西番莲叶有效成分及其非酶糖基化作用的研究

1、西番莲叶有效成分及其非酶糖基化作用的研究【摘要】目的研究西番莲叶有效成分抑制其非酶糖基化作用。方法运用GF254薄层层析，HPL等对西番莲叶石油醚部位进展提取别离。结果石油醚部位的主要黄酮物质为芸香苷。结论芸香苷为西番莲叶石油醚部位抑制蛋白质非酶糖基化作用的主要成分。【关键词】西番莲；芸香苷；非酶糖基化；高效液相色谱；气相色谱-质谱联用西番莲Passiflra是西番莲科(Passiflraeae)西番莲属的多年生常绿藤本植物。西番莲果大，可鲜食，其汁蛋黄色，尤其突出的是，其果汁所含的六十多种酯类等香味成分使其具有强烈诱人的风味和香气，被誉为“百香果1。祖国医学在治疗糖尿病及其并发症方面有悠久的

2、历史，如何从中草药中寻找抑制蛋白质糖基化的有效成分是一项非常有价值的工作，目前这方面的研究还不多。蛋白质非酶糖基化在糖尿病血管并发症的发生中占有重要地位。蛋白质与羰基化合物(葡萄糖、果糖和乙二醛等)发生非酶糖基化反响，最终可形成一系列不可逆的糖基化终产物AGEs。AGEs可与蛋白质发生交联，改变蛋白质的生理活性，引起一系列病理生理改变。此外，AGEs与动脉粥样硬化的发生开展亲密相关2。因此，如何抑制蛋白质的非酶糖基化是近年来国内外研究的热点。目前国外已证实，氨基胍,二甲双胍可抑制蛋白质的糖基化，并相继开发出一系列药物3。本文通过对西番莲叶用95%乙醇浸泡7d4，用石油醚萃取别离，对乙醇和石油醚

3、局部薄层分析、HPL分析，并对提取物进展了抑制糖基化作用的研究。1仪器与材料1.1仪器高效液相色谱日本岛津公司)；pH-3型酸度计；荧光分析仪器日本岛津；DHG-9246A型电热恒温鼓风枯燥箱上海精宏实验设备；F-117中草药粉碎机天津泰斯特仪器；旋转蒸发仪。1.2试剂乙醇，醋酸乙酯，石油醚，正丁醇,乙二醛，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，葡萄糖，D-果糖，叠氮化钠，牛血清白蛋白，盐酸二甲双胍，芸香苷。2方法2.2鉴定HPL的色谱条件：用2%的乙酸溶液和乙腈2080做流动相，天津天和18柱，2504.6，波长337n,灵敏度0.01AuFs,柱温30，流速0.8l/in，进样量20l5。芸香苷和石油醚

4、部位的薄层分析提取物的HPL的色谱见图12。通过对上面HPL谱图分析可知，芸香苷对照品的主峰出峰时间与西番莲石油醚部位的主峰出峰时间一样，可以得出石油醚部位通过薄层色谱别离得到了芸香苷。转贴于论文联盟.ll.2.3非酶糖基化2.3.1西番莲提取物的制备文献报道了芸香苷和西番莲具有抑制糖基化作用6，但是石油醚部位抑制蛋白质非酶糖基化作用的研究还未见报道。所以主要对石油醚部位进展了非酶糖基化研究。称取西番莲粉5g，用150l95%的乙醇浸泡7d，重复3次，减压抽滤用下面的滤液到旋转蒸发仪蒸发得到浸膏，用水溶解所得浸膏，依次用12，9，6l的石油醚、醋酸乙酯、正丁醇各萃取3次，将所得的不同提取层的溶

5、液置于60枯燥，得到各提取层所得的石油醚、醋酸乙酯、正丁醇、水层提取物质量，每一层各取10g用无水乙醇溶解定容到50l备用。2.3.2溶液配制pH=7.4磷酸盐缓冲液PBS的配制7：精细称取Na2HP47.1635g溶解至100l,NaH2P40.9368g溶解至30l，配制成了0.2l/L的Na2HP4100l和0.2l/L的NaH2P430l，然后按8119体积比配制成0.2l/l的磷酸盐缓冲液100l。2.3.3蛋白质非酶糖基化反响根据文献，反响液由12g/l乙二醛，10g/l牛血清白蛋白和2g/l叠氮化钠在pH7.4，0.2l/L的磷酸缓冲液，2l反响液与2l水混合，于37恒温水浴箱避

6、光孵育，15d测定荧光强度(荧光分光光度计，日本岛津公司。测定条件:激发波长370n，狭缝3n，发射波长440n，狭缝3n)。2.3.4药物干预试验将2l提取液与2lpH7.4的PBS90下混合40in，去除有机物，再参加2l反响液，37恒温水浴箱避光孵育。芸香苷和二甲双胍(100l/L)溶液2l分别与2l反响液作为阳性药物对照，2l水与2l反响液混合作为对照组。2.3.5蛋白质糖基化抑制率的测定根据糖基化终产物有自发荧光的特性，采用荧光法测定荧光值(测定条件:激发波长370n，狭缝3n，发射波长440n，狭缝3n)。根据以下公式计算抑制率：I=a-ba式中，I为抑制率;a为对照，即不加样品液

7、的荧光强度;b为样品荧光强度。2.3.6数据处理采用方差分析检验其显著性，中药抑制率指标均以s表示。3结果取定容于50l的石油醚部位、醋酸乙酯部位、正丁醇部位、水层部位各2l，分别参加2l反响液混合。取定容于50l的石油醚部位，精细量取2,1.6，1.2，0.8，0.4l分别与2l反响液混合，分别命名为样1，样2，样3，样4，样5。西番莲提取物的抑制率结果见图3，西番莲石油醚部位的荧光强度和抑制率见图4。通过图3，可以得出芸香苷的抑制率最强，其次为石油醚部位，而且石油醚部位的作用强于二甲双胍，西番莲抑制蛋白质非酶糖基化的研究还是有一定的研究价值。通过图4可知，西番莲石油醚部位的抑制率是随着浓度

8、的减小而减校4讨论本文通过对西番莲叶的石油醚提取物进展了薄层分析，得出石油醚局部含有芸香苷，芸香苷具有抑制蛋白质非酶糖基化作用，比拟了西番莲的有效成分芸香苷和二甲双胍的作用效果，发现芸香苷效果明显强于二甲双胍，可见西番莲叶应用可能会为糖尿病患者带来福音。【参考文献】1陈智毅,李升峰,吴继军，等.西番莲的加工利用研究J.现代食品科技,2022,22(1:186.2Vlassarah.Advanedglslatinend-prdutesandatherslersisJ.Anned,1996,28:419.3陈睿杰.刘允坚.糖尿病治疗药物的研究现状J.广东药学院学报，2001,17:131.4art

9、inaRudniki，arsRbertdelivEira，TiagdaVEIgaPereira,etal.AntixidantandantiglyatinprpertiesfPassiflraalataandPassiflraedulisextratsJ.Fdheistry，2022,100:719.5ntiaA.Pereira,JaneteH.Yariake,AHPTLDensitetriDeterinatinfFlavnidsfrPassiflraalata,P.edulis,P.inarnataandP.aeruleaandparisnithHPLethdJ.PhytheialAnalysisPh