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文档简介

1、环境内分泌干扰物的雌激素效应检测 内分泌干扰物简介内分泌干扰物：天然动物性雌激素雌酮(E1)、雌二醇(E2)、雌三醇(E3)和作为药物使用的人工合成雌激素己烯雌(DES)、乙炔基雌二醇(EE2)、戊酸雌二醇(EV)。分子结构具有苯环结构的居多, 分子量150400之间。分子结构和分子大小与生物体内的激素相似。性质大多数是脂溶性化合物, 分子中不含有强的水溶性基因, 因此较易溶于油脂类物质中, 水中溶解度较小。性质比较稳定，具有难分解性, 不易生物降解, 可通过食物链进入体内并富集。环境中大量存在的内分泌干扰物可能危害人类和野生动物内分泌、神经、免疫等系统的正常功能并导致内分泌紊乱、生长发育异常

2、、出生缺陷和肿瘤的发生率增加、生殖能力下降等，从而严重影响人类的生存与发展。国内率先开始研究的是1997年中国科学院生态环境研究中心环境水质学国家重点实验室。目的和意义本研究目的在于了解水体中内分泌干扰物DES、E1、E2、EE2、E3和EV 6种雌激素的存在及含量，以期为该类物质的进一步生态风险评价提供基础数据研究方法鱼类卵黄蛋白原诱导实验法重组基因酵母检测法酵母双杂交法检测方法检测卵黄蛋白原的方法有多种, 常用的有3 种: 放射性免疫测定法(R IA )、酶联免疫法(EL ISA ) 和蛋白吸印免疫检测法(W estern B lo t t ing)。检测方法放射性免疫测定法：使用 32P

3、 和 3H 标记的亮氨酸; 对不同鱼种类都有效; 灵敏、定量、特异性; 灵敏检测限为0.001 mol/mL , 常规检测限为0.01 mol/mL 酶联免疫法：使用单克隆或多克隆抗体;不同鱼种类有特异性; 在适当的稀释范围也允许定量; 检测限为0.1 mol/mL 蛋白吸印免疫检测法：能准确确定蛋白质, 但定量方面较弱重组基因酵母检测法原理：酵母细胞一般不含雌激素受体(ER )。重组基因酵母检测法是将人类雌激素受体(hER) 的DNA 片段整合到酵母基因组中的雌激素应答表达子(ERE) 质粒上。这个表达质粒上还带有能编码-半乳糖苷酶的报告基Lac2Z。在这个系统中,hER 以一种能够与ERE

4、 结合的形式被表达。ERE序列位于表达质粒上的一个强启动子序列之中。在结合一个活性配体之后, 与雌激素结合的受体就会与转录因子和其他转录成分反应来调节基因的转录, 这就引起了报告基因Lac2Z 的表达,产生的-半乳糖苷酶就会分泌到介质中(图1)。在介质里, -半乳糖苷酶使能发色的酶作用物-D-吡喃半乳糖苷氯酚红(CPRG, 通常为黄色) 产生代谢变化, 变成红色, 能在540nm测吸光率。通过检测-半乳糖苷酶的量就可以定量检测出化学品的类雌激素活性。反应式及计算公式酵母双杂交法重组基因酵母法仅仅把人类雌激素受体(hER) 的DNA片段整合到酵母的基因组中; 而酵母双杂交法则在此基础之上, 把辅激活蛋白同时转入酵母细胞中。雌激素浓度的分析雌激素效应的检测是有

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