浆样树突状细胞重建与单倍体相合造血干细胞移植的慢性移植物抗宿

1、浆样树突状细胞重建与单倍体相合造血干细胞移植的慢性移植物抗宿【摘要】为了讨论浆样树突状细胞(PD)在单倍体相合造血干细胞移植术后重建的特点及其与慢性移植物抗宿主病GVHD和患者复发的关系，采用流式细胞术对19例白血病患者移植后外周血树突状细胞D亚群晚期重建进展动态监测，并将其与患者GVHD和复发的关系进展分析。结果显示：白血病患者髓样树突状细胞D、D1和D百分比和绝对细胞数以及D/PD比率均低于正常对照(P0.05)，而髓样树突状细胞2D2、PD百分数与对照组相比无统计学差异。患者移植后PD比例于12月时到达正常P=0.494，而PD绝对值和其余各亚群比例及数量均于移植后9月时恢复到正常程度，

2、与对照组相比无统计学差异P0.05；D/PD于移植后120天时已到达正常对照组程度P=0.602。发生GVHD患者移植后120天PD比例高于未发生组；患者复发后D1比例及数值下降，而D2和PD比例及数值略上升。结论：白血病患者单倍体相合造血干细胞移植前外周血D比例、绝对数及D/PD比率均减少；移植后D/PD比率恢复较快；各亚群比例和数量在移植后9月后根本恢复正常；且恢复情况与慢性移植物抗宿主病发生和患者复发相关。【关键词】单倍体相合造血干细胞移植；浆样树突状细胞；慢性移植物抗宿主病；白血病复发InvestigatinfPlasaytidDendritiellRenstitutinandItsR

3、elatinshipithGVHDandRelapseafterHaplidentialHeatpietiSteellTransplantatinAbstratTinvestigatetheharateristisandsignifianefrenstitutinfperipheralbldplasaytiddendritiell(PD)preursrsafterallgenEihuanleukyteantigenisathed/haplidentialheatpietisteelltransplantatin,anditsrelatinshipithhrnigraftversushstdis

4、easeGVHDandrelapse，19patientsithleukeiaereenrlledfrthisstudy.Peripheralblddendritiell(D)subsetsfpatientsandhealthyntrlseredetetedbyflytetry,andtherrelatinsbeteenrenstitutinfDandGVHD,relapseereanalyzed.Theresultsshedthatparedithhealthysubjets,patientsithleukeiahadasignifiantlydereasedprprtinandabslut

5、enuberfyeliddendritiell(D),D1,DandtheratifD/PD(P0.05).ThereerentstatistiallydifferentinD2andPDbeteenpatientsandhealthysubjets.Aftertransplant,alltheprprtinfBandabslutenubersfDreahedthealthyntrlslevelsat9nths(P0.05),besidestheprprtinfPDhihreahedthealthyntrlslevelsat1yearP=0.494.paredithlevelsbefrerel

6、apse,theprprtinsfD1,D,DandtheratifD/PDereler,butprprtinsfD2andPDereslightlyhigherafterrelapse.PatientsithahighPDreveryprfilehadaniprveduulativeinidenefGVHDinntrasttpatientsithalPDreveryprfilenday120aftertransplantatin(P=0.007).Itisnludedthatparedithhealthysubjets,denvleukeiapatientshaveasignifiantly

7、dereasedprprtinandabslutenuberfDandtheratifD/PDbefrehaplidentialheatpietisteelltransplantatin;hileratifD/PDanbenralizedithrelativerapidity,theprprtinsfallDsubsetsreahedtnrallevelsnthehleat9nthsaftertransplantatin,andalsreverylevelfDsisrrelatedithurrenefGVHDandrelapse.Keyrdshaplidentialheatpietisteel

8、ltransplantatin;plasaytiddendritiell;hrnigraftversushstdisease;leukeiarelapse中国实验血液学杂志JExpHeatl2022;15(2)浆样树突状细胞重建与人类白细胞抗原不合/单倍体相合造血干细胞移植慢性移植物抗宿主病/复发关系初探材料和方法对象患者从2022年2月至2022年4月间，对在北京大学人民医院血液病研究所行HLA不完全相合单倍体移植的19位患者和12例安康亲缘供者进展研究。患者男性14例，女性5例，中位年龄2112-51岁。19例患者中急性髓性白血病5例，急性B淋巴细胞白血病6例，慢性髓性白血病7例，骨髓增生

9、异常综合症/急性髓性白血病1例。所有患者在进入研究前均签署知情同意书，供者标本在获取前均得到本人同意，本研究经医院伦理委员会审核通过。预处理方案供者发动及造血干细胞采集移植物抗宿主病预防和治疗应用环孢菌素A+霉酚酸酯+短程甲氨喋呤方案。环孢菌素A2.5g/kgd静脉滴注,移植前9天至肠道功能恢复正常后改为口服，一般用至移植后9-12月；霉酚酸酯0.5g每12小时1次，口服，移植前10天至植活后减半，后渐停药；甲氨喋呤移植后1天15g/2，移植后3、6、11天10g/2。GVHD根据受累器官和广泛程度分为局限型和广泛型。局限型GVHD包括局限的皮肤损害和(或)本病所致的肝脏损害。广泛型GVHD有

10、下述二者之一加上另外4项中任意3项:皮肤全身广泛受损;病理证实部分皮肤病变并兼有GVHD的肝损害。另外4项包括:肝脏病理呈慢性重症肝炎或肝硬化,眼部枯燥(Shirer试验湿度仅5),唾液腺或口腔粘膜有本病病理,任何其他的靶器官受损。发生GVHD后根据情况加用皮质激素、sA、F、FK506、依木兰等治疗。植活监测流式细胞术检测分析细胞外表标记每管取新颖抽取的EDTA抗凝血至少100l，分别参加各种抗体及阴性对照抗体10l,4避光孵育15分钟；加溶血素2l室温避光10分钟，溶解红细胞；然后300g离心5分钟,弃上清,用PBS将标记细胞洗涤2次；参加含1%多聚甲醛PBS200l,固定后24小时内上流

11、式细胞仪检测。统计学处理结果病人特点19位患者和12例安康亲缘供者纳入本研究，HLA配型3/6不合10例，2/6不合7例，1/6不合2例。发生GVHD11例，其中局限型7例，广泛型4例；复发2例，死亡5例，余无病生存。详细情况见表1。外周血D前体细胞晚期重建正常对照组和患者移植前的D及其亚群12例来源于安康供者的外周血标本被作为对照组。白血病患者预处理前D1、D及D在白细胞中所占百分比较正常对照组明显减低，分别为D10.03%vs0.435%；D0.045%vs0.645%和D0.125%vs0.76%(P均0.01)；而D2和PD所占的百分比虽中位数亦低于对照组，分别为0.005%vs0.0

12、35%和0.07%vs0.135%,但P0.05，无统计学差异。各D亚群的绝对值与百分比相类似，分别为D11.33/lvs26.7/l；D1.52/lvs35.56/l和D7.89/lvs42.66/l,均较正常对照组明显减低，差异具有显著性P0.01患者移植后D亚群晚期重建患者移植后晚期移植后100天外周血D各亚群的重建根本同步，各亚群在白细胞中所占比例随移植后时间推移逐渐恢复正常。如表2所示除移植后9月时PD在白细胞所占比例为0.08%(0.04%-0.11%)，仍略低于正常对照组，两者有统计学差异P=0.016外，余各亚群所占比例均于移植后9月时恢复到正常对照程度，无统计学差异P0.05

13、。患者移植后晚期移植后100天外周血D各亚群数量的重建与比例重建根本相似，各亚群重建亦根本同步且亚群的数量与比例随时间推移逐渐恢复正常。如表3所示D各亚群数量均于移植后9月时恢复到正常对照程度，与正常对照组无统计学差异P0.05。D/PD比率如前所述已于移植后30天时到达正常对照组程度，移植后晚期此趋势未出现改变，各时间点与正常对照组相比均无统计学差异P0.05。D前体细胞晚期重建与GVHD的关系我们对移植后120天的D/PD也做了分组分析，结论和PD相似，低D/PD组GVHD的累计发生率为明显低于高D/PD组，但无统计学差异P=0.068。患者移植后复发前后D亚群变化本研究过程中有2例患者出现复发，监测其复发前后外周血D各亚群的变化，结果显示复发后各亚群比例及数量向患者移植前趋势转化。D1、D、总D的比例及数量均较移植前下降，D2和PD较复发前上升趋势(表4，表5)。讨论D是专职的抗原呈递细胞，可以呈递具有细胞遗传学异常的白血病细胞，尤其是D1，通过诱导Th1发育促进抗肿瘤免疫。白血病患者D数量减少，尤其是D1数量减少，导致肿瘤细胞获得免疫逃逸。Reddy等