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1、PAGE4第二节制备和应用固定化酶学习目标1知道从酶到固定化酶技术，再到固定化细胞技术的发展过程以及生产中遇到的问题。2知道常用的固定化技术及适用范围，明确固定化技术的应用原理，理解固定化细胞的具体步骤，会解释各种现象。学习重、难点知道常用的固定化技术及适用范围，明确固定化技术的应用原理，理解固定化细胞的具体步骤，会解释各种现象。学习要点梳理一、直接使用酶、固定化酶、固定化细胞的比较直接使用酶固定化酶固定化细胞酶的种类一种或几种一种一系列酶常用载体无高岭土、皂土、硅胶、凝胶明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素、聚丙烯酰胺制作方法无化学结合固定化、物理吸附固定化包埋法固定化是否需要营养物质否否是催

2、化反应单一或多种单一一系列反应底物各种物质（大分子、小分子）各种物质（大分子、小分子）小分子物质缺点对环境条件非常敏感，易失活难回收，成本高，影响产品质量不利于催化一系列的酶促反应反应物不易与酶接近，尤其是大分子物质，反应效率下降优点催化效率高、耗能低、低污染既能与反应物接触，又能与产物分离可以反复利用成本低、操作容易特别提醒固定化细胞使用的都是活细胞，因而为了保证其生长、增殖的需要，应该为其提供一定的营养物质。固定化细胞由于保证了细胞的完整性，酶的环境改变小，所以对酶的活性影响最小。二、酵母菌细胞的固定化技术1实验流程的几点提醒：（1）选用的干酵母要具有较强的活性，而且物种单一。（2）酵母菌

3、细胞活化时体积会变大，因此活化前应选择体积足够大的容器，防止酵母菌细胞的活化液溢出。（3）海藻酸钠溶液的配制是固定化细胞的关键，因为如果海藻酸钠浓度过高，将很难形成凝胶珠，如果浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母菌细胞的数量少，也会影响实验结果。（4）溶化海藻酸钠时要用小火或间断加热，避免海藻酸钠发生焦糊。（5）将溶化后的聚乙烯醇海藻酸钠溶液先冷却至45，再与预热至35的酵母菌培养液混合，避免高温杀死酵母菌细胞。（6）固定化酵母菌细胞时，应将酵母菌聚乙烯醇海藻酸钠胶液用注射器以恒定速度缓慢滴入饱和硼酸氯化钙溶液中，而不是注射，以免影响凝胶珠的形成。2结果分析与评价：（1）观察凝胶珠颜色，若颜色过浅呈白色，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母菌细胞数目较少。（2）观察凝胶珠性状，若不是球形或椭球形，则说明海藻酸钠的浓度偏高，制作失败。（3

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