有盖的不不同规格格的染色色盘、棕棕色加液液器、镊镊子、吸吸管等；；观察器器具如体体视显微微镜或放放大镜；；以及保保护器具具如手套套、眼睛睛保护镜镜、废液液处理容容器等。。16第三节四四唑唑测定程程序一、试验验样品的的来源数数取试验样品品来源必必须是净净种子。。净种子可可以从净净度分析析后的净净种子中中随机数数取，也也可以从从送验样样品中直直接随机机数取。。一般随随机数取取100粒种子，，2～4个重复或或少于100粒的若干干副重复复。如果是测测定发芽芽末期休休眠种子子的生活活力，则则可单用用试验末末期的休休眠种子子。委托检验验可以直直接从经经充分混混合的种种子样品品中随机机数取种种子。17第三节四四唑唑测定程程序二、种子子预处理理在正式测测定前，，对所测测种子样样品需经经过预处处理（预措预湿湿），其主主要目的的是使种种子加快快和充分分吸湿，，软化种种皮，方方便样品品准备和和促进活活组织酶酶系统的的活化，，以提高高染色的的均匀度度、鉴定定的可靠靠性和正正确性。。18第三节四四唑唑测定程程序预措是指在种种子预湿湿前除去去种子的的外部附附属物和和在种子子非要害害部位弄弄破种皮皮，如水水稻种子子需脱去去内外稃稃壳，豆豆科硬实实种子刺刺破种皮皮等，但但须注意意，预措措不能损损伤种子子内部胚胚的主要要构造。。绝大多多数种子子不须进进行预措措处理，，但有一一些种子子在预湿湿前要进进行预措处理理。预湿是四唑染染色测定定的必要要步骤。。预湿方方法目前前常用的的有以下下两种方方法：19第三节四四唑唑测定程程序1．缓慢润润湿缓慢润湿湿是按种种子发芽芽试验所所采用方方法，将将种子放放在纸床床上或纸纸巾间，，让其缓缓慢吸湿湿。该法法适用于于那些直直接浸在在水中容容易破裂裂和损伤伤的种子子，以及及已经劣劣变的种种子或过过分干燥燥的种子子。缓慢润湿湿可采用用下面两两种方法法：①纸卷或纸纸间预湿湿②纸床上预预湿20第三节四四唑唑测定程程序2．水中浸浸渍水中浸渍渍是将种种子完全全浸入水水中，种种子吸水水快、均均匀，并并可缩短短预湿时时间。该该法适用用于种子子直接浸浸入水中中不会造造成组织织破裂损损伤，并并不会影影响鉴定定结果的的种子种种类，包包括水稻稻、小麦麦、大麦麦、燕麦麦、黑麦麦草、黑黑麦、玉玉米等，，详见表表14-l。浸种温温度一般般采用20～30℃或30℃水温。21第三节四四唑唑测定程程序三、染色色前的样样品准备备为了使四四唑溶液液快速和和充分渗渗入种子子的全部部活组织织，加快快染色反反应和正正确鉴定定胚的主主要构造造，大多多数种子子在染色色前必须须采用适适当的方方法使胚胚的主要要构造和和(或))活的营营养组织织暴露出出来。22第三节四四唑唑测定程程序1．不须样样品准备备种皮渗水水性良好好的豆类类种子，，在四唑唑溶液里里染色时时，就能能随着四四唑溶液液的渗入入而吸胀胀，并在在染色后后剥去种种皮就可可正确鉴鉴定，这这类种子子不须样样品准备备。2．沿胚纵纵切3．近胚纵纵切23第三节四四唑唑测定程程序4．上半粒粒纵切5．斜切种种子6．剥去种种皮7．横切胚胚轴和盾盾片8．平切果果种皮和和胚乳，，暴露出出胚的构构造9．穿刺或或切开胚胚乳10．切去种种子基端端11．横切胚胚乳24图14-1一些常见见作物种种子的准准备示意意图1．禾谷类类和禾本本科牧草草种子通通过胚和和约在胚胚乳四分分之三处处纵切。。2．燕麦属属(Avena)和禾本科科牧草种种子靠近近胚部横横切。3．禾本科科牧草种种子通过过胚乳末末端部分分横切和和纵切。。4．禾本科科牧草种种子刺穿穿胚乳。。5．通过子子叶末端端一半纵纵切，如如莴苣属属(Lactuca)和菊科(Asteraceae)中的其他他属。6．纵切面面表明似似上述第第5种方式进进行纵切切时的解解剖刀部部位。7。沿胚的的旁边纵纵切[伞形科(Apiaceae)中的种和和其他具具有直立立胚的种种]8．针叶树树种子沿沿胚旁边边纵切。。9．在两端端横切，，打开胚胚腔，并并切去小小部分胚胚乳(配子体组组织)o25第三节四四唑唑测定程程序四、四唑唑染色四唑溶液液必须完完全淹没没种子，，溶液不不能直接接露光，，因为光光线可能能使四唑唑盐类还还原而降降低其浓浓度，影影响染色色效果。。按表14-1（GB/T3543..7-1995表1）的要求求，将经经过样品品准备或或不须准准备的规规定数量量种子分分别放入入四唑溶溶液里染染色。小小粒种子子可用直直径6cm培养皿，，大、中中粒种子子可用9cm培养皿或或更大的的容器，，特别细细小的种种子可包包在滤纸纸内，分分别放入入容器里里。然后后加入适适宜浓度度的四唑唑溶液，，移置一一定温度度的恒温温箱内进进行染色色反应。。26第三节四四唑唑测定程程序五、鉴定定前处理理为了确保保鉴定结结果的正正确性，，还应将将已染色色的种子子样品，，加以适适当的处处理，再再进一步步使胚的的主要构构造和活活的营养养组织明明显地暴暴露出来来，以便便观察鉴鉴定。1．不须处处理，直直接观察察适用于染染色前已已进行样样品准备备的整个个胚、摘摘出的胚胚中轴、、纵切或或横切的的胚等样样品。因因为这些些种子胚胚的主要要构造已已暴露在在外面，，所以不不须附加加处理，，就可直直接观察察鉴定。。27第三节四四唑唑测定程程序2．轻压压出胚，，观察鉴鉴定3．扯开开营养组组织，暴暴露出胚胚4．切去去一层营营养组织织，暴露露出胚和和活营养养组织5．沿胚胚中轴纵纵切，暴暴露胚的的构造6．沿种种子中线线纵切，，暴露出出胚和活活营养组组织28第三节四四唑唑测定程程序7．剥去半半透明的的种皮或或种子组组织，暴暴露出胚胚8．切去切切面碎片片或掰开开子叶，，暴露出出胚9．剥去种种皮和残残余营养养组织，，暴露出出胚10．乳酸苯苯酚透明明液的应应用加入2—4滴乳酸苯苯酚透明明液，适适当摇晃晃，使其其与种子子良好接接触，38℃恒温箱保保持30～60min，经清水水漂洗或或直接观观察。29第三节四四唑唑测定程程序六、观察察鉴定一般鉴定定原则是是，凡是是胚的主主要构造造及有关关活营养养组织染染成有光光泽的鲜鲜红色，，且组织织状态正正常的，，为有生生活力种种子。凡是胚的的主要构构造局部部不染色色或染成成异常的的颜色和和光泽，，并且活活营养组组织不染染色部分分已超过过二分之之一，或或超过容容许范围围，以及及组织软软化的，，完全不不染色或或染成无无光泽的的淡红色色或灰白白色，且且组织已已软化腐腐烂或异异常、虫虫蛀、损损伤的均均为无生生活力种种子。30

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789101112图14-2玉米种子子四唑染染色图谱谱1.有生活力力——胚全染成成深红色色。2.有生活力力——仅盾片两两端少部部不染色色。3.有生活力力仅盾片先先端及胚胚芽鞘先先端及少少部不染染色4.有生活力力——胚芽鞘先先端不染染色.5.有生活力力—胚芽鞘先先端及胚胚根顶端端2／3以下不染染色，种种子根区区染色6.无生活力力——胚根大部部不染色色，已波波及种子子根区。。7.无生活力力——胚芽全不不染色。。8.无生活力力——胚轴不染染色。9.无生活力力—盾片与胚胚轴连接接处不染染色。10.无生活力力——盾片两端端不染色色部份已已超过1／2。11.无生活力力——盾片1／2以上不染染色。12.无生活力力——胚全不染染色。31

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678910图14-3水稻种子子四唑染染色图谱谱1.有生活力力——胚全染成成深红色色（不染染部分属属胚芽鞘鞘和盾片片间隙））。2.有生活力力——盾片先端端染色稍稍浅。3.有生活力力盾片先端端及胚芽芽鞘先端端不染色色4.无生活力力——胚根全不不染色.5.无生活力力—胚芽先端端、胚芽芽鞘及盾盾片先端端染色较较浅。6.有生活力力——胚全染成成红色。。7.有生活力力——盾片全部部染色，，胚根胚胚芽鞘部部分染色色较浅。。8.无生活力力—盾片全不不染色。。9.无生活力力——胚大部分分染色较较浅。10.无生活力力——胚全不染染色。32

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56789图14-4棉花种子子四唑染染色图谱谱1.有生活力力——染色后将将子叶分分开的胚胚可见两两片子叶叶及怔根根均染成成红色。。2.有生活力力——胚全染成成深红色色3.无生活力力——胚根中段段不染色色。4.无生活力力——子叶关键键部位不不染色。。5.无生活力力——子叶基部部不染色色。6.无生活力力——胚根中部部很长一一段不染染色。7.无生活力力——胚根先端端不染色色，子叶叶内部大大部染色色很浅。。8.无生活力力——子叶大部部不染色色。9.无生活力力——胚全不染染色。33

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5678图14-5番茄种子子四唑染染色图谱谱1.有生活力力——胚全染色色。2.无生活力力——胚根基部部及子叶叶先端不不染色或或染色很很淡。3.无生活力力一—子叶基部部不染色色。4.无生活力力——子叶大部部染色很很淡。5.无生活力力——子叶全不不染色。。6.无生活力力——胚根先端端明显不不染色。。7.无生活力力——胚的中段段，包括括胚轴及及与之相相连的胚胚根及子子叶均不不染色8.无生活力力——胚全不染染色。34

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5678图14-6辣椒种子子四唑染染色图谱谱1.有发芽力力——胚全染色色。2.有发芽力力——片子叶顶顶端约1／2不染色，，另一片片全染色色。3.无发芽力力—胚根先端端不染色色，子叶叶中部有有一小段段染色很很浅。4.无发芽力力——子叶中段段不染色色。5.无发芽力力——子叶全不不染色。。6.无发芽力力——子叶基部部—端不染色色。7.无发芽力力——胚多处不不染色。。8.无发芽力力——胚全不染染色。35

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789101112图14-7油菜种子子四唑染染色图谱谱1、2.有生活力力——胚全染成成深红色色。3.有生活力力子叶顶端端有小于于1/3不染色4.无生活力力——胚根先端端及侧面面有大于于直径1/4的不染色色.5.无生活力力—胚根基部部不染色色，子叶叶极小部部分不染染色6.无生活力力——胚根一侧侧约1/2不染色。。7.无生活力力——胚根大部部分不染染色。8.无生活力力——子叶与胚胚轴相连连处不染染色。9.有生活力力—外方一枚枚子叶非非关键部部位部分分不染色色。10.无生活力力——外方一枚枚子叶染染色很浅浅。11.无生活力力——仅子叶的的一部分分染成浅浅红色，，其余全全部不染染色。12.无生活力力——胚全不染染色。case36第十四章章概述试剂的配制和仪器设备生活力概念种子生活力测定的意义四唑染色测定的原理四唑测定适用的范围四唑染色四唑测定方法的特点试剂的配制仪器和设备四唑测定程序试验样品的来源数取种子预处理染色前的样品准备鉴定前处理观察鉴定生活力的生化测定

37第十五章章活活力测定定种子活力力(seedvigor))是种子子质量的的重要指指标之一一,也是是反映种种用价值值的主要要组成部部分,与与种子田田间出苗苗质量密密切相关关。活力力的测定定经过几几十年的的研究，，已经取取得了重重大进展展。在美美国和欧欧洲，活活力测定定应用已已经很普普遍，许许多种子子公司把把活力测测定作为为常规的的检测项项目。38第一节概概述述一、种子子活力的的概念和和定义种子活力力不像种种子发芽芽率那样样是一个个单一的的测定特特性，而而是描述述种子出出苗不同同方面（（包括田田间和贮贮藏期间间）的综综合特性性。39第一节概概述述2004年出版的的《国际种子子检验规规程》将活力定定义为：：“种子活力力是指在在广泛的的环境条条件下，，决定可可接受发发芽率的的种子批批的活性性和性能能那些特特性的综综合表现现”。并作了进进一步的的阐述，，种子活活力不是是一种简简单的测测定概念念，而是是一种能能表达如如下有关关种子批批性能多多种特性性的综合合概念：：（1）种子发发芽和幼幼苗生长长速率和和整齐度度；（2）种子在在不利环环境条件件下的出出苗能力力；（3）贮藏后后，特别别是能保保持发芽芽力的性性能。高活力种种子批即即使在不不适宜的的环境条条件下，，仍具有有良好性性能的潜潜力。40第一节概概述述二、种子子活力的的重要意意义1．高活活力种子子的生产产优越性性种子活力力是种子子重要的的品质，，高活力力种子具具有明显显的生长长优势和和生产潜潜力。(1)提提高田间间出苗率率。(2)抵抵御不良良环境条条件。41第一节概概述述(3)增强对病病虫、杂杂草的竞竞争能力力。(4)抗寒力强强，适于于早播。。(5)节约播种种费用。。(6)增加作物物产量。。(7)提高种子子耐藏性性。可见，高高活力种种子对农农业生产产具有十十分重要要的意义义。42第一节概概述述三、活力力、生活活力和发发芽力的的区别及及关系1．种子生生活力是是指种子子发芽的的潜在能能力或种种胚具有有的生命命力，通通常用供供检样品品中活种种子数占占样品总总数的百百分率表表示。２．种子子发芽力是指种子子在适宜宜条什下下（检验验室控制制条件下下）长成成正常植植株的能能力，通通常用供供检样品品中长成成正常幼幼苗数占占样品总总数的百百分率，，即发芽率表示。43第一节概概述述《国际种子子检验规规程》指出，在在下列6种情况下下，如果果鉴定正正确，生生活力测测定和发发芽率测测定的结结果基本本是一致致：①无休眠、、无硬实实或通过过适宜的的预处理理破除了了休眠和和硬实；；②没有感染染或已经经过适宜宜的清洁洁处理；；③在加工时时未受到到不利条条件或贮贮藏期间间未用有有害化学学药品处处理；④尚未发生生萌芽；；⑤在正常或或延长的的发芽试试验中未未发生劣劣变；⑥发芽试验验是在适适宜的条条件下进进行的。。44第一节概概述述３．种子子活力简简单地说说就是指指高发芽芽率种子子批间在在田间表表现的差差异。由此可见见，种子子活力是是比发芽芽率更敏敏感的指指标，在在高发芽芽率的种种子批中中，仍然然表现出出活力的的差异。。通常高高发芽率率的种子子具有较较高活力力，但两两者不存存在正相相关。关于活力力和发芽芽之间的的关系,Isely已于1957年以图解解形式表表示（见见图15-1）。45百分率时间图15-2种子生活力与活力之间的关系○生活力●活力46第二节种种子活活力测定定方法分分类和要要求一、活力力测定方方法的分分类种子活力力测定方方法的种种类多达达数十种种。其分分类的方方法归纳纳起来不不外乎直直接法和和间接法法两类。。直接法是在检验验室条件件下模拟拟田间不不良条件件测定田田间出苗苗率的方方法，如如低温处处理是模模拟早春春播种期期的低温温条件；；砖砂（（砾）试试验是模模拟田间间板结土土壤或粘粘土地区区的条件件。间接法是在检验验室内测测定与田田间出苗苗率（活活力）相相关的种种子特性性的方法法，如测测定某些些生理生生化指标标（酶的的活性、、呼吸强强度等））及测定定生化劣劣变处理理后的发发芽率（（加速老老化试验验、人工工劣变试试验等））。47第二节种种子活活力测定定方法分分类和要要求现将ISTA和和AOSA推荐荐和建议议的活力力测定方方法及种种类简介介如下：：1．ISTA活活力测定定方法（（《活力力测定力力法手册册》，1995版）48第二节种种子活活力测定定方法分分类和要要求第一类是是推荐种子子活力测测定方法法，也是目目前《国际种子子检验规规程》已经列入入的方法法，包括括两种方方法：电导率测测定（conductivitytest）、加速老化化测定（（acceleratedageingtest）。这两两种推荐荐方法已已基本上上标准化化，将在在下面作作详细的的介绍。。49第二节种种子活活力测定定方法分分类和要要求第二类是是建议的种种子活力力测定方方法，包括七七种不同同类型的的方法：：①冷冻测定定（coldtest）；②低温发芽芽测定（（coolgerminationtest）；③人工控制制劣变试试验（controlleddeteriorationtest）；④复合逆境境活力测测定（complexstressingvigortest）；⑤希尔特纳纳试验（（hiltnertest）；⑥幼苗生长长测定（（seedlinggrowthtest）包括幼幼苗测量量和幼苗苗评定，，幼苗测测量包括括幼苗生生长测定定和幼苗苗生长速速率测定定，幼苗苗评定包包括卷纸纸法和砂砂法；⑦四唑测定定（tetrazoliumtest）包括剖剖面四唑唑法和糊糊粉层四四唑测定定两种方方法。50第二节种种子活活力测定定方法分分类和要要求2．AOSA(种子分析析者协会会)活力测定定方法（（《活力测定定手册》）AOSA于1983年颁发了了《活力测定定手册》，该手册册也包括括两类的的方法。。第一类是是广泛应应用的方方法：①幼苗生长长和评定定试验（（幼苗活活力分级级、幼苗苗生长速速率测定定发芽末末期幼苗苗长度和和干重））；②逆境试验验（包括括加速老老化试验验、低温温试验、、冷发芽芽试验））；③生化试验验（包括括四唑法法和电导导率法））。第二类是是推荐应应用的方方法：①幼苗生长长和评定定试验；；②逆境试验验（包括括砖砂试试验、渗渗透逆境境试验即即高渗试试验）；；③生化测定定（包括括呼吸测测定、谷谷氨酸脱脱羧酶（（GADA）活性测测定、ATP含量测定定）。AOSA所列方法法较多，，其中有有六种测测定方法法与ISTA规定的方方法基本本相同。。51第二节种种子活活力测定定方法分分类和要要求二、选用用活力测测定方法法的原则则和要求求1．选用原原则根据当地地土壤气气候条件件选用适适宜的方方法，如低温试试验适合合早春播播种季节节低温气气候条件件，不适适合于早早春温暖暖地区，，再如砖砖砂试验验适用于于粘土地地区或雨雨后土壤壤板结情情况，不不适用于于土壤较较为疏松松地区，，欧洲土土壤粘重重应用砖砖砂试验验较多，，而美国国则很少少应用，，仅作为为推荐方方法。根据作物物的特性性选用适适宜的方方法。如低温试试验和冷冷发芽法法适用发发芽期间间耐寒性性较差的的喜温作作物，如如玉米、、大豆等等，不适适用于耐耐寒性较较强的作作物，如如大麦、、小麦、、油菜等等。又如如电导率率测定是是豌豆种种子的典典型测定定方法，，其测定定结果与与田间出出苗率高高度相关关，但对对其他作作物种子子并非适适合，其其测定结结果与田田间出苗苗相关性性较差。。52第二节种种子活活力测定定方法分分类和要要求2．选用要要求①节约费用用，仪器器设备不不能太昂昂贵；②简单易行行，测定定技术不不太复杂杂，易于于推广；；③快速省时时，短期期内可获获得测定定结果；；④结果准确确，能真真实反映映一批种种子的活活力水平平，且与与田间出出苗率有有良好相相关；⑤重演性好好，在同同一检验验室不同同检验人人员或在在不同检检验室能能获得比比较一致致的结果果。53第二节种种子活活力测定定方法分分类和要要求三、活力力测定方方法的基基本要求求1．试样种种子试验样品品来源必必须是净净种子。。净种子子可以从从净度分分析后的的净种子子中随机机数取，，也可以以从送验验样品中中直接随随机数取取。除委托检检验外，，所需种种子数和和重复必必须随机机从种子子批的有有代表性性样品的的净种子子部分中中数取。。２．方法法和试验验条件活力测定定方法各各不相同同，具体体的方法法和使用用仪器及及试验条条件将在在本章以以后各节节中加以以说明。。54第二节种种子活活力测定定方法分分类和要要求３．对照照样品活力测定定需要比比标准发发芽试验验更加严严格的试试验条件件控制，，因此，，种子活活力测定定的检验验室需要要制备对照样品品。设置对照照样品的的目的是是为活力力测定结结果提供供一致性性的内在在质量控控制。对对照样品品的结果果差异反反映了试试验条件件（如温温度、种种子水分分或其他他因素））的微小小变异，，而会导导致明显显影响结结果的可可靠性。。55第二节种种子活活力测定定方法分分类和要要求4．结果计计算与表表示将在本章章以后各各具体方方法中节节中加以以叙述给给出其详详细程序序。5．结果报报告填报采用用本章第第三节和和第四节节规定的的程序，，将活力力测定结结果，填填报在检检验报告告“其他他测定””栏内。。同时结结果还须须附有检检测方法法的说明明，包括括必要时时测定方方法及条条件包括括时间、、温度和和种子水水分等信信息。56第三节加加速速老化试试验一、原理理加速老化化试验(acceleratedageingtest，以下简简称AA测定)是根据高高温(40～45℃))和高湿(100％相对湿湿度)能导致种种子快速速劣变这这一原理理进行测测定。高活力种种子能忍忍受逆境境条件处处理，劣劣变较慢慢；而低低活力种种子劣变变较快，，长成较较多的不不正常幼幼苗或者者完全死死亡。57AA测定定最早是是由Delouehe等(1973)创造造的用来来预测许许多种的的种子寿寿命。经经过多年年的发展展，目前前AA测测定主要要用于两两方面，，一是预测测田间出出苗率二是预测测耐藏性性58第三节加加速速老化试试验二、适用用范围与与局限性性《国际种子子检验规规程》所规范的的AA测定法适适用于大大豆种子子；ISTA手册指出出该法也也适用于于许多其其他种，，详见表表15-2所列的种种。AA测定结果果也是可可以控制制的。AOSA和ISTA用大豆种种子核准准试验表表明在试试验室间间有很大大的一致致性，并并证实AA发芽试验验与田间间出苗的的关系。。现在也也有足够够证据证证实用该该试验能能取得重重演性结结果。因因此，AOSA现在认为为作为大大豆试验验的方法法已经标标准化，，可以推推荐。但但是必须须按本节节所规定定的程序序和仪器器进行操操作，在在温度控控制、样样品大小小或老化化时间的的小量改改动会引引起最后后水分和和(或)发芽率的的变化。。59第三节加加速速老化试试验三、仪器器和药品品１．老化化外箱：：推荐应应用水套套培养箱箱，保持持恒温(41土0.3))℃。如果没没有水套套培养箱箱，其他他有加水水的加热热培养箱箱也可。。使用这这些培养养箱，水水应在外外箱内，，以防凝凝结。水水掉在内内箱盒上上，会在在盖内产产生凝结结，提高高种子水水分，降降低发芽芽率，增增加发霉霉。因此此，当外外箱有大大量凝结结水时，，当心保保护内箱箱在老化化期间的的小水点点积累。。外箱通通常不需需要很准准确的温温度控制制，需要要附加控控制保持持温度均均匀。２．老化化内箱：：老化内箱箱为带盖的的塑料盒盒，大小小为11.0cm××11..0cm×3.5cm，内有一一个网架架盘10.0cm××l0..0cm×0．3cm((网孔为14×18)。老化内内箱可以以购买，，也可以以自制（（见图15-3）。注意意盖不应应密封（（见图15-3）。6061第三节加加速速老化试试验３．天平平：感量量为0.001g。４．水：：去离子子水或蒸蒸馏水。。５．带刻刻度的容容量杯：：刻度从从0至100mL，从标准准的容量量器或有有50mL刻度的容容器准确确量取40mL水。６．铝盒盒(供种子水水分测定定)。７．发芽芽试验设设备。62第三节加加速速老化试试验四、程序序1．预备试试验．（１）检检查老化化外箱老化外箱箱的温度度必须经经过国家家标准计计量院的的检定或或类似的的温度计计。（２）检检查温度度收集按规规定的程程序／系系统进行行操作的的老化外外箱的温温度和其其均匀度度的记录录数据，，如果记记录显示示能达到到表15-2所规定的的温度（（对于大大豆种子子，所有有水平应应达到4l±0.3℃℃)下才能进进行AA测定。（３）保保证老化化内箱的的清洁度度为了防止止菌类污污染，使使用过的的老化内内箱、盖盖和网架架需经过过热消毒毒或用15％次氯酸酸钠溶液液洗净并并烘干，，才可进进行AA测定。63第三节加加速速老化试试验２．测定定每一种种子批的的程序（１）检检查种子子水分如果不知知道测定定种子批批的水分分，应采采用烘箱箱法测定定种子批批的水分分。对于于水分低低于10％或高于于14％的种子子批，应应在AA测定前将将其水分调节节至10％～14％。记录种子子水分，，决定是是否必须须提高种种子水分分或降低低种子水水分至规规定范围围。64第三节加加速速老化试试验（２）准准备老化化内箱把40mL去离子水水或蒸馏馏水放入入老化内内箱，然然后放入入网架，，确信水水不渗到到网架和和后加的的种子上上。从净种子子中称取取42g((至少含有有200粒种子)种子，称称重后放放在网架架上，摊摊成一层层。老化的种种子最好好不要经经过处理理，然而而，该作作物种子子是以杀杀菌剂处处理销售售的，可可以使用用处理种种子。每每次外箱箱用于AA测定，应应包括一一个对照照样品。。保证每每一内箱箱有盖(不要封口口)。注意盖盖不应密密封。65第三节加加速速老化试试验（３）使使用老化化外箱内箱排成成一排放放在架上上，同时时放入外外箱内。。为了使使温度均均匀一致致，外箱箱内的两两个内箱箱之间间间隔大约约为2.5cm。记录内箱箱放人外外箱的时时间。准准确监控控老化外外箱的温温度在表表15-2的范围和和时间内内，如大大豆种子子在(41±±0.3)℃温度保持持72h。在老化规规定期间间，不能能打开外外箱的门门。如果果这时已已经打开开门，应应从箱中中取出种种子重新新进行测测定。66表15-2不同作物物种子AA测定老化化条件67第三节加加速速老化试试验（4）发芽试试验经72h老化时间间后，从从外箱取取出内箱箱，记录录这时的的时间。。取出一一小时内内用50粒四个重重复进行行标准发发芽试验验。在同一天天内如果果有许多多批种子子进行老老化试验验，样品品应进行行分类，，在两个个老化外外箱的试试验应间间隔1h，以便有有时间在在老化后后进行置置床发芽芽。大豆豆种子发发芽的条条件已在在GB／T3543..4中给出。。68第三节加加速速老化试试验（5）检查老老化后对对照样品品的水分分在老化结结束时进进行标准准发芽前前，从内内箱中取取出对照照样品的的一个小小样品(10～20粒)，马上称称重，用用烘箱法法测定种种子水分分(以鲜重为为基础)。记录对照照样品种种子水分分，如果果种子水水分低于于或高于于表15-2所规定的的值(对于大豆豆，种子子水分应应在27％～30％)，则试验验结果不不准确，，应重作作试验。。69第三节加加速速老化试试验（6）结果计计算与表表示用四次50粒重复的的平均结结果表示示人工老老化发芽芽结果，，以百分分率表示示。（7）结果说说明解释释AA测定并不不提供一一个绝对对的活力力范围，，只是通通过一段段时间的的高温高高湿逆境境后进行行发芽试试验的结结果。该结果与与老化前前同一种种子批的的发芽试试验结果果比较，，如果AA结果类同同于标准准发芽试试验结果果为高活活力，低低于标准准发芽试试验结果果为中至至低活力力。这样样，可用用该结果果来排列列种子批批活力，，来判定定贮藏潜潜力或每每一种子子批的播播种潜力力。70第四节电电导导率测定定高活力种种子细胞胞膜完整整性好，，浸入水水中后渗渗出的可可溶性物物质或电电解质少少，浸泡泡液的电电导率低低。电导导率与田田间出苗苗率成显显著的负负相关，，借此可可用电导导率的高高低判别别种子活活力的高高低。大粒豆类类种子的的电导率率结果提提供比标标准发芽芽与田间间出苗率率更强的的相关性性。71第四节电电导导率测定定一、原理理细胞膜在在种子生生理成熟熟前的种种子发育育中发生生了结构构变化，，种子劣劣变发生生于成熟熟前和发发芽前的的吸胀。。劣变生生化变化化和生理理紊乱所所引起的的细胞膜膜完整性性变化是是造成种种子活力力的最主主要差异异。在早早期吸胀胀时，细细胞膜的的恢复和和修补可可能影响响种子的的渗漏率率。种子子重组恢恢复细胞胞膜的速速度越快快，渗漏漏液越少少。高活力种种子能迅迅速修复复细胞膜膜能力，，而低活活力种子子较差，，所以，，高活力力种子所所测得的的电导率率比低活活力种子子低。低活力种种子批的的渗漏会会造成二二次感染染，种子子渗漏的的营养液液加速土土壤微生生物活动动和二次次感染。。种子中中渗出的的碳水化化合物的的数量也也与细菌菌生长呈呈正相关关。72第四节电电导导率测定定二、适用用范围与与局限性性《国际种子子检验规规程》所规范的的电导率率测定适适用于豌豌豆种子子；ISTA活力手册册指出该该法也适适用于许许多其他他种，如如大粒豆豆科种子子（特别别是大豆豆、绿豆豆等）、、棉花、、玉米、、番茄、、洋葱等等种子。。AOSA和ISTA活力测定定委员会会认为，，菜豆和和大豆的的电导率率测定结结果具有有重演性性，与田田间出苗苗率有较较大的相相关性，，该测定定已被种种子产业业用来评评定菜豆豆种子出出售前的的出苗率率。已在欧洲洲、澳大大利亚、、新西兰兰和北美美已得到到广泛地地使用。。电导率率测定作作为一个个快速、、客观的的活力测测定方法法，特别别易用于于大多数数种子检检验室检检测，因因为该项项目的仪仪器投入入较少、、人员培培训简单单。73有几种因因素影响响电导率率结果，，第一种因因素是大大粒豆类类种皮的的物理损伤伤导致水分分快速吸吸收，造造成机械械损伤和和高水平平的电解解质渗漏漏，因此此，某些些研究者者建议除除去物理理损伤种种子。然然而机械械损伤种种子的肉肉眼观察察是主观观的、不不准确的的，这些些种子结结果的例例外会导导致种子子活力的的过高估估计。只只能按照照ISTA规定从样样品中扦扦取净种种子，这这样才能能提供不不偏样品品供检验验。第二种因因素是种子大小小，这涉及及到在测测定前通通过称重重而消失失，并将将结果表表示为µScm-1g-1。第三种因因素是原始种子子水分，在测定定前测定定种子水水分，调调节种子子水分不不在10%～14%的种子批批，可以以消除这这个问题题。第四种是是处理种子子的影响，，用大豆豆种子的的研究表表明，并并不支持持从处理理后的种种子去除除杀菌剂剂，但是是其他种种子处理理对电导导率的影影响并不不知道，，如果可可能，应应测定未未处理的的种子。。74三、仪器器和药品品1.电导仪可用直流流电或交交流电直直接读数数的电导导仪，电电极常数数必须达达到1.0（电极常常数是指指电极板板之间的的有效距距离与极极板的面面积之比比）。有有关具体体品牌、、型号的的电导仪仪可向ISTA秘书处咨咨询。2.水最好使用用去离子子水，也也可使用用蒸馏水水。凡使使用的水水必须进进行电导导率测定定。在20℃下，去离离子水电电导率不不超过2μScm－1；蒸馏水水电导率率不超过过5μScm－1。使用前前水应保保持在（（20±1）℃。75第四节电电导导率测定定3.烧杯或容容器为了保证证有适宜宜的水浸浸没种子子和电极极，烧杯杯和容器器的容量量为500mL，基部宽宽80mm±5mm。容器使使用前必必须冲洗洗干净，，并用去去离子水水或蒸馏馏水冲洗洗两次。。4.发芽箱、、培养箱箱或发芽芽室满足保持持（20±1）℃的恒温。。5.烘箱满足温度度达到130℃℃或者103℃℃。6.天平感量达到到0.01g。7.铝盒（供供种子水水分测定定用）。。76第四节电电导导率测定定四、程序序1.预备备试验（1）校校正电极极（2）核核查对照照种子批批的电导导率（3）检检查仪器器清洁度度（4）检检查温度度77第四节电电导导率测定定2.测定定每一种种子批的的程序（1）检检查种子子水分如果不知知道测定定种子批批的水分分，应采采用烘箱箱法测定定种子批批的水分分。对于于水分低低于10%或高高于14%的种种子批，，应在浸浸种前将将其水分分调至10%～～14%%。78第四节电电导导率测定定（2）准备烧烧杯准确量取取250mL去离子水水或蒸馏馏水，放放入500mL的烧杯中中。每种种子批测测定4个烧杯。。含水的的所有烧烧杯应用用铝箔或或薄膜盖盖子盖好好，以防防止污染染。在盛盛放种子子前，先先在20℃下平衡24h。为了控控制水的的质量，，每次测测定准备备两个只只含去离离子水或或蒸馏水水的对照照杯。（3）准备试试样随机从种种子批净净种子部部分数取取每个各各为50粒的四个个次级样样品，称称重至0.01g。79第四节电电导导率测定定（4）浸种已称重的的试样放放入已盛盛有250mL去离子水水的500mL、先粘有有标鉴的的容器中中。轻轻轻摇晃容容器，确确保所有有种子完完全浸没没。所有有容器用用铝箔或或薄膜盖盖盖好，，在（20±1)℃℃放置24h。在同一一时间内内测定的的烧杯的的数量不不能太多多，不能能超过电电导率评评定的数数目，通通常为10～12个容器，，一批测测定一般般不超过过15min。（5）准备电电导仪试验前先先启动电电导仪至至少15min。每次测测定同时时用去离离子水或或蒸馏水水填满容容器杯400～600mL冲洗电极极，作为为冲洗水水，去离离子水电电导率不不应超过过2μScm－1或蒸馏水水不超过过5μScm－1。80第四节电电导导率测定定(6）测定溶溶液电导导率24h（±15min）的浸种种结束后后，应马马上测定定溶液的的电导率率。盛有有种子的的烧杯应应轻微摇摇晃10～15s，移去铝铝箱或薄薄膜盖，，电极插插入不要要过滤的的溶液，，注意不不要把电电极放在在种子上上。测定定几次直直到获得得一个稳稳定值。。测定一一个试样样重复后后，用去去离子水水或蒸馏馏水冲洗洗电极两两次，用用滤纸吸吸干，再再测定下下一个试试样重复复。如果果在测定定期间观观察到硬硬实，测测定电导导率后应应将其除除去，记记数，干干燥表面面，称量量，并从从50粒种子样样品重量量中减去去其重量量。81第四节电电导导率测定定（7）扣除试试验用水水的电导导率在（20±1)℃℃测定对照照杯的去去离子水水或蒸馏馏水的电电导率，，比较该该数与日日常的水水源记录录（如果果读数高高于日常常水源读读数，表表明电极极清洁度度有问题题，应重重新清洗洗电极，，重新测测定另一一对照杯杯）。每每一重复复应从上上述容器器的测定定值中减减去对照照杯中的的测定值值（烧杯杯的背景景值）。。处理种子子的送验验样品可可能已经经杀菌剂剂处理。。目前没有有证据表表明种子子杀菌剂剂处理会会影响电电导率结结果，但但是没有有对所有有的商用用种子处处理评定定过。但是，不不同纯度度的商用用杀菌剂剂中的某某些含有有添加剂剂会严重重改变电电导结果果。所以以，对于于经过杀杀菌剂处处理的种种子应特特别小心心，特别别是使用用新的杀杀菌剂。。82（8）结结果计算算与表示示根据下列列公式计计算每一一重复的的种子重重量的每每克电导导率：4次重复间间平均值值为种子子批的结结果。四次重复复间容许许差距为为5μScm－1g－1（最低和和最高的的差），，如超过过，应重重做4次重复。。83第四节电电导导率测定定（9）结结果说明明解释根据电导导率测定定结果，，即用活活力水平平对种子子批进行行排列。。英国已已在豌豆豆上应用用多年，，总结出出表15-3的的经验。。84表15-3豌豆种子子电导率率值的解解释85第五节种种子子活力的的其他测测定方法法一、幼苗苗生长特特性测定定幼苗生长长特性测测定主要要包括幼幼苗生长长测定、、幼苗评评定测定定、种子子发芽速速率、发发芽指数数和活力力指数测测定等方方法。这类测定定方法是是根据高高活力种种子幼苗苗生长快快、幼苗苗健壮、、生长正正常、幼幼苗株大大和重量量较重等等生长特特性，而而低活力力种子则则相反，，借此来来评定种种子活力力水平的的差异。。861.幼苗生长长测定幼苗生长长测定方方法适用用于具有有直立胚胚芽和胚胚根的禾禾谷类和和蔬菜类类作物种种子。其其测定方方法是取取试样4份，各25粒。各取取发芽纸纸3张(30cm×45cm)，取其中中1张画线，，先在纸纸长轴中中心画一一条横线线作为中中心线，，距顶端端15cm，并在其其上、下下每隔1cm画平行线线。在中中心线上上平均间间隔画25个点，在在每点上上放一粒粒种子，，胚根端端朝向纸纸卷底部部，再盖盖两层湿湿润发芽芽纸，纸纸的基部部向上折折叠2cm，将纸松松卷成4cm直径的筒筒状，用用橡皮筋筋扎好，，将纸卷卷竖放在在容器内内，上用用塑料袋袋覆盖，，置于黑黑暗恒温温箱内培培养7d，温度为为正常发发芽所规规定的温温度，然然后统计计苗长；；计算每每