水母毒素的分离提取及溶血活性研究

1、水母毒素的分散提取及溶血活性研究【摘要】目的研究水母毒素的提取及其溶血活性的影响因素。要领通过缓冲溶液浸娶超声波细胞破裂等操纵从水母触手的刺丝囊中提取毒素，接纳分光光度法对水母毒素的溶血活性举行测定，并研究了温度、浓度和二价金属离子等因素对毒素溶血活性的影响。效果水母毒素的溶血活性对温度敏感，随着浓度的进步而增大，而且依靠于a2+，g2+等二价金属离子的存在。结论水母毒素具有较强的溶血活性，但不不变。【关键词】水母毒素；提取；溶血活性Keyrds:Jellyfishven;Extratin;Haelytiativity生物毒素是生物活性最高、毒性最大的一类化学物质，对探究生运气动历程和生长新药

2、均有紧张代价。药物是指对失调的机体出现有益作用的化学物质。药物的药理活性和毒副作用重要取决于药物分子的化学布局。化学布局与药物效应之间的干系即构效干系是药物研究的紧张根据。海洋生物毒素所特有的化学布局使其极有大概成为特异的高活性、高药效的先导化合物，以具有确定药理效用的海洋毒素为先导化合物，对先导化合物举行布局或性能的改革，寻求新的疗效更好的药物是当前新药研究的紧张标的目的之一1,2。水母属于腔肠动物门，是一个紧张的海洋浮游生物类群，它种类多、数目大，漫衍普及，我省黄海范畴就具有富厚的水母资源，重要的水母品种有海蛰、海月水母和多管水母等。对付具有食用代价的海蛰已经于2022年实现了全人工育苗养

3、殖，如江苏连云港市已经在赣榆、宿城、燕尾港等地创立了养殖基地。水母在食用及药用上都具有研究、开拓的代价，自古以来水母用于传统中药，有清热解毒、软坚散结、落压、抑菌、抗朽迈的成果，可用于治疗高血压并气管炎、哮喘、胃溃疡、中枢神经体系疾病等，并可作为神经构造的活性物质和构造胺开释剂。水母的触手上漫衍着腔肠动物所特有的刺丝囊，此中含有大量的毒素身分。毒素卵白是水母的重要活性身分之一，它是布局新奇奇特的肽类毒素，具有多种生物活性，如溶血性、酶活性、神经毒性、皮肤坏死、肌肉毒性、肝脏毒性以及心脏毒性等3,4。溶血毒素(Helysin)是指多由病原微生物所产生的，能导致机体红细胞及其他有核细胞裂解的毒素类

4、物质，它存在于环节动物、节肢动物、软体动物、棘皮动物等动物的血清或体液中，可以单独作为调治因子或通过卵白水解酶发挥作用，其活性巨细通过溶解水解脊椎动物的血细胞表现，终极的溶解效应被称作溶血活性。如今溶血毒素研究以微生物为主，无脊椎动物溶血毒素研究报道非常少，有关水母毒素溶血性能的研究报道很少5。本实行通过缓冲溶液浸娶超声波细胞破裂等技能从水母触手的刺丝囊中提取水母毒素，接纳分光光度法对其溶血活性举行测定，并研究温度、pH值、金属离子等理化因子对其溶血活性的影响。1质料与要领1.1水母的网罗1.2水母毒素的提取及浓度测定取必然重量的冷冻的水母触手，在冷冻状态下放入浸取剂0.01l/L，pH6.0

5、的磷酸缓冲液中，在保持温度低于4的条件下浸泡3h，匀浆10in后，超声波破裂，超声波功率200、总事情时间2in、事情/间隙时间15/30S。破裂后的物料于4、13000r/in的条件下高速冷冻离心15in，所得到的上清液即为水母毒素粗品。以牛血明净卵白(BSA)作尺度，在塑料器皿中用Bradfrd法(1976)测定水母毒素粗品中卵白质的浓度(g/l)。1.3鸡红细胞悬液的制备网罗奇怪鸡血50l，2000r/in离心5in，取上层液体，以pH7.4的磷酸盐缓冲溶液含136.9l/LNal，2.68l/LKl，10.14l/LNa2HP4，1.76l/LKH2P4离心洗涤3次，用磷酸盐缓冲溶液配

6、成体积分数为1%的鸡红细胞悬液，4冰箱保存备用。1.4水母毒素溶血活性的测定要领取2l体积分数为1%的鸡红细胞悬液与必然量的水母毒素混淆匀称，37保温30in，间歇振荡。在比较管中参加2l体积分数为1%的鸡红细胞悬液和0.5l磷酸盐缓冲溶液，与实行管同时保温，取出后立即冰浴以停顿反响，经2000r/in离心5in后得到上清液。以比较管上清液作空缺，于540n处测吸光度(A)，A值每增长0.001界说为1个溶血活性单元u。所测定必需重复3次，记载3次效果的均匀值。1.5理化因素对水母毒素溶血活性的影响在8支实行管中取必然量的水母毒素与2l体积分数为1%的鸡红细胞悬液混淆匀称，使水母毒素的终极浓度

7、别离为：0.02,0.05,0.1，0.2，0.5，0.8，1.0，1.2g/l。将上述水母毒素实行管别离在4，25，37，45，60，100下恒温处置惩罚20in后，按“1.4的要领检测其对鸡红细胞的溶血活性。为研究二价金属离子对水母毒素溶血活性的影响，并去除其他离子的滋扰，将水母毒素在4的缓冲溶液中透析4h，透析缓冲溶液的构成为：0.01l/L，pH6.0的磷酸缓冲液100l中参加1g十二烷基硫酸钠和1lb-巯基乙醇。取2l体积分数为1%的鸡红细胞悬液与0.5l透析过的水母毒素混淆匀称放入9支实行管19#，19#实行管中别离参加0.1l的差异浓度的al2、gl2、Znl2溶液，使二价金属离

8、子的终极浓度别离为5，10，15l/L，10#实行管中参加2l鸡红细胞悬液和透析过的水母毒素、11#实行管中参加2l鸡红细胞悬液和未透析的水母毒素，比较管中参加0.1l磷酸盐缓冲溶液作为空缺比较，实行管和比较管同时在37处置惩罚30in，检测溶血活性。全部实行管的水母毒素卵白的终极含量都为0.5g/l。2效果2.1温度、浓度对水母毒素溶血活性的影响效果见表1。由实行效果可以看出，在实行浓度范畴内，随着水母毒素浓度的进步，溶血活性增大。当浓度低于0.1g/l，险些没有活性；当浓度高于0.8g/l，活性增大不明显。表1差异浓度的水母毒素经差异温度预处置惩罚后的溶血活性浓度略随着预处置惩罚温度的进步，水母毒素的溶血活性低落，预处置惩罚温度高于45时，溶血活性明显大幅度落落。预处置惩罚温度到达100时，毒素卵白变性，溶血活性完全丧失。这反响水母毒素的溶血活性对热黑白常不不变的。2.2二价金属离子对溶血活性的影响金属离子对溶血活性的影响实行效果见表2。效果表现，水母毒素透析后，溶血活性明显低落；添加al2，gl2，Znl2后，溶血活性增大，而且随着二价金属离子浓度的进步，活性加强。说明水母毒素的溶血活性依靠于二价金属离子的存在，与雷同的文献报道同等5。表2差异浓度金属离子作用下的水母毒素溶血活性略3结论水母毒素的