蛋白质沉淀反应实验资料

1、文档编码 : CU4Q7F1G8P4 HF7R6A2V8Z1 ZF7P3X8L8T2精品文档 蛋白质的沉淀反应 一,目的和要求 1,加深对蛋白质胶体溶液稳固因素的熟识 2,把握几种沉淀蛋白质的方法 3,明白蛋白质变性与沉淀的关系 二,沉淀反应 （一）原理 在水溶液中, 蛋白质分子的表面上由于有水化层和同性电荷的作用, 所以成为稳 定的胶体颗粒；但这种稳固的状态是有条件的；在某些理化因素的作用下,蛋白质分 子表面带电性质发生变化,脱水甚至变性,就会以固态形式从溶液中析出,这个过程 就称为蛋白质的沉淀反应；蛋白质的沉淀反应可分为以下两种类型： 1,可逆沉淀反应 沉淀反应发生后, 蛋白质分子内部结构

2、并没有发生大的或者显著变化； 在沉淀因 素去除后,又可复原其亲水性,这种沉淀反应就是可逆沉淀反应,也叫做不变性沉淀 反应； 属于这类沉淀反应的有盐析作用, 等电点沉淀以及在低温下短时间的有机溶剂 沉淀法等； 2,不行逆沉淀反应 蛋白质在沉淀的同时,其空间结构发生大的转变,很多副键发生断裂,即使除去 沉淀因素,蛋白质也不会复原其亲水性,并丢失生物活性,这种沉淀反应就是不行逆 沉淀反应；重金属盐,生物碱试剂,强酸,强碱,加热,猛烈震荡,有机溶剂等都能 使蛋白质发生不行逆沉淀反应； （二）盐析 1,材料与试剂 （ 1）10%的卵清蛋白溶液（要求新奇配制） ,浓蛋白溶液（2）饱和硫酸铵溶液 （3） 固

3、体硫酸铵 （4）滤纸,玻棒 2,操作方法 （ 1）取试管一支,加入浓蛋白溶液 2ml,再加等量的饱和硫酸铵溶液,混匀后 静置 10 分钟将显现沉淀；此沉淀物为球蛋白； （ 2）取上清液于另一支试管； 精品文档 第 1 页,共 3 页精品文档 （ 3）向上清液液中加入硫酸铵粉末,边加边用玻棒搅拌,直至粉末不再溶解为 止；静置数分钟后,沉淀析出的是清蛋白； （ 4）向两支试管中分别加水,观看其沉淀是否溶解； （三）重金属盐沉淀 重金属离子如 Pb 2+, Cu2+, Hg2+, Ag 2+等可与蛋白质分子上的羟基结合生成不 溶性金属盐而沉淀： Pr + NH 3 OH -Pr NH 2Ag + P

4、r NH 2 COO-COO -COOAg 重金属盐类沉淀蛋白质的反应通常很完全,特殊是在碱金属盐类存在时；因此, 生化分析中, 常用重金属盐除去体液中的蛋白质； 临床上用蛋白质解除重金属盐引起 的食物中毒； 1,材料与试剂 （ 1） 10% 的卵清蛋白溶液（ 2） 氢氧化钠溶液 （ 3） 3% 硝酸银溶液 （4）0.1% 硫酸铜溶液 （ 6）试管 3 支 2,操作方法 （ 1）取试管 2 支,分别编号后各加入 1ml 10% 的卵清蛋白溶液； （ 2）各管再加入一滴 氢氧化钠溶液； （ 3）向 1 管加 3% 硝酸银溶液 34 滴；向 2 管加 0.1% 硫酸铜溶液 34 滴；混 匀后观看沉

5、淀的生成； （四）生物碱试剂沉淀反应 生物碱试剂能与蛋白质分子中的氨基结合生成不溶性沉淀,反应如下： Pr + NH 3 CCl 3COOH Pr + NH 3 .OOCCCl 3 COO-COOH 1,材料与试剂 精品文档 第 2 页,共 3 页精品文档 （ 1） 10% 的卵清蛋白溶液 2,操作方法 （ 2） 5% 三氯乙酸溶液 取试管一支, 加 10% 的卵清蛋白溶液 20 滴后再加入 5% 三氯乙酸溶液 10 滴,混 匀后观看沉淀的显现； （五）有机溶剂沉淀反应 1,材料与试剂 （ 1） 10% 的卵清蛋白溶液 2,操作方法 （ 2） 95% 乙醇溶液 取试管 1 支,加 10% 的卵清蛋白溶液 10 滴后,再加入 95% 乙醇溶液 20 滴,边