第25章 病毒感染的检查方法与防治原则课件

1、病毒感染的检查方法与防治原则第25章 1第一节 病毒感染的检查2病毒感染的检查检测内容查病毒查特异性抗体 病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶 电镜直接观察 光镜检查包含体 分离培养3一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似，但应注意： 1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存，尽快送检 3.血清学诊断采双份血清4二、病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离培养 细胞培养（cell culture） 鸡胚接种（egg inoculation） 动物接种（animal inoculation）5（一）病毒的分离培养 1.细胞培养 单层细胞培养（monolayer cell cultu

2、re） 分类 悬浮细胞培养（suspended cell culture） 原代细胞（primary cell）细胞种类 二倍体细胞（diploid cell） 传代细胞系（continuous cell line）7病毒的细胞培养细胞培养瓶单层细胞8特点：对多种病毒敏感 生长能力有限, 获取成本高 可携带潜伏病毒1.细胞培养(1)原代和次代细胞培养10(2)二倍体细胞培养 体外分裂50100代仍保持二倍体染色体数目，可用于病毒分离和疫苗生产。特点：对多种病毒敏感 不带异种蛋白(人源性) 不带病毒，无致瘤潜能 可传50代左右1.细胞培养11(3) 传代细胞培养特点：对多种病毒敏感性高 繁殖能力

3、高，传代时间长 有致癌危险，不能用于疫苗生产1.细胞培养122、鸡胚培养优点：易管理，不带微生物，成本较低缺点：操作程序复杂14151病毒增殖鉴定 (1)细胞病变效应（cytopathic effect, CPE ） 细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）； 形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； 在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。 （二）病毒的鉴定 1718细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)19麻疹病毒感染细胞呼吸道合胞病毒感染细胞形成多核巨细胞或称融合细胞(1)细胞病变效

4、应(cytopathic effect, CPE)20形成包涵体(inclusion body)(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)21腮腺炎病毒感染细胞(2)红细胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)红细胞表面HA受体22(4)细胞代谢改变 细胞代谢变慢 pH变化减慢242.病毒形态学鉴定电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒）， 对一般病毒检测意义不大25(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA） 多种病毒鉴定(3)凝胶免疫扩散试验(gel immuno- diffusion test) 多种病毒鉴定3.病

5、毒血清学鉴定274.病毒分子生物学鉴定抗原变异病毒基因的鉴定 核酸扩增 核酸杂交 基因芯片 基因测序28（三）病毒数量与感染性测定1.血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒）2.蚀斑形成试验 （plaque formation test） 3.50组织细胞感染量 （50 tissue culture infectious dose, TCID50）感染性病毒量29(四) 新病毒的鉴定核酸类型的测定 理化性状的检测 形态学鉴定 血清学鉴定 基因测序和生物对比30三、病毒感染的血清学诊断应用：采取标本分离病毒为时已晚目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒为证实所分离的病毒的临床意义进行血清流行病学调查

6、等311.中和试验（neutralizing test）病毒中和抗体 病毒失去感染性 特点：特异性高，抗体维持时间长应用：人群免疫情况的调查 临床诊断少用322.补体结合试验 （complement fixation test） 用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中相应的补体抗体 特点：特异性低，抗体出现早，消失快 应用：近期感染指标。33四、病毒感染的快速诊断数小时内出结果病毒颗粒病毒成分（抗原或核酸） 早期抗体检测（IgM）34（一）形态学检查电镜和免疫电镜检查 普通光学显微镜检查 包涵体35（二）病毒成分检测1.病毒蛋白抗原检测 免疫标记技术2.病毒核酸检测 核酸扩增技术 核酸杂交技术

7、 基因芯片技术 基因测序36（三）早期抗体检测 可诊断急性感染 特异性IgM抗体：孕妇感染风疹病毒 EBV早期抗原抗体 核心抗原抗体 早期抗原的抗体 衣壳抗原抗体37第二节 病毒感染的特异性预防 微生物及其代谢产物 生物制品 动物免疫血清（biological products） 免疫细胞 细胞因子 防治和诊断感染性疾病38灭活疫苗:乙型脑炎疫苗、狂犬病疫苗、流感灭活疫苗等活疫苗:痘苗、脊髓灰质炎疫苗、麻疹疫苗、流行性腮腺炎疫苗、RV疫苗、黄热病疫苗以及一些联合疫苗等重组载体疫苗 亚单位疫苗:用化学试剂裂解病毒，提取其包膜或衣壳上的亚单位，除去其核酸以此制成疫苗。目前使用的有流感V、腺V 和HBV等重组疫苗 核酸疫苗 一、人工主动免疫常用生物制品39二、人工被动免疫常用生物制品 免疫球蛋白 血清丙种球蛋白 细胞免疫制剂 IFN-、 细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF 、CSF 淋巴因子激活的杀伤细胞 LAK细胞 40第三节 病毒感染的治疗 核苷类药物 非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物 干扰素和干扰素诱生剂中草药 基因治疗剂 治疗性疫苗 抗病毒化学制剂反义寡核苷酸干扰RNA核酶（ribozyme） 41核苷类药物作用机制 HSV/VZV 无环鸟苷（NA）病毒胸苷激酶 NA一磷酸宿主细胞激酶 NA三磷酸 （缺乏糖环3-OH基）病毒DNA聚