高效液相色谱法测定鱼鳔补肾丸中补骨脂素的含量

1、高效液相色谱法测定鱼鳔补肾丸中补骨脂素的含量【摘要】目的建立高效液相色谱法测定鱼鳔补肾丸中补骨脂素的含量。方法采用HypersilDS184.6200,5色谱柱，乙腈-0.1%磷酸溶液30：70为流动相，流速为1.0l/in,检测波长245n。结果补骨脂素在0.071680.35840g范围内呈良好的线性关系，r=0.9999,平均回收率为100.29%n=6,RSD=1.47%。结论所建立的方法稳定、可靠，可为该产品建立质量控制方法提供参考。【关键词】高效液相色谱法；鱼鳔补肾丸；补骨脂素；含量测定【Abstrat】bjetiveTestablishaHPLethdfrthedeterinat

2、infpsraleninYubiabushenpills.ethdsHypersilDS18lun2004.6,5asusedithbilephasefaetnitrile-0.1%phsphriaidslutin30:70.Theflrateas1.0l/inanddetetinavelengthas245n.ResultsThelinearityrangefpsralenas0.071680.35840gr=0.9999,theaveragereveryrateas100.29%n=6ithRSD1.47%.nlusinThisethdisaurate,reprduible,andanbe

3、usedfrthequalityntrlftheYubiabushenpills.【Keyrds】HPL;Yubiabushenpill;psralen;deterinatin鱼鳔补肾丸由鱼鳔胶、枸杞子、当归、补骨脂、淫羊藿等组成，具有壮阳益精等成效，用于肾阳虚弱，肾精亏损所致的头昏、眼花等。该药品标准收载于?卫生部药品标准中药成方制剂?第八册,缺含量测定项。方中补骨脂有补肾助阳的成效，为重要臣药，其主要有效成分为补骨脂素和异补骨脂素1，本文采用高效液相色谱法对补骨脂的补骨脂素进展了含量测定研究。该方法稳定、可靠，可为该产品建立质量控制方法提供参考。1仪器与试药岛津L-10AD高效液相色谱仪配

4、有SPD-10A检测器，N2000色谱工作站，AE240电子分析天平梅特勒公司。补骨脂素对照品供含量测定用，批号：110739-202209，中国药品生物制品检定所提供，3批鱼鳔补肾丸批号分别为：20220112，20220119，20220326。乙腈、磷酸为色谱纯，水为超纯化水，其他试剂均为分析纯。2溶液的制备2.1对照品溶液精细称取补骨脂素对照品17.92g，置100l量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精细量取1l，置10l量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。2.2供试品溶液取本品适量，剪碎，取约1.5g,精细称定，置具塞锥形瓶中，精细参加甲醇25l，密塞，称定重量，超声处理功率300

5、，频率50kHz45in，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。2.3缺补骨脂阴性样品溶液取缺补骨脂阴性样品，同“2.2项下方法操作，即可。3方法与结果3.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱为HypersilDS184.6200,5,流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液30：70，流速为1.0l/in,柱温为室温。分别精细吸劝2项下对照品溶液、供试品溶液及缺补骨脂阴性样品溶液各10l,注入液相色谱仪，按本色谱条件测定。结果补骨脂素理论塔板数为15000以上，补骨脂素与邻近的杂质峰别离度为3.6以上，阴性样品在补骨脂素对照品一样保存时间位置上未见色谱峰，说明方中其他成分对补骨

6、脂素测定无干扰，结果见图1。3.2线性关系考察精细吸劝2.1项下对照品储藏溶液0.1792g/l0.4、0.8、1.2、1.6、2.0l,分别置10l量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过。分别汲取续滤液10l注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，并以峰面积Y对进样量X，g进展线性回归，得线性方程：Y=4843233.40X+32673.65,r=0.9999,进样量在0.071680.35840g范围内呈良好的线性关系。A.对照品B.样品.阴性样品图1HPL色谱图3.3精细度、重复性试验和稳定性试验按上述色谱条件，精细吸劝2.1项下对照品溶液连续进样6次，每次10l,峰面积平均值为862783

7、.9,RSD为0.7%,结果说明精细度良好。按“2.2项下方法处理同一批样品批号：202201126份，HPL分析，进样量均为10l，含量的平均值为0.3012g/g，RSD为1.5%,结果说明重复性良好。精细吸劝2.2项下供试品溶液10l，按上述色谱条件于0、2、4、8、12h进样测定，峰面积平均值为896126.5,RSD为2.0%，结果说明供试品溶液在室温下12h内稳定。3.4加样回收试验取含量的鱼鳔补肾丸样品批号：20220119，含量为0.3065g/g6份，每份约0.75g，分别置具塞锥形瓶中，分别精细参加对照品溶液0.02203g/l各10l,再按“2.2项下方法制备供试品溶液，

8、HPL分析，进样量均为10l，结果见表1。表1加样回收率测定结果3.5样品的测定精细称取3批样品批号分别为：20220112，20220119，20220326各3份，每份1.5g。按“2.2项下方法制备供试品溶液，HPL分析，进样量均为10l，按外标法计算补骨脂素含量，结果见表2。表2样品测定结果4讨论4.1流动相的选择参考文献资料2，3，试验中考察了三组流动相系统：甲醇-水、乙腈-水，乙腈-0.1%磷酸溶液，结果说明以乙腈-0.1%磷酸溶液30：70为流动相对，补骨脂素峰基线别离，且峰形较好，应选择流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液30：70。4.2提取方法的选择2，3比拟超声提取与回流提取，发现补骨脂素提取率相差不大，因超声提取供试品溶液所含杂质较少，且方法简单，便于操作，应选择超声提龋曾试验了甲醇和稀乙醇提取，结果甲醇优。考察了甲醇溶剂量15，25，35l，结果选择甲醇25l。考察了提取时间30，45，60in，结果选择45in。4.3由于缺补骨脂阴性样品在异补骨脂素对照品一样保存时间位置上有干扰色谱峰出现，故未建立其含量测定方法。【参考文献】1江苏新医学院.中药大辞典上册.上海