实验二气孔状态观察

1、关于实验二气孔状态观察第1页，共27页，2022年，5月20日，22点10分，星期三肾形（双子叶植物）哑铃形（单子叶植物）第2页，共27页，2022年，5月20日，22点10分，星期三气孔密度：单位叶片面积上的气孔数 （显微镜视野面积内观测到的气孔数）气孔开度：保卫细胞内壁间跨距开度第3页，共27页，2022年，5月20日，22点10分，星期三不同植物气孔的数目和大小第4页，共27页，2022年，5月20日，22点10分，星期三掌握测定气孔密度和开度的方法；学会分析影响因素对气孔运动的调节；学会利用显微镜物镜测微尺（物尺）标定目镜测微尺（目尺）的方法。1. 实验目的 第5页，共27页，2022

2、年，5月20日，22点10分，星期三2.1 印迹法以有机物质的溶胶（火棉胶、牛皮胶、醋酸纤维素胶、指甲油等）涂在植物的表面, 胶体风干后凝成薄膜，这层膜上印有表皮组织各细胞的界迹边痕，从而显示出气孔的开闭情况 。将印膜撕下，供观察和测量。除用来观察气孔状况外，还可用于观测植物表皮上的细胞、茸毛、蜜腺、蜜盘、刺、鳞片等。优点: 非破坏性取样；方便快捷。缺陷: 界迹边痕不明显的样品印迹模糊；凹陷气孔难以取到印迹； 清晰薄膜制作有难度。2. 实验原理 第6页，共27页，2022年，5月20日，22点10分，星期三2.2 固定法优点: 镜下观察较印迹法的醒目；植物材料可长期保存；凹陷气孔仍可观察。缺陷

3、: 破坏性取样；不适用于下表皮难于剥离的样品观察。 无水乙醇能使植物细胞迅速脱水、死亡，因而细胞壁硬化、细胞形状固定，气孔也得以保持原形，有利于以后镜检研究 。第7页，共27页，2022年，5月20日，22点10分，星期三2. 3 K+ 对气孔开度的影响气孔运动的机制（4种假说）:淀粉与糖转化学说K+积累学说苹果酸代谢学说玉米黄素假说第8页，共27页，2022年，5月20日，22点10分，星期三 在光下，保卫细胞中的叶绿体通过光合磷酸化生成ATP，ATP驱动质膜上的K+-H+泵，使保卫细胞能逆浓度梯度从周围表皮细胞吸收K+，或从外界溶液中吸收K+ ，从而降低其渗透势，促进保卫细胞吸水，气孔开放

4、。 K+在保卫细胞的积累，可以促进气孔开放。 Na+可以代替K+，使气孔开放，但效果如何？K+积累学说第9页，共27页，2022年，5月20日，22点10分，星期三蚕豆叶片，竹叶菜（Commelina benghalensis） 载玻片、盖玻片、显微镜、测微尺、培养皿印迹法：火棉胶、棉花球、镊子、刀片；固定法：无水酒精、镊子0.5% KNO3、NaNO3溶液光源（生长箱或自然光）3. 材料、仪器设备与试剂第10页，共27页，2022年，5月20日，22点10分，星期三目镜测微尺(目尺)：是一块可放在目镜内隔板上的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有等分为50小格和100小格两种。 用以测量经

5、显微镜放大后的物像大小。刻度大小随放大倍数变化而改变。物镜测微尺(物尺)：是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格，每格长10m。 实际长度不受放大倍数影响。专用于校正目镜测微尺 (目尺)每格的相对长度。第11页，共27页，2022年，5月20日，22点10分，星期三目镜测微尺 物镜测微尺 第12页，共27页，2022年，5月20日，22点10分，星期三4. 实验步骤1）计算显微镜视野直径和面积（ 40，物尺） 物尺放在视野直径线计算直径，视野面积S=(d/2)2。2）用物尺标定目尺（ 40） 由于不同显微镜镜筒长度不同，或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目尺每小格所代

6、表的实际长度也不一样。 因此，用目尺测量物体大小时，必须先用物尺校正，以计算出在一定放大倍数目镜和物镜下目尺所代表的实际长度，然后才能用来测量物体大小。 第13页，共27页，2022年，5月20日，22点10分，星期三低倍镜下找到物尺，并移至视野中部，高倍镜下标定目尺。 目尺每格10 20/ 29（m）目尺物尺每格10m目尺29格对物尺20格第14页，共27页，2022年，5月20日，22点10分，星期三视野10格目尺r = ? 计算气孔密度17格目尺对应6 格物尺目尺每格610 / 17 （um）测气孔大小目尺17格物尺6格第15页，共27页，2022年，5月20日，22点10分，星期三计算

7、气孔开度？m第16页，共27页，2022年，5月20日，22点10分，星期三将火棉胶均匀涂抹于叶片下表皮表面，风干2 min，用镊子揭开一层薄膜；将薄膜平铺在稍有湿润(哈气)的载玻片上，压上盖玻片，镜检；低倍镜下选视野，高倍镜下观察记数，观察3个视野的气孔数目。3）印记法观察气孔密度第17页，共27页，2022年，5月20日，22点10分，星期三4） 固定法观察气孔密度用镊子撕剥叶片下表皮（用刀片切一小口以利于撕取或直接将镊尖插入下表皮后侧拉），迅速（愈快愈好）放入无水乙醇中固定23 min，把固定好的表皮平放在载玻片上，加几滴无水乙醇，压上盖玻片，镜检，低倍镜下选视野，高倍镜下观察记数，观察

8、3个视野的气孔数目。 第18页，共27页，2022年，5月20日，22点10分，星期三5） K+、Na +对气孔开度的影响3个培养皿中分别放0.5%KNO3、0.5%NaNO3溶液和蒸馏水各15 ml；每个培养皿放23 张从相似叶位/相近大小的叶片上取下的下表皮；25下，光照处理60 min； 依次制片和镜下观察气孔开度，记录与开度相应的目尺格数。每个处理随机观察5个气孔。第19页，共27页，2022年，5月20日，22点10分，星期三实验步骤1）计算显微镜视野直径和面积（ 40，物尺）2）用物尺标定目尺（ 40）3）印记法观察气孔密度：将火棉胶均匀涂抹于叶片下表皮表面，风干2 min，用镊子

9、揭开一层薄膜；将薄膜平铺在稍有湿润(哈气)的载玻片上，压上盖玻片，镜检，观察3个视野的气孔数目。4）固定法观察气孔密度：用镊子撕剥叶片下表皮，迅速放入无水乙醇中固定23 min，把固定好的表皮平放在载玻片上，加几滴无水乙醇，压上盖玻片，镜检，观察3个视野的气孔数目。5）K+、Na+对气孔开度的影响：3个培养皿中分别放0.5% KNO3、0.5% NaNO3溶液和水各15 ml；每个培养皿分别放23张从相似叶位/相近大小的叶片上取下的下表皮；25下，光照处理60 min；依次制片和镜下观察气孔开度，记录与开度相应的目尺格数。每个处理随机观察5个气孔。第20页，共27页，2022年，5月20日，2

10、2点10分，星期三1）比较印迹法和固定法测定的气孔密度，如果两者结果有差异，试加以分析。5. 结果与分析表1 不同方法观察的气孔密度方 法 固定法 印迹法 a1 a2 a3 b1 b2 b3气孔数目平均数视野直径及面积气孔密度(个/mm2)第21页，共27页，2022年，5月20日，22点10分，星期三 气孔开度（目尺格数） 气孔开度(m) 平均开度(m) a1 a2 KNO3 a3 a4 a5 b1 b2NaNO3 b3 b4 b5 c1 c2H2O c3 c4 c5目尺标定记录 ： 表2 不同溶液处理后的气孔开度2） 以H2O为对照，分析比较K+、Na+对气孔开度的影响。第22页，共27页，2022年，5月20日，22点10分，星期三6. 注意事项 首先确定显微镜好用； 胶棉液涂均匀、超薄一层； 叶表皮取下后要迅速投入乙醇（2秒）； 物镜测微尺安全使用，切勿压破，载物台由近及远，缓慢调节； 先低倍镜下找到视野后，高倍镜下观察气孔数目、大小或标定目尺； 物尺放在视野直径线计算直径； 物尺和目尺0刻度对齐再标定，之后即可还物尺； 固定法、印迹法各观察3个视野； 胶膜朝上观察。第23页，共27页，2022年，5月20日，22点10分，星期三1）印迹法和固定法两种方法观察到的气孔密度，