丹参注射液促心肌梗塞后大鼠缺血心肌血管新生作用及对相关生长因

1、丹参注射液促心肌堵塞后大鼠缺血心肌血管新生作用及对相关生长因【摘要】目的观察丹参注射液对心肌堵塞I后大鼠缺血心肌血管新生作用，并讨论其机制。方法雄性istar大鼠，结扎左冠状动脉造成急性心肌堵塞AI模型，随机分为丹参注射液组、麝香保心丸阳性对照组、模型组阴性对照，并设假手术组，6周后处死动物。用免疫组织化学法，检测各组大鼠缺血心肌中微血管数V、微血管密度VD及血管内皮生长因子VEGF、碱性成纤维细胞生长因子bFGF、血小板衍生生长因子PDGF-、胰岛素样生长因子IGF-1蛋白的表达，用病理图像分析系统测定生长因子蛋白表达灰度值并进展半定量分析。结果模型组、麝香保心丸组及丹参注射液组大鼠I边缘区

2、V和D较假手术组明显增多P0.05；丹参注射液组大鼠缺血心肌部分V和VD明显高于模型组P0.05，与麝香保心丸组作用相似P0.05。模型组VEGF，bFGF-，IGF-1蛋白表达及其灰度值明显高于假手术组P0.05；丹参注射液组VEGF，bFGF，PDGF-蛋白表达灰度值明显高于模型组P0.05，而IGF-1蛋白表达灰度值低于模型组P0.05VEGF，bFGF，PDGF-，IGF-1蛋白表达灰度值低于麝香保心丸组P0.05。结论丹参注射液有促I后大鼠缺血心肌血管新生的作用，其机制可能与促进VEGF，bFGF，PDGF-的表达有关。【关键词】丹参注射液心肌堵塞血管新生分子机制StudyfAngi

3、genesisandrrelativeGrthFatrsEffetsfSalviailtirrhizaInjetinntheIsheiyardiuftheRatsafteryardialInfartinAbstrat：bjetiveTstudytheangigenesieffetsandehanissfSalviailtirrhizaInjetinntheisheiyardiuftheratsafteryardialinfartin(I).ethdsaleistarratsereligatedleftrnaryarterytbeadeintdelsfauteyardialinfartin(AI

4、).AllratsererandlydividedintSalviailtirrhizaInjetin,Shexiangbaxinpills(psitiventrlgrup),del(negativentralgrup)grupandshaperatingrup.Treatedtherespetivelyfrsixeeks.irvasularunt(V),irvasulardensity(VD),vasularendthelialgrthfatr(VEGF),basifibrblastgrthfatr(bFGF),insulin-kindgrthfatr(IGF)andplatelet-der

5、ivedendthelialgrthfatr(PDGF)inisheiyardiufIratseredetetedbyiunbistheistryassay.ThevaluesfprtEinexpressinfVEGF,bFGF,PDGF-andIGF-1nisheiyardyzuerealulatedandanaliedbyiageanalysissyste.ResultsThereerereVandVDinisheiyardiufAIratsfdelgrup、salviailtirrhizainjetingrup,Shexiangbaxinpillsgrupthanshaperatingr

6、up.VandVDerehigherinisheiyardiufAIratsfSalviailtirrhizaInjetingrupthanthsefdelgrup.paredithShexiangbaxinpills,theyhadthesaerll.ThevaluesfprteinexpressinfVEGF,bFGF,PDGF-andIGF-1indelgruperesignifiantlyelevatedparediththatinshaperatingrup.TheprteinexpressinfVEGF,bFGFandPDGF-insalviailtinrrhizainjeting

7、rupassignifiantlyelevatedparediththatinshaperatingrup.TheprteinexpressinfVEGF,bFGFandPDGF-inSalviailtirrhizaInjetingrupassignifiantlyelevatedparediththatindelgrup.IGF-1inSalviailtirrhizaInjetingrupaslerthandlegrup.Butthereasnsignifiantstatistisdifferenebeteenthe.Thereeresignifiantstatistisdifferenes

8、intheprteinexpressinfVEGF,bFGF,PDGF-andIGF-1insalviailtirrhizainjetingrupparediththatinShexiangbaxinpillsgrup.nlusinSalviailtirrhizaInjetinhastheeffetfprtingangigenesisftheisheiyardiuinratsafterI.ItsehanissanberelatedithstiulatingtheexpressinfVEGF,bGFGandPDGF-.Keyrds：SalviailtirrhizaInjetin;I;Angige

9、nesis;leularehanis本研究观察丹参注射液对I后大鼠缺血心肌血管新生的影响，并通过观察其对相关生长因子蛋白表达程度的变化讨论促血管新生作用机制。1材料与方法1.1材料1.1.1药品丹参注射液，上海第一生化药业消费，批号031001；麝香保心丸，上海和黄药业消费，批号A040214，把麝香保心丸粉碎后溶于无菌蒸馏水中，每毫升含麝香保心丸3g。1.1.2试剂小鼠抗大鼠D34单克隆抗体，购自美国Santa公司，生物素化二抗、三抗、非免疫血清购自福建迈新公司；VEGF、bFGF、IGF-1、PDGF-免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物工程，SP-9001RabbitSPKit购自北京中杉金

10、桥生物技术；DAB显色试剂盒购自北京中山公司。1.1.3器材小动物呼吸机江西特力麻醉呼吸设备公司，型号TKR-200；显微镜日本LYPUS光学，型号H20BIF200；石蜡切片机德国蔡司公司，型号H340E；彩色病理图像分析系统日本Sny公司，型号SS-D18P。1.2动物造模及分组选取体重为20020g的istar雄性大鼠郑州大学动物中心提供，合格证号：410116，参照文献方法1，1%戊巴比妥钠腹腔注射35g/kg麻醉，背位固定，行气管插管术，连接小动物呼吸机，人工呼吸，开胸结扎左冠脉根部，以即刻心脏外表颜色变化和术后心电图1、aVL导联ST段显著抬高显示造模成功，缝合胸壁，观察大鼠生理状

11、态平稳后，停顿人工呼吸，术后注射青霉素3d预防感染。成活动物随机分为丹参注射液组、麝香保心丸组、模型组，假手术组手术方法同上，但在冠状动脉下穿线后打一松结。1.3治疗方法造模后24h内开场药物干预，给药1次/d。假手术组腹腔注射生理盐水10lkg-1d-1；丹参注射液组腹腔注射丹参注射液0.5gkg-1d-1；麝香保心丸组管饲麝香保心丸30gkg-1d-1；模型组管饲与治疗组同等容积的生理盐水10lkg-1d-1。6周后处死动物。1.4心肌取材麻醉大鼠后取出心脏，剪去主动脉弓、右心室、心房、心耳等，在乳头肌横切面切取心肌组织包括心梗区、移行区、健存区，10%中性缓冲福尔马林液固定，石蜡包埋，制

12、备厚4组织切片。1.5观察指标1.5.1一般组织形态学观察切片脱腊，二甲苯透明，HE染色，梯度酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固，光镜观察。1.5.2大鼠I边缘区心肌V，VD的测定用免疫组织化学法染色组织切片。一抗工作浓度为1100。染色后血管内皮细胞被染成黄、棕色。微血管判断标准：按参考文献方法2，不以红细胞的出现来确定是否为血管，也不以是否出现管腔来计数血管，但凡染成棕黄色单个内皮细胞或内皮细胞簇均作为一个血管计数，凡管腔大于8个红细胞大孝带有较厚肌层血管区域的血管均不计数。详细方法为：先在40视野下找到I边缘区，然后在400视野下进展大鼠I边缘区微血管计数，每张切片随机选取5个视野，计数每个视野的V，取其均值作为本例大鼠的V值，因VD以毛细胞血管个数/视野表示，故每例的V值即为该大鼠的VD值。1.6统计学方法数据用SPS11.0Frinds统计分析软件处理，计算所有数据以s表示，组间比拟采用单因素方差分析。2结果2.1一般组织形态学观察假手术组可见毛细血管增生不明显；模型组可见少量毛细血管增生；麝香保心丸组可见较多增生的毛细血管；丹参注射液组可见明显增生的毛细血管见图1。