高效液相色谱法同时测定杜仲叶药材中芦丁等3种黄酮类有效成分的

1、高效液相色谱法同时测定杜仲叶药材中芦丁等3种黄酮类有用身分的伍庆王兴宁张明时曹桂红【摘要】目的创立同时测定杜仲叶中芦盯槲皮素、山萘酚的高效液相色谱法。要领接纳SpherisrbBDS18柱5，2504.6，以甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱甲醇：0in，30%；10in，30%；30in，50%；40in，60%；50in，30%，流速1lin-1，检测波长350n。结果样品中芦盯槲皮素、山萘酚的加样接纳率别离为96%98%，93%97%，96%101%；芦盯槲皮素、山萘酚的线性范畴别离为0.5795.79g，r=0.9999；0.121.20g，r=0.9998；0.1091.09g，r=0

2、.9999。结论贵州差异产地杜仲叶药材中芦盯槲皮素、山萘酚的含量差异很大。【关键词】高效液相色谱法杜仲叶芦丁槲皮素山萘酚杜仲Euiaulidesliv属国度二级庇护植物，是杜仲科杜仲属的落叶乔木，中国特有植物种，系地质史上第四纪冰川活动残留下来的占生孑遗树种1，2。具补肝肾、强筋骨、安胎之成果,重要用于治疗肾虚腰痛,筋骨无力,妊娠漏血,胎动不安,高血压病3，其皮是我国特有的珍贵滋补药材,近代研究创造杜仲叶与皮含有雷同的化学身分，具有雷同的药理作用，杜仲叶也是种种珍贵保健品的紧张质料。黄酮类化合物是杜仲药材的重要有用身分之一,具有多种生物活性，杜仲中黄酮类化合物含量的凹凸,也是断定杜仲药材及其相

3、干产物的紧张指标4，5。比年来，对杜仲黄酮类含量的测定多接纳比色法和高效液相色谱法6，7，测定多为单一指标芦丁的定性定量阐发，对付同时测定黄酮类物质芦盯槲皮素、山萘酚3种有用身分还未见报道。为了充实公正的开拓利用贵州省的杜仲资源，本文接纳高效液相色谱法同时对杜仲叶中的黄酮类3种有用身分举行了定性定量阐发。1仪器与试药aters515泵,2996光电二极管检测器(PAD),7725i手动进样器,SpherisrbBDS185，2504.6色谱柱,Eper色谱事情站。芦丁比较品批号086-9303，槲皮素比较品批号081-9003，山萘酚比较品批号0861-9901均购于中国药品生物成品检定所；杜

4、仲叶均采自贵州各杜仲产地经贵阳中医学院刘克汉老师断定；甲醇色谱纯、磷酸为阐发纯；水为二次重蒸水。2要领与结果2.1溶液的制备图1芦盯槲皮素、山萘酚比较品色谱图略图2杜仲叶样品色谱图略2.3线性干系观察别离细密量取比较品溶液依次进样2，5，8，11，14，17，20l。按“2.2色谱条件阐发，以YAV.S为峰面积，Xg为进样量，芦盯槲皮素、山萘酚方程别离为：Y芦丁=11428X+691.404，r=0.9999、Y槲皮素=2022916X-5760.250，r=0.9998、Y山萘酚=2177870X-6649.655，r=0.9999。结果表白，芦盯槲皮素、山萘酚别离在0.5795.79，0.

5、121.20，0.1091.09g间呈精良的线性干系。2.4细密度实行对同一份杜仲叶样品平行测定5次，芦盯槲皮素、山萘酚的RSD别离为：0.23%，1.5%，0.53%n=5。2.7供试品溶液不变性实行取同一供试品溶液，别离在0，2，4，6，8，10，12h测定，芦盯槲皮素、山萘酚含量的RSD别离为1.7%，2.2%，1.9%(n=7)，表白供试品溶液在12h内不变。表1接纳率实行结果略表2杜仲叶药材含量测定结果略3讨论3.1提取溶剂的选择芦盯槲皮素、山萘酚属于黄酮类化合物，易溶于水及强极的溶剂中，本文选择甲醇、乙醇和水3种溶剂作为提取溶剂，结果表白，以60%的乙醇溶液作为提取溶剂时，芦盯槲皮

6、素、山萘酚提取较完全。3.2提取要领的选择本文思量了超声、回流、索氏提取3种提取要领，创造超声提取服从显着高于其他两种提取要领，这和文献报道的黄酮类提取要领结果同等6；实行中通过比力了冷浸时间、料液比、提取时间对提取率的影响。结果表白，以冷浸8h、料液比130、超声提取3h，提取结果最正确。3.3检测波长的选择芦盯槲皮素、山萘酚的比较品溶液举行PDA全波长紫外阐发，并比力各组分的紫外汲取强度，对各波上举行比力，创造在350n处3组分都具有较好的敏捷度，应此，选择350n为检测波长。3.4色谱柱的选择在实行历程中比力了差异品牌的18色谱柱对检测结果的影响，创造Diansil18柱分散样品时间较长

7、，芦丁脱尾严峻，分散度差；ater18柱不克不及将芦丁和杂质峰完全分散；SpherisrbBDS18可使3组分与杂质很好的分散，且峰形较好，敏捷度高，得当黄酮类物质的分散。3.5活动相的选择实行中比力了乙腈与磷酸水溶液，甲醇与磷酸水溶液对样品分散的影响，创造用乙腈作为活动相时峰形较好，但杂质出峰较快，不克不及与有用身分完全分散；利用甲醇作为活动相时结果较显着，颠末梯度洗脱可将杂质完全分散，并调解磷酸的比例，以甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱结果最正确。3.6pH值对提取率的影响实行中比力了盐酸参加量水解黄酮苷对提取率的影响，创造随着pH的增长芦盯槲皮素、山萘酚的含量变革不大，故实行中接纳直接参

8、加60%乙醇溶液举行处置惩罚。3.7产地对黄酮类含量的影响含量测定结果表白，贵州差异产地杜仲叶药材黄酮类身分含量差异很大，此中以威宁县均匀海拔两千多米的杜仲叶总黄酮含量最高，以罗甸均匀海拔五百多米的最低。可知海拔高度对黄酮类身分的积聚具有必然的影响，对付影响黄酮类身分积聚的重要情况因子另有待进一步研究。本实行要领轻便，快速正确，可用于杜仲药材及其相干产物的质量操纵和评价。【参考文献】1张康健，王蓝，张凤云，等.杜仲叶与皮有用身分含量的比力研究J.西北林学院学报,1996,11(2)：42.2张康健，马希汉，马梅,等.杜仲叶次生代谢物积聚动态研究J.林业科学,1999,35(2)：15.3余济海，邹盛勤.高效液相色谱法同时测定杜仲叶中芦丁和槲皮素含量的研究J.安徽农业科学,2022，34(10)：2168.4张康健，王亚琴，马希汉，等.杜仲叶次生代谢物生态学开端研究初报J.林业科学，1999，35(6)：28.5张德权，台建详，付勤.生物类黄