培养基、耗材管理指导

1、目的与适用范围对培养基试剂与耗材进行管理。培养基管理包括培养基试剂储存，使用，保存，适用性检查。耗材管理包括耗材的验收，一次性灭菌耗材的无菌检查等。保证培养基试剂与耗材质量符合实验要求，从而减少发生问题的概率，提高实验的准确度。本文件适用于微生物实验室检测中所使用培养基与耗材的管理。职责检验人员应用本文件对培养基与耗材使用前及使用过程中进行质量控制，确保符合相关标准的要求，符合自身实验室要求。培养基管理培养基试剂的购置和验收培养基的购置检测人员按照需求申购对应的培养基试剂。试剂管理员在接到批准的采购信息后，从合格,CNAS报告，请一同索取。培养基的验收购买培养基到货后，由试剂管理员和微生物检测

2、人员共同核对生产企业提供的资料、培养,培养基试剂的储存干粉培养基应按照要求保存在阴凉干燥处或2-8冰箱，要避免阳光直射；开瓶后的干粉培养基易吸湿，应注意防潮并在有效期或6个月内用完。应每月对储存中的培养基进行常规检查，如容器密闭性复查、首次开封日期、内容物的感官检查有效日期检查等，如果培养基发生结块、颜色异常和其他变质迹象就不能再使用，超过有效期的培养基试剂应清理，同时填写于台账上。成品培养基储存应按照使用说明进行储存。开封的脱水培养基，每次使用前应对其质量进行检查，通过粉末的流动性、均匀性、结块情况和色泽变化等判断培养基的质量变化。若发现培养基受潮或物理性状发生明显改变则不应再使用。即用性培

3、养基按照产品标识要求进行储存。培养基配制与灭菌配制培养基试剂制备用水应使用实验室一级水或二级水。制备培养基所用的玻璃器皿（如吸管、试管、烧杯等）新的玻璃器皿（首次使用）和再次使用的玻璃器皿按规定方法洗涤、干燥。称量称量时要用专用的药匙，避免交叉污染而影响检验结果；干粉培养基易吸潮，如房间环境湿度较大时，应提高称量速度，完毕后及时盖紧瓶盖。溶解溶解时应注意以下事项：a配制、盛装、保存培养基请使用玻璃器皿；b容器大小需大于溶解后培养基总体积的2倍以上，避免在加热溶解过程中，c加热煮沸培养基时一定要进行搅拌，特别是琼脂类培养基；d为避免烧焦和沸腾溢出，对于少量的培养基最好使用沸水浴进行加热；e含有琼

4、脂粉的培养基，在加热溶解之前可以浸泡数分钟；f对于琼脂类培养基进行再融化时应使用先在恒温水浴锅中预热再用电加热板进行加热溶解，最多只能加热两次，第二次再融化后仍未用完的培养基应弃去；g烧糊的培养基营养物质被破坏，并可产生有毒物质，如发现焦化，或未溶解均匀前培养基有溢出，该培养基即不能使用，应重新制备。灭菌培养基一般采用高压蒸汽灭菌或煮沸灭菌，含糖或特殊培养基，按照国家标准或生产商提供的说明灭菌。已配制好的培养基必须在15分钟内灭菌，避免微生物生长繁殖而消耗养分，改变培养基的酸碱度。为避免高温破坏培养基的营养成分，降低琼脂的凝胶强度，必须严格控制灭菌温度和时间，不可二次高压蒸汽灭菌。培养基试剂配

5、制完毕请填写培养基配制与灭菌记录。pH测定在初次使用每批培养基时，均需随同检测配制一个测试培养基，在灭菌前采用精密或者pH计测试pH值，；,培养基溢出；pH试纸pH,应用1mol/LNaOH培养基溢出；pH试纸pH,应用1mol/L培养基标识和保存灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度，避免长时间保存在灭菌锅内，造成过度灭菌，影响培养基的营养成分或选择性效果。当天使用的琼脂类培养基可在恒温水浴锅中保温。在每个已灭菌的培养基容器外做好标记，填写培养基保存记录。培养基保存注意事项：a环境条件：各种培养基均应在洁净的普通冰箱内保存，以2-8左右为宜，不得冻结。b保存时限：倒好的培养基。选择性分离鉴别培

6、养基制成平板后当日用完,置保鲜膜（袋）密闭保存期限可延长至一周。从外单位购买的培养基保存时限按照产品标注的时限执行。培养基内部批号管理培养基的内部批号组成，批号为年、月、日，各取2位，年份取后2位，月和日不足2位时，分别在数字前加0，表明是本日配制的批号，再加上培养基的简写（如有写简写，没有简写2018年6月4日BHI）,批号为180604-BHI,180604-SX,SX质量检查购置的同一批次培养基其质量检查应能通过无菌检查（制备好的培养基经30-37培养48小时，真菌培养基经20-25培养72小时候后，应无菌生长）、新购的不同批次的成品化培养基在使用前应进行培养基性能测试，经检查合格的该批

7、次培养基方准许使用，否则禁止使用，做好检查记录并与供应商联系退换货。成品培养培养基的质量控制应包括物理指标和微生物指标的测试。培养基适用性检查新购的不同批次的商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试，包括物理指标和微生物指标的测试，根据测试结果及时填写培养基测试记录单、成品培养基测试记录单，菌株的选择参考GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求。物理指标控制测试20-25的pH值粉末的质量、加水后的颜色和透明度，凝固成平板后的通透性与颜色。微生物污染的控制从每批制备好的培养基中选取至少一个（或1%）平板或试管，置于35-37或按特定标准48h应无菌生长，真菌培养基经20-25培养72

8、,微生物学指标控制可根据要求选用半定量方法或定性方法（详见GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求可根据要求选用半定量方法或定性方法（详见中附表E,附表E没有涉及的培养基，,，对培养基性能进行测试。生长率将适量测试菌株的工作培养物接种至固体、半固体和液体培养基中，每种培养基上菌株的生长率应达规定的最低限值。1）半定量方法半定量方法采用生态测量技术在平板上划线，平板连续划线区域得分的总和即为生长指数G,G值不应超出标准规定的允许范围。2）定性方法定性方法采用三区或四区等划线法划出单菌落进行观察。选择性将浓度为104CFU/mLT06CFU/mL,择性应达到规定值。C.生理生化特性（选择

9、性和特异性）规定培养基的基本特性，使用一套适当的测试菌株对培养基上的目标菌的生理生化特性（菌落形态、大小等）和非目标菌的被抑制程度进行测试。D.性能评价和结果解释按照规定得到的所有测试菌株的性能均符合规定，则该批培养基品质优良；若只有物理指标和微生物指标符合规定，则该批培养基可被接收。3.6.4具体操作首先确认需要检查的培养基类型，购买商业培养基产品的主要类型有：非选择性分离和计数固体培养基，选择性分离和计数固体培养基，非选择性增菌培养基，选择性增菌培养基，7大类。7大类。3.6.4.2根据以上7大类，参考GB3.6.4.2根据以上7大类，参考GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求

10、附表E与附表D.8,对应进行填写培养基测试记录单或成品培养基测试记录单，并按照记录单进行试验。制备菌悬液。按照记录单制备管，对比0.5制备菌悬液。按照记录单制备管，对比0.5麦氏浓度比浊管制备）。非选择性分离和计数固体培养基的检查0.5麦氏浓度的工作菌悬液（挑取工作菌株于生理盐水：用瓜L,平板上划线。目标菌的划线方式参考GB4789.28-2013平板上划线。目标菌的划线方式参考GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求里条款6.2.1，然后参照附表E上生长率的要求，记录数据。3.6.4.5选择性分离和计数固体培养基的检查：目标菌的生长率计算参考3.6.4.4。非目标菌的选择性，操作参

11、考3.6.4.4，非目标菌的划线方式，参考GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求里条款6.1.2.2。非目标菌的特异性，用接种环蘸取工作菌悬液在培养基上划线分离，后参照附表E上特异性的要求，记录数据。：将培养基灭菌后分装无菌试管10mL，制备目标菌、非目标菌的工作菌悬液，用1|JL然后参照附表E上生长率的要求，记录数据。3.6.4.5选择性分离和计数固体培养基的检查：目标菌的生长率计算参考3.6.4.4。非目标菌的选择性，操作参考3.6.4.4，非目标菌的划线方式，参考GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求里条款6.1.2.2。非目标菌的特异性，用接种环蘸取工作菌悬液在

12、培养基上划线分离，后参照附表E上特异性的要求，记录数据。：将培养基灭菌后分装无菌试管10mL，制备目标菌、非目标菌的工作菌悬液，用1|JL接种环蘸取一环直接接种至液体培养基中，按适合的培养时间与温度进行培养。用目测的浊度值0-2)评估培养基。0表示无浑浊，2表示严重浑浊。目标菌的浊度值应为2,非目标菌的浊度值应为1。,发生这3.6.4.6非选择性增菌培养基、选择性增菌培养基和选择性液体计数培养基的检查,3.6.4.7悬浮培养基和运输培养基的检查：用1pL3.6.4.7悬浮培养基和运输培养基的检查测培养基的试管中,混匀后，立即用10测培养基的试管中,混匀后，立即用10pL接种环取一环工作菌培养物

13、划平行线接种平板，按标准方法中规定的培养时间和温度培养；剩余已接种菌液的待测培养基置20C-25C放置剩余已接种菌液的待测培养基置20C-25C放置45min后，再用10pL作菌培养物划平行线接种平板，按标准方法中规定的培养时间和温度培养。接种前后平板上目标菌的生长情况应均为良好。记录数据。3.6.4.8鉴定培养基和实验试剂的检查：制备3.6.4.8鉴定培养基和实验试剂的检查：制备5麦氏浓度的菌悬液，吸取1-2滴接种至培养基内，按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。需加指示剂的试验在微生物生长良好的情况下，按顺序加入指示剂，再观察结果。结果解释参照GB况下，按顺序加入指示剂，再观察结果。结果解释参照GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求附录D表D.8。记录数据。3.6.4.9检查完毕的培养基，数据填写完毕后归档。3.7培养基的保存配制并灭菌后的培养基，如果当天用不上可以进行保存，根据要求的保存温度进行保存。并填写培养基保存记录。倾倒成平板的培养基用两个灭菌的密封袋密封好，外层封口袋封口处写上保存日期，一般有效期为一周至