戴安液相学习培训(上传)百度文库

1、高效液相色谱仪使用经验交流-戴安液相培训归来姜泽慧安徽省马鞍山市食品药品检验所2014年3月21日戴安液相的结构脱气机和溶剂架泵带温控的自动进样器柱温箱二极管矩阵紫外可见光检测器 下面就戴安液相比对其他液相介绍液相色谱仪各部分的使用和维护保养仪器室：干净，安静紧闭门窗避免阳光照射室内照明温度，湿度稳定电源脱气机和溶剂架两个功能溶剂纯水：优质新鲜，每次更换，放在棕色瓶中，防止长菌溶剂甲醇、乙腈：进口试剂。国产试剂需要过滤溶剂10%甲醇：洗针液，seal washer共用，一周换一次溶剂水相：放置一天以上含水相的流动相，需要重新过滤脱气机在线脱气时，所有的管路需要充满液体，不然漏气滴数计：1.以每

2、小时80滴的速度清洗柱塞杆； 2.感应密封圈是否需要更换 （长期不用时，滴数计的软管应取下，以免变形） 摆放溶剂脱气机流动相的配置盐的溶解：最好是加热溶解后，再定容过滤。过滤原则：纯有机相或含一定比例有机相的就要用有机系滤膜。有机溶剂可以溶解水系滤膜，被溶解的水系滤膜更易损坏密封圈和柱塞杆。抽滤：抽滤完后继续抽滤几分钟脱气。超声脱气：流动相装入溶剂瓶后超声脱气5-10分钟。建议超声功率200W，频率40KHz，水位尽量高于流动相瓶中的水位。不宜长时间超至发热。泵二元泵：AC和BD高压梯度溶剂A泵A溶剂B泵B混合器（溶剂混合点）低压梯度溶剂A溶剂B比例阀（溶剂混合点）泵混合器泵压力限值处的压力下

3、限设10 bar左右，当流动相走完时，可防止空走。（流速稳定后设置）压力上限可设定正常使用值的1.5倍或运行梯度时最大压力的1.2倍，用于保护柱子。最大流速加速度：开机后流速从0到设定值所需的时间。减速度：关机时从使用值回到0所需的时间。没有速度变化设置的仪器，需要手动设置速率（00.20.50.81.0 ml/min）原因：流速的突然变化，会通过压力作用到柱床，造成柱床的塌陷和断裂；对仪器各个接口造成冲击，导致漏液。Purge目的：排走管路的气泡方法：每个管路依次进行 5ml/min*5min注意事项：先打开Purge阀，再变更流速。打开Purge阀时，拧到阻尼的位置就可以了，拧太松会漏液。

4、结束后，勿拧太紧，表面的镀金软容易变型。清洗缓冲盐通道的前后，应分别用纯水清洗通道，防止缓冲盐遇有机相析出结晶堵塞比例阀。带温控的自动进样器控制面板注射器感应笔定量环六通阀针座样品盘样品盘自动进样器的控制面板自动进样器的清洗1.灌注注射器 用于排除注射器中残留的气泡。注射器中若有气泡，造成进样量的不准确，进而影响含量测定2.清洗缓冲环 排除定量缓冲环中的气泡3.外部清洗针 清洗进样器外表面的残留，避免造成交叉污染或影响含量测定样品瓶进样条件的选择进样速率洗针（进样前、后）打样速度振荡（Auto Tray Shake）穿刺偏移（Puncture offset）注意：在所有的进样前都要先进一针溶剂

5、空白！注意：质控样品每隔一段时间就要走一针。 柱温箱最适的柱温为高于室温5，尽量保持在30-40 。色谱柱的使用色谱柱的选择不同的分析对象选择不同的柱子不同公司有不同品牌和不同类型填料的柱子HPLC色谱柱品牌杂，种类多提高分离度最有效的方法就是更换不同固定相类型的色谱柱！离子对试剂流动相的柱子最好专用。色谱柱的使用首先，看说明书。详细了解柱子的特性，死体积。活化：乙腈或者甲醇：0.2ml/min*1h初始使用：记录柱压和理论塔板数短期保存：乙腈或甲醇长期保存：80%甲醇或80%乙腈使用后保存在柱盒里，不要长期挂在仪器上色谱柱的维护预柱：可以买国产柱，填料匹配就可以。样品处理：每个样品都要通过0

6、.22l滤头过滤。 含有机相的要用尼龙膜。 C18柱的流动相，有机相至少占5%，纯水会造成填料流失。“冲水塌陷现象”：由于水的表面张力大，样品均以死体积流出。修复：立即用纯甲醇冲数小时。 色谱柱轻拿轻放，不能磕碰，不用时，用堵头堵上，放置在柱盒里保存。冲柱：（梯度变化）：磷酸盐流动相90%甲醇水甲醇说明：如果分析用流动相是甲醇/水系统，清洗就用水和甲醇；如果分析用乙腈/水系统，清洗仍用水和乙腈，因为甲醇黏度较高，洗脱强度又弱于乙腈。检测器二极管矩阵紫外可见光检测器（DAD）紫外灯（氘灯）：负责紫外区的波长采集（190-350nm）小于340nm 紫外灯必须开。可见灯（钨灯）：负责可见区的波长采

7、集（345-800nm）大于670nm 可见灯必须开。VWD-3400 ，可同时采集四个不同的波长。如果测定已知化合物，建议只使用一个波长，提高仪器的灵敏度和仪器的使用寿命。紫外检测器的采集速度范围为：0.2Hz-200Hz。一个色谱峰至少由2040 个数据点组成。3D色谱图：一次分析可得到样品各个组分在给定波长范围内的吸光度，及不同组分的最佳吸收波长。紫外灯寿命：2000h注意：开一次灯损失20h的寿命。不要频繁开关。注意：在泵稳定后有流速的状态下再开灯，仪器若长期未使用，检测器中可能有残留的气泡，这样，紫外光透过率就会降低，检测到的灯的能量也很不稳定，造成漂移和噪音值较大，自检无法通过。也

8、不要在停泵后长时间开着紫外灯，以免流通池中液体挥干而污染流通池。软件打开工作站操作面板控制仪器和运行的相关操作界面查看和处理仪器分析数据固定工作流程操作面板怎样开始一个序列新建一个仪器方法-命名新建一个处理方法-命名新建一个报告模板-命名新建一个序列文件，包含选择以上的方法-命名添加一个队列就绪检查进样添加一个队列运行中智能关机智能待机：仪器在1分钟后关灯、关柱温、泵进行0.1ml/min低流速运行状态。数据处理色谱峰的积分信噪比：S/N3 判定是不是溶剂峰S/N10 才可用作定量积分单位：分钟/秒 影响峰积分数值的大小软件的使用保证电脑安全：正版软件，不上网，不随意插优盘，安装软件，不染病毒

9、。Waters要用诺盾杀毒。做好备份：许可文件的备份，加密狗不要损坏弄丢。保存好软件的安装光盘不要随意更改电脑的时间，否则工作站逻辑不符不要随意更改电脑名称和节点名称仪器的清洗若管路有小气泡：50%异丙醇低流速冲洗缓冲盐堵了：纯水冲洗。冲洗时不连接检测器，直接从柱温箱上端排出废液，出口选择粗一点的管路。系统脏了：30%磷酸（清洗剂）-6M硝酸（钝化剂，形成光滑的氧化膜）1年1次。过滤装置的清洗：30%硝酸浸泡，纯水清洗。样品瓶：洗洁精水超声30min，用去离子水多次灌注清洗，特别脏的用10 %硝酸浸泡。洗干净后放入干燥箱干燥。Waters擦针布要更换。关机系统清洗好后，如果多日不用，先关闭灯，再将流速降到0，然后关闭电脑和各部件的电源。如果第二天继续使用，建议不关闭灯，以0.2 ml/min低流速平衡仪器。仪器长