灵芝多糖肽对Alzheimer样大鼠海马超微结构和抗氧化能力的影响

1、灵芝多糖肽对Alzheimer样大鼠海马超微构造和抗氧化才能的影响【摘要】目的观察灵芝多糖肽(GLPP)对AlzhEier样大鼠海马超微构造、海马组织超氧化物歧化酶(SD)活性和丙二醛(DA)含量以及空间学习记忆才能的影响。方法雄性istar大鼠60只，随机分为对照组、模型组、NS组、GLPP组，每组15只。除对照组(正常昼夜节律)外，其余各组每天连续光照(光照度400Lux)24h，共30d。其间GLPP组每天1次灌胃GLPP(250g/kg);NS组灌胃一样体积的生理盐水。光照30d后rris水迷宫法测试各组大鼠空间学习记忆才能，黄嘌呤氧化酶法测定SD活性,硫代巴比妥酸比色法测定DA含量,

2、透射电镜观察海马线粒体和突触构造的改变。结果寻台埋伏期模型组大鼠较对照组明显延长(P0.05)，GLPP组较模型组明显缩短(P0.05);NS组与模型组比拟无显著差异。模型组较对照组海马SD活性降低、DA含量升高(P0.05);GLPP组较模型组SD活性升高、DA含量降低(P0.05);NS组SD活性降低、DA含量升高，与模型组比拟无显著差异。透射电镜结果显示：对照组、GLPP组大鼠海马线粒体神经轴突和神经突触根本正常;模型组和NS组大鼠海马线粒体膜构造破坏，线粒体肿胀，线粒体嵴模糊、消失，构造紊乱，神经髓鞘内神经细丝稀少，神经突触缺失、减少，突触密度降低，突触间隙不清，突触小泡减少。结论GL

3、PP可防止持续光照对大鼠海马超微构造的破坏和减轻AlzhEIer样大鼠的空间记忆障碍【关键词】灵芝多糖肽;阿尔茨海默病;自由基;rris水迷宫;透射电镜阿尔茨海默病(AlzheierDisease，AD)是一多发于老年的中枢神经系统退行性疾病，以进展性记忆减退、认知功能障碍、易激惹及睡眠障碍等为主要临床病症，病理特征主要有老年斑、神经纤维缠结、神经元死亡等，其病因及发病机制尚不清楚1，其中氧化应激在AD发病过程中起重要作用2。有研究发现，自由基参与了老年斑、神经纤维缠结、神经元死亡等特征性的病理损害3，并可引发膜脂质过氧化反响并生成丙二醛(DA),DA的产生量与脂质过氧化反响相平行4;而超氧化

4、物歧化酶(SD)是机体重要的抗氧化酶,具有去除氧自由基,保护细胞免受损伤的作用。灵芝是我国传统的延年益寿中药,具有“益精气、扶正固本的作用。灵芝多糖、灵芝多肽是其主要有效成分,以往研究说明,灵芝多糖具有去除体内自由基、抗氧化等作用5，6。本研究通过观察灵芝多糖肽(GLPP)对Alzheier样大鼠海马超微构造、海马组织SD活性和DA含量以及空间学习记忆才能等的影响，讨论GLPP对AD的治疗作用及机制。1材料与方法1.1动物雄性istar大鼠60只,清洁级,体重180220g,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。1.2方法1.2.1试剂与药品GLPP购自南通四海植物精华，系从泰山赤灵芝中得

5、到的总糖肽，其中多糖占50%，多肽占6%，溶于加热的生理盐水，配制成2.5%的溶液，无菌过滤备用。SD和DA检测试剂盒购自南京聚力生物医学工程研究所。1.2.2模型制备大鼠随机分为对照组、模型组、NS组、GLPP组，每组15只。除对照组(正常昼夜节律)外，其余各组每天连续光照(光照度400Lux)24h，共30d。其间GLPP组每天一次GLPP250g/kg灌胃;NS组用一样体积的生理盐水灌胃;模型组只进展连续光照，不作其他处理。实验期间给予大鼠自由摄食与饮水。1.2.3检测指标1.2.3.1大鼠空间记忆才能的测定采用rris水迷宫系统测试大鼠的空间记忆才能。rris水迷宫实验系统由水迷宫装置

6、、水迷宫图像自动采集和处理分析系统组成。水迷宫池分为四个象限(通常以与平台所在象限相对的象限为第一象限,实验中取第一象限的埋伏期为记录成绩),训练时大鼠从任何一象限入水,面向池壁轻放于水中,记录入水时间及埋伏期(即大鼠从入水到找到平台后四肢爬上平台时所需的时间)。每只大鼠每天在4个象限学习4次,每次游泳时限为60s,即在60s内未找到平台者埋伏期记为60s，休息3060s后再进展下一次训练。本研究所采取的策略是第31天采用rris水迷宫训练7d,以第7天的埋伏期成绩反映大鼠的空间记忆才能。1.2.3.2大鼠海马SD活性与DA含量检测水迷宫训练7d后,处死大鼠,冰台上快速别离大鼠海马组织，参加冰

7、生理盐水,冰浴下超声波破碎制成10%(/v)匀浆,离心10000r/in,10in,取上清液用于SD活性和DA含量的检测，严格按照试剂盒说明书进展。1.2.3.3电镜标本的制作及大鼠海马超微构造的观察rris水迷宫测试完毕(第37天)后，每组随机提取2只大鼠用6%水合氯醛麻醉后，迅速切开胸腔，将灌注针头从大鼠心脏心尖部刺入从左心室至左心房，同时立即切开心脏右心耳，先用生理盐水(4预冷)300l灌注冲洗，随后用4%多聚甲醛+0.5%戊二醛400l(4预冷)灌注，以动物尸体展开，肢体展开变硬为标准。灌注完毕即迅速断头，在冰盘上取出脑组织，剥离左侧海马，取中段组织块放入3%戊二醛中4冷藏。海马电镜标

8、本制作及观察：将海马用冲洗液(PBS)反复清洗，冲洗完毕，将海马组织进展后固定，即用1%锇酸固定12h。制样时再切取海马组织块约13，经漂洗液充分洗涤后进展脱水：50%、70%、90%乙醇各1015in，90%乙醇+90%丙酮(11)1015in，90%、100%丙酮1015in。以上步骤均在4进展，100%丙酮1015in在室温进展。SPURR包埋剂包埋后，半薄切片12，然后做超薄切片6080n，醋酸铀及柠檬酸铅双重染色，荷兰FEITenaiG2透射式电镜下观察并照像。1.3统计学处理数据用xs表示，采用SPSS11.0软件分析，统计方法运用单因素方差分析。转贴于论文联盟.ll.2结果2.1

9、GLPP对大鼠空间记忆才能的影响平均埋伏期模型组较对照组明显延长(P0.05);GLPP组较模型组明显缩短(P0.05);NS组与模型组比拟无显著性差异。见表1。2.2海马SD活性与DA含量检测测定结果模型组较对照组海马SD活性降低、DA含量升高(P0.05);GLPP组较模型组海马SD活性升高、DA含量降低(P0.05);NS组与模型组海马SD活性、DA含量无显著差异(P0.05)。见表1。2.3GLPP对大鼠海马超微构造的影响见图1。正常对照组可见神经元内的内质网，游离核蛋白体较多，纤维丰富，突触前膜内的突触小泡明晰可见，突触间隙明晰，可见明晰的神经细丝;GLPP组构造根本正常，突触前膜内突触小泡较明晰，可见明晰的神经细丝，线粒体嵴明晰可见，线粒体膜根本完好，髓鞘轻度崩解，游离核蛋白体多;模型组神经纤维变性，游离核蛋白体减少，线粒体膜不完好，线粒体嵴模糊;突触减少、缺失，不均一，突触间隙变小不清，突触小泡数量减少，轴突内神经细丝明显减少。表1GLPP对大鼠空间记忆才能和海马SD活性和DA含量的影响3讨论灵芝(ganderaluidu)为担子菌纲，多孔菌科灵芝属，其有效成份主要有灵芝多糖、灵芝多肽、灵芝酸、萜烯类、腺苷等，其中灵芝多糖和灵芝多肽是主要活性成分，药理学研究和临床应用均已证明其具有抗肿瘤、进步机体免疫