蜕皮甾酮在大鼠非酒精性脂肪性肝病中的保护作用

1、蜕皮甾酮在大鼠非酒精性脂肪性肝病中的保护作用【摘要】目的研究蜕皮甾酮对非酒精性脂肪性肝病大鼠模型的防治作用并探究其可能的作用机制。方法采用改进高脂膳食喂养法建立大鼠非酒精性脂肪性肝病模型。SD大鼠48只,随机分为正常对照组、模型组、蜕皮甾酮处理组与吡格列酮处理组,每组12只。模型组应用改进高脂饲料喂养,蜕皮甾酮组与吡格列酮组在高脂饲料喂养同时应用药物灌胃，正常对照组应用根底饲料喂养。实验12周末，处死所有大鼠，观察检测肝脏指数,血清与肝组织生化指标及肝组织病理改变。结果蜕皮甾酮组和吡格列酮组血清胆固醇(T)、甘油三酯(TG)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)明显低于模

2、型组;蜕皮甾酮和吡格列酮组与模型组相比肝组织丙二醛(DA)程度降低明显,超氧化物歧化酶(SD)活力增加显著;蜕皮甾酮肝脏指数显著降低;肝组织脂肪变性程度和炎症活动度明显减轻。结论蜕皮甾酮具有改善高脂饮食诱发的非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏酶学，通过增加肝组织SD的含量和减少DA的含量来减轻肝组织氧化应激程度，发挥防治非酒精性脂肪性肝病的作用。【关键词】非酒精性脂肪性肝病;蜕皮甾酮;肝指数;病理检查;氧化应激Keyrds：Nnalhlifattyliverdisease;Edysterne;Liverindex;Pathlgialexainatin;xidativestress1材料SPF级SD大鼠

3、48只,由泸州医学院实验动物中心提供,体质量150180g。胆固醇胆酸钠购于重庆腾鑫生物技术;丙硫氧嘧啶片购于上海朝晖药业;盐酸吡格列酮为江苏恒瑞医药股份产品;蜕皮甾酮为昆明昌宁德康生物科技提供;丙二醛(DA)、超氧化物歧化酶(SD)测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。2方法2.1分组48只SD大鼠适应性喂养1周后按完全随机分组原那么分为4组，正常对照组(n=12)，模型组(n=12)，蜕皮甾酮(10gkg-1d-1)治疗组(n=12)和吡格列酮处理组(n=12)。正常对照组喂以普通根底饲料;模型组采用改进高脂饲料喂养(改进高脂饲料配方为:胆固醇2%，胆酸钠0.5%，丙硫氧嘧啶0.2%，蔗糖

4、5%，猪油10%，根底饲料82.3%)3;蜕皮甾酮治疗组在改进高脂饲料喂养的同时予蜕皮甾酮(10gkg-1d-1)灌胃;吡格列酮处理组在高脂饲料喂养的同时予吡格列酮灌胃。各种药物均溶于生理盐水，正常对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃。各组自由饮水进食，于12周末处死。大鼠处死前，均隔夜禁食;称取体质量;次日以0.2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，心脏采血;翻开腹腔，首先肉眼观察肝脏情况，然后迅速取出肝脏称肝湿重;取肝左叶组织1.0g,4研磨制备成100g/L的肝组织匀浆;取肝左叶同部位组织1块,40g/L中性甲醛溶液固定。2.2肝指数计算处死大鼠时，称量体质量及肝脏湿重。肝指数(%)=肝湿质量/体质

5、量100%。2.3生化指标检测血样经离心,取血清,使用全自动生化分析仪测定丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、胆固醇(T)、甘油三酯(TG)等指标。肝组织匀浆超氧化物歧化酶(SD)活性和丙二醛(DA)含量按试剂盒说明操作。2.5统计学方法采用SPSS14.0软件进展统计学处理,计量资料以s表示;采用t检验，组间比拟采用方差分析，P0.05为差异有统计学意义。转贴于论文联盟.ll.3结果3.1一般情况实验期间对照组动物精神充分,灵敏好动,进食饮水正常,皮毛光泽度好,体质量持续小幅增长;蜕皮甾酮组大鼠一般情况也较好;模型组大鼠身体肥胖,体毛混乱,色泽蜡黄,精神萎靡,反响缓慢。3.2

6、肝指数及体质量模型组和蜕皮甾酮处理组各有1只大鼠因灌胃窒息而死亡。吡格列酮处理组有2只大鼠因灌胃窒息死亡。实验完毕时模型组体质量、肝湿重和肝指数明显增高，与正常对照组比拟有显著性差异;而蜕皮甾酮组、吡格列酮组体质量、肝湿重和肝指数明显降低，与模型组比拟有显著性差异;蜕皮甾酮处理组和吡格列酮处理组之间无显著性差异(P0.05)。结果见表1。表1各组大鼠体质量、肝湿重、肝指数测定结果与正常对照组相比拟，*P0.01;与模型组比拟，P0.05;#P0.013.3生化指标3.3.1血清生化指标模型组大鼠血清ALT，AST较正常组明显升高(P0.01);蜕皮甾酮处理组和吡格列酮处理组大鼠血清ALT，AS

7、T与模型组相比显著下降(P0.05);蜕皮甾酮处理组和吡格列酮处理组之间差异无显著性(P0.05)。与正常组相比，模型组大鼠血清T程度明显升高(P0.01)，TG程度与正常组根本相似。与模型组相比，蜕皮甾酮处理组和吡格列酮处理组血清TG无显著改变，而T程度却显著下降(P0.05)，两组间无明显差异。结果见表2。3.3.2肝组织氧应激、脂质过氧化程度指标与正常对照组大鼠相比，模型组大鼠血清DA含量显著增高(P0.01)，SD活力明显下降(P0.01)，蜕皮甾酮处理组和吡格列酮处理组DA程度显著低于模型组(P0.01),而高于正常对照组;蜕皮甾酮处理组和吡格列酮处理组SD活力显著高于模型组(P0.

8、01),而低于空白对照组，两组间差异不明显。见表2。表2各组大鼠血清生化指标及肝组织匀浆SD、DA的含量与正常对照组比拟，*P0.01;与模型组比拟，P0.05;#P0.013.4肝组织病理学结果肉眼下观察，正常对照组肝脏颜色红润,外表光滑,质软;模型组肝脏体积明显增大,饱满圆钝，色黄油腻,质脆;蜕皮甾酮处理组和吡格列酮处理组肝脏体积较正常对照组增大，边缘稍钝，但大多颜色红润,油腻程度较模型组明显减轻。HE染色光镜下观察,正常对照组肝细胞排列整齐,肝组织形态学正常(图1);模型组表现为弥漫性中度或重度脂肪变性,以大泡性脂肪变为主，肝细胞肿胀呈气球样变,大小不均,胞质内出现大小不一的脂滴，肝细胞

9、核被挤压移位,并可见炎性细胞浸润(图2)。蜕皮甾酮处理组和吡格列酮处理组表现为肝组织轻、中度脂肪变性,脂滴较模型组明显减少(图34)。模型组肝组织可见不同程度的汇管区炎症及小叶内炎症;肝小叶内和汇管区出现以单核细胞、淋巴细胞为主的炎性细胞浸润，临近的脂变肝细胞可见气球样变肝细胞，局部大鼠肝组织小叶内可见坏死灶交融成小片状，并有1例出现碎屑样坏死，1例出现桥接坏死，2例出现脂肪囊肿，2例出现轻度肝纤维化;蜕皮甾酮和吡格列酮治疗组肝脏存在汇管区炎症及小叶内炎症,未见肝细胞水样变性及坏死,炎症细胞浸润较轻。据公式P+L+2PN+2BN计算各组的炎症活动度积分，模型组与正常组比拟肝脏炎症活动度计数差异

10、显著(P0.01)，蜕皮甾酮和吡格列酮治疗组大鼠肝组织呈轻、中度肝细胞脂肪变性，无大泡性脂肪变形成，小叶内、汇管区炎症坏死减轻，未见碎屑样坏死和桥接坏死，肝脏炎症活动度计数较模型组明显下降(P0.01)，但组间差异无统计学意义。结果见表3。表3各组大鼠肝脏病理学结果分析4讨论ER有多种药理学作用，如促进核糖核酸和蛋白质合成，影响糖脂代谢，抗氧化应激，免疫调节、降血脂、抗氧化、抗纤维化和改善肝功能的作用2。aiYJ7等研究说明，蜕皮素有抗氧化和去除自由基的作用，而且口服蜕皮素(0.1gkg-1d-1)30d以上可以降低细胞膜的脂质氧化反响。本研究结果显示，与模型组相比蜕皮甾酮组肝组织DA的含量明

11、显减少，而SD的含量明显增加，这明蜕皮甾酮在治疗大鼠非酒精性脂肪性肝病时，可能通过增加肝组织SD的含量和减少DA的含量来减轻肝组织氧化应激程度，发挥抗氧化与肝脏保护作用。本实验采用改进高脂膳食成功复制了大鼠非酒精性脂肪性肝病的模型，大鼠脂肪肝程度随造模时间延长而加重。在高脂膳食的同时，应用蜕皮甾酮灌胃干预脂肪肝，结果用药后肝脏指数及血清中T及TG程度下降，肝功能、抗氧化才能改善;说明蜕皮甾酮具有预防大鼠血脂增高，减少肝脏对游离脂肪酸的吸收,去除肝内甘油三酯作用;有去除机体自由基,增强抗氧化才能的作用,可以调节和改善自由基代谢平衡，保护肝细胞;能降低肝细胞膜的通透性,减少血中ALT，AST的程度，维持肝功能的正常;病理检查进一步证实肝组织脂肪变性及炎症活动程度减