药物分离工程课件

1、毛细管电泳技术及其在药物分离中的应用LOGO/379538905Contents毛细管电泳的基本原理1分离模式2进样方式与检测方法3Click to add Title4在药物分离中的应用41 毛细管电泳的基本原理 毛细管电泳（CE）亦称为高效毛细管电泳法（HPCE），是一类高效快速的分离分析方法。该法系以弹性毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分的淌度（单位电场强度下的迁移速度）和分配行为的差异而实现分离LOGO/3795389051 毛细管电泳的基本原理基本原理装置分离效率电泳和电渗1.1 毛细管电泳的装置1.2 电泳和电渗在电解质溶液中，带电粒子在电场作用下以不同的速

2、度定向迁移的现象叫电泳。CE所用的石英毛细管柱，在pH3的情况下，其内表面带负电，和溶液接触时形成双电层。在高电压的作用下，双电层中的水合阳离子引起流体整体向负极方向迁移的现象叫电渗。 1.2 电泳和电渗 在毛细管壁双电层的扩散层中的阳离子，相对于毛细管壁的负电荷表面，形成一个圆筒形的阳离子鞘，在电场作用下，溶剂化了的阳离子，沿滑动面与紧密层作相对运动，携带着溶剂一起向阴极迁移，便形成了电渗流（electroosmotic flow ,EOF）1.2 电泳和电渗 1.2 电泳和电渗电渗流的意义电泳过程中，伴随着电渗现象电渗流的速度比电泳速度快57倍利用电渗流可将正、负离子或中性分子一起向同一方

3、向，产生差速迁移，在一次电泳操作中同时完成正、负离子的分离分析 毛细管电泳中，溶液整体移动，电渗流的流动为平流，塞式流动，谱带展宽很小； 液相色谱中的溶液流动为层流，抛物线流型，管壁处流速为零，管中心处的速度为平均速度的2倍，引起谱带展宽较大。1.3 分离效率 2 毛细管电泳的分离模式 1 毛细管区带电泳 2 胶束电动色谱 3 毛细管凝胶电泳 4 毛细管等速电泳 5 毛细管等电聚焦 6 毛细管电色谱 CZE 也称为毛细管自由溶液区带电泳 毛细管电泳中最基本的操作模式，应用最广泛， 是其它各种操作模式的母体 2.1 毛细管区带电泳 2.2 胶束电动色谱 电动色谱:是以电渗流驱动的一种色谱技术 胶

4、束电动色谱 MEKC:是以胶束为假固定相的一种 电动色谱，是电泳技术和色谱技术的结合加入高于胶束临界浓度的表面活性剂 2.3 毛细管凝胶电泳 CGE 是毛细管自由溶液区带电泳派生出的一种电泳方式 用多孔性的凝胶或其它筛分剂作介质，网状结构， 按分子的大小分离 毛细管凝胶电泳综合了电泳技术和平板凝胶电泳的优点 :电泳峰尖锐，柱效极高短柱上实现极好的分离试样容量为1012g主要缺点:制备柱较困难，寿命较短已成为分离分析生物大分子如蛋白质、多肽、核 酸、DNA等强有力的工具。例应用CGE分离与激光诱导荧光检测相结合，用于DNA序列快速分析。 2.3 毛细管凝胶电泳 2.4 毛细管等速电泳 分离是建立

5、在试样中各组分的电泳淌度不同，等速电泳中被分析试样进样前后分别使用前导电解质溶液和终结电解质溶液，分离后的各组分区带以相同的电泳迁移速度通过检测窗口。 2.4 毛细管等速电泳LOGO/3795389053 进样方式和检测方法3.1 进样方式进样方式和检测方法3.2 检测方法LOGO/3795389053.1 进样方式（1）进样不均 （2）离子丢失 （3）特别适 用黏度大的试样（1）进样端 加压 （2）出口端抽真空 （3）虹吸进样试样通过扩散作用进入分离柱端口处。流体力学进样方式电动进样方式扩散进样 3.2 检测方法 检测器 检出限（mol/L） 特 点UV可见吸收 10-510-6 近似通用，常规应用荧光 非相干光诱导 10-710-8 灵敏，但试样通常要衍生 激光诱导 10-1010-12 高灵敏度，价格昂贵，要衍生化电化学 电导 10-510-7 通用性 安培 10-810-9 选择性，灵敏度高，微量质谱 10-710-9 仪器复杂，可获结构信息， 质量灵敏度高放射 10-910-11 灵敏度高，操作有特殊要求 LOGO/3795389054 在药物分离中的应用手性化合物氨基酸非甾体