维生素类药物分析(5)课件

1、关于维生素类药物的分析 (5)第一张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月基 本 要 求一、掌握维生素类药物的结构特点与分析方法之间的关系。二、掌握维生素类药物的鉴别原理与方法。三、掌握三点校正法测定维生素A的原理、测定方法与计算方法。四、掌握维生素D的HPLC含量测定法和维生素E的GC含量测定法。五、掌握维生素B1非水溶液滴定法与维生素C碘量法的测定原理、方法与注意事项。六、熟悉本类药物其他的含量测定方法。七、熟悉本类药物杂质检查方法。八、了解维生素A三点校正法的推导过程。返 回第二张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月概 述维生素： 是维持人体正常代谢机能所必需的 微量营养物

2、资。 人体不能合成维生素。第三张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月 VitA、D2、D3、 E、K1 等 脂溶性水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12) VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。分类按溶解度分返 回第四张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月-H 维生素A醇-COCH3 维生素A醋酸酯-COC15H31 维生素A棕榈酸酯R :第一节 维生素A第五张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月为一个具有共轭多烯侧链的 环己烯（一）结构与性质一、 具有UV吸收 存在多种立体异构化合物第六张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月VitA2VitA3 易发生脱氢、脱水

3、、聚合反应第七张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月鲸醇第八张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月 或有金属离子存在时氧化共轭多烯侧链 易被氧化（二）第九张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月环氧化物VitA醛VitA酸第十张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月三氯化锑反应（一）条件 无水无醇CHCl3 鉴别试验二、第十一张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月蓝色紫红第十二张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月（BP（2000）max为326nm一个吸收峰UV法（二）max为350390nm三个吸收峰第十三张，PPT共一百二十八页，创作于2022

4、年6月去水VitA（VitA3）VitA第十四张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月第十五张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值BP 杂质对照品法 显色剂 三氯化锑TLC法（三）第十六张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月立体异构体氧化降解产物合成中间体UV法（一）含量测定三、维生素A2维生素A3环氧化物维生素A醛维生素A酸第十七张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月三点校正法（法定方法）1. 原理：（1）杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；（2）物质对光的吸收具有加和性。第十八

5、张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月2. 波长的选择：（1） 1 VitA的max（328nm）（2） 2 3 分别在1的两侧各选一点第十九张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月测定对象 VitA醋酸酯第一法 等波长差法= 12nm第二十张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月第二法 等吸收比法测定对象 VitA醇1=325nm, 2=310nm, 3=334nm第二十一张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月测定法（1）基本步骤:第一步 A的选择选择依据：所选A值中杂质的干扰已基本消除第二十二张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月注意： C 为混合样品的

6、浓度 第二步 求第二十三张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月第三步 求效价换算因数由纯品计算而得：第二十四张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月第二十五张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月第二十六张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月第四步：求标示量第二十七张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月 方法：（2） 第一法维生素A醋酸酯第二十八张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月 判断 是否在326329nm之间在326329nm之间改用第二法是否 求算 并与规定值比较第二十九张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月 规定值 差值第三十张，

7、PPT共一百二十八页，创作于2022年6月 判断差值是否超过规定值的有一个以上超过无超过 计算 A328（校正） 用A328计算第三十一张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月第三十二张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月03%15%3%第二法第二法第三十三张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月讨 论VA醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法（即代数法）推导而来；VA醇的吸收度校正公式是用相似三角形法（几何法或称6/7定位法）推导而来。在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定。在测定前务必要校正波长。测定的样品应不得少于两

8、份。第三十四张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月 VitAD胶丸中VitA的含量测定 精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.07985g/丸）的内容物 0.1287g 至10ml烧杯中，加环己烷溶解并定量转移至50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一50 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为第三十五张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月A300 ：0.374A316 ：0.592A328 ：0.663A340 ：0.553A360 ：0.22

9、8A300 /A328 ：0.564A316/A328 ：0.893A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.834A360/A328 ：0.344 求本品中维生素A占标示量的百分含量？第三十六张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月A300 /A328 ：0.564A316/A328 ：0.893A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.834A360/A328 ：0.344 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 + 0.010.01 0 + 0.02 + 0.04 =A328(校正) = 3.52 ( 2A328 - A316 -

10、 A340 ) =3.52 ( 20.663 0.592 0.553 ) =0.637第三十七张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月A328(校正) A328(实测)A328(实测)100 =0.637 0.6630.663100= -3.92E1%1cm( 328nm ) =A328(校正)100ms/D=0.6371000.1287/1250= 61.87第三十八张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月供试品中维生素A效价= E1%1cm( 328nm )1900= 61.87 1900 =117553（IU/g ）标示量% =VA效价(IU/g) 每丸内容物平均装量(g/丸

11、)标示量( IU/丸)100%=1175530.0798510000100%= 93.9%第三十九张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月适用于维生素A醇（等吸收比法） 第一法无法消除杂质干扰时用此法 皂化法、6/7A法 （3）第二法第四十张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月水溶性脂溶性第四十一张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月 判断max是否在323327nm之间取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 计算是否第四十二张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月 判断 A300 /A325 是否大于0.73是否取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 计算A325(校正)

12、第四十三张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月第四十四张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月03%3%第四十五张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月三氯化锑比色法（二）优点 简便 快速max 618nm620nm标准曲线法缺点呈色不稳定 （5 10s内）水分干扰与标准曲线温差1专属性差三氯化锑有腐蚀性（二）蓝色+3SbClVitA返 回第四十六张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月第二节 维生素D维生素D2一、结构与性质第四十七张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月维生素D3第四十八张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月开环的甾体：具有甾类化合物

13、的显色反应，可用于鉴别。手性碳原子：具有旋光性，可用于鉴别。多烯：可进行紫外检测。第四十九张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月二、鉴别试验1. 显色反应醋酐-硫酸反应 D2 黄 红 紫 绿 D3 黄 红 紫、蓝绿 绿 三氯化锑反应 橙红色渐变粉红三氯化铁反应 橙黄色二氯丙醇和乙酰氯反应 绿色第五十张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月2. 比旋度鉴别维生素D2维生素D3溶 剂 浓 度 比旋度值无水乙醇无水乙醇40mg/ml5mg/ml+102.5+107.5+105+112注意事项：应于容器开启30分钟内取样， 在溶液配制后30分钟内测定。第五十一张，PPT共一百二十八页，创

14、作于2022年6月 3.区别反应： 以96%乙醇为溶剂，加乙醇和85%硫酸，D2显红色，在570nm处有最大吸收，D3显黄色，在495nm处有最大吸收。 4.其他方法： TLC、HPLC、制备衍生物测熔点第五十二张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月三、杂质检查维生素D2中麦角甾醇的检查：加洋地黄皂苷溶液，混合，放置18h不得发生浑浊或沉淀。前维生素D的光照产物第五十三张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月四、含量测定方法 中国药典（2000年版）采用正相高效液相色谱法测定维生素D的含量，定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲酸二甲酯，该法分为三个方法。固定相：硅胶流动相：正己烷-

15、正戊醇（997：3）第五十四张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月第一法：用于无维生素A醇及其它杂质的干扰的情况，步骤如下：1系统适用性试验：测定重复性和分离度。第五十五张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月 2测定校正因子： A S /m S f1 = - A r /m r f2 =（A S m r- f1 m S A r1）/（A r1 m S） 3含量测定： mi=（f1 Ai1+ f 2 A i2）m S /A S第五十六张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月第二法：用于有杂质的干扰的情况，步骤如下：1皂化处理：皂化、乙醚提取、洗涤提取液、蒸除乙 醚、制备供试液

16、A。2净化：供试液A经液相色谱分离，准确收集含有维 生素D及前维生素D混合物的全部流出液，制 备成供试液B。 固定相：ODS 流动相：甲醇-乙腈-水（50：50：2） 3含量测定：取供试液B按第一法测定。第五十七张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月第三法：用于经第二法处理后仍有杂质的干扰的情况。步骤如下：1制备供试液：取供试液A，净化，水浴加热，得供 试液C。 制备对照液：对照品储备液：稀释、加热。2含量测定：在第一法的色谱条件下，交替精密进样 对照液和供试液，按外标法定量。返 回第五十八张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月苯并二氢吡喃醇第三节 维生素E 第五十九张，PPT

17、共一百二十八页，创作于2022年6月名 称R1R2相对活性-生育酚-生育酚 -生育酚 -生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1*第六十张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月dl生育酚醋酸酯第六十一张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月结构与性质一、苯环 + 二氢吡喃环 + 饱和烃链1、UV2、乙酰化的酚羟基 易水解O醌型化合物生育酚-+or OHHVitE杂质，需检查第六十二张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月O生育红（一）硝酸反应橙红色鉴别二、7515HNO3VitE生育酚第六十三张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月（橙红色）生育红

18、生育酚HNO3强氧化剂第六十四张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月三氯化铁联吡啶反应（二）第六十五张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月生育酚对-生育醌O弱氧化剂第六十六张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月血红色第六十七张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月 = 41.045.5max = 284nmmin = 254nm0.01%无水乙醇中UV法（三）第六十八张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月薄层板 硅胶G展开剂 环己烷 -乙醚（4 ：1）显色剂 硫酸（105 5） VitE Rf = 0.7-生育酚 Rf = 0.5-生育醌 Rf = 0.9

19、TLC法（四）第六十九张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月2. 游离生育酚 杂质检查 三、原理酸度 以NaOH滴定液（0.1mol/L）体积控制。第七十张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月（M生育酚= 430.8）例 取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不得过 1.0ml。第七十一张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月2.15限量第七十二张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月四、含量测定GC法（法定方法）（一）GC特点1、选择性好灵敏度高速度快分离效能好挥发性低、

20、不稳定、极性强衍生化易受样品蒸气压限制第七十三张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月载气N2固定液硅酮（OV-17）担体硅藻土或高分子多孔小球柱温265检测器氢火焰离子化检测器(FID)内标正三十二烷 n 500 R2VitE测定的色谱条件2、内标法加校正因子第七十四张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月内标法供试液（样品+内标）内标物对照液（对照+内标）是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近能与各组分完全分离与被测组分的量接近第七十五张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月校正因子：第七十六张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月WWKK%VitE%10012=稀释

21、倍数稀释倍数样对实际工作中的计算方法第七十七张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月（二）HPLC法 外标法 此外，还有铈量法、比色法和荧光法返 回第七十八张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱)第四节 维生素B1HClCl-第七十九张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月（一）溶解性1、易溶于水2、水溶液呈酸性（二）UV共轭双键max = 246nm结构与性质一、第八十张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月与生物碱（三）硫色素反应（四）嘧啶环 噻唑环 （五）盐酸根 呈氯化物的反应，用于鉴别。第八十一张，PPT共一百二十八页，创作于20

22、22年6月ChP鉴别试验二、（一）硫色素反应第八十二张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月第八十三张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月硫色素2H第八十四张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月VitB1H+H+H+H+（二）沉淀反应第八十五张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月S元素反应Cl-反应（三）其他反应()21PbSNaSVitBNO3PbNaOH第八十六张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月三、含量测定喹那啶红亚甲蓝（紫红天蓝）（一）非水溶液滴定法第八十七张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月反应摩尔比为1：2第八十八张，PPT共一百二

23、十八页，创作于2022年6月UV法（二）第八十九张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月片剂、注射剂= 421（每片）相当于标示量的%=A = ECL规格g/片g/100mlgChPWEA%cmD10011%100标示量平均片重第九十张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月（每ml）相当于标示量的%=规格g/mlml%VEA%cm100110011标示量稀释倍数第九十一张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月（三）硫色素荧光法原理1、荧光硫色素异丁醇铁氰化钾1VitBNaOH第九十二张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月特点2、（1）灵敏度高，线性范围宽（2）代谢产物

24、不干扰，适用于 体液分析第九十三张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月第五节 维生素CL抗坏血酸第九十四张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月1、易溶于水2、水溶液呈酸性结构与性质一、（一）溶解性第九十五张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月二烯醇结构二酮基结构二烯醇结构（二）还原性第九十六张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月有活性有活性无活性第九十七张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月糖类的显色反应50结构与糖类相似（三）具糖的性质第九十八张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月C3OH的pKa = 4.17C2OH的pKa = 11.57酸

25、性（四）一元酸第九十九张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月L(+)抗坏血酸活性最强手性C（C4、C5）（五）光学活性*第一百张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月与碱反应（六）水解性第一百零一张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月第一百零二张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月与氧化剂的反应（一）鉴别试验二、去氢抗坏血酸OVitC第一百零三张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月1、与AgNO3反应2、与2，6 - 二氯靛酚反应(ChP2000)氧化型玫瑰红色还原型蓝色(ChP2000)第一百零四张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月（玫瑰色）（

26、无色）第一百零五张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月3.其他氧化剂的反应：亚甲蓝或高锰酸钾 试剂褪色碱性酒石酸铜 砖红色沉淀磷钼酸 钼蓝第一百零六张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月糖类的反应（二）或盐酸50吡咯USP第一百零七张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月第一百零八张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月（蓝色）(糠醛)（戊糖）50(吡咯)第一百零九张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月UV（三）BP0.01mol/L HCl第一百一十张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月三、杂质检查 1.溶液的澄清度与颜色：有色杂质 分光光度法2.

27、铁、铜离子：原子吸收分光光度法第一百一十一张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月指示剂 淀粉指示液原理1、碘量法（一）含量测定四、第一百一十二张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月H+第一百一十三张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月 取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。方法2、第一百一十四张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月（1）酸性环境 d . HCl （2

28、）新沸冷H2O减慢VitC被O2氧化速度讨论3、（3）立即滴定 赶走水中O2减少O2的干扰第一百一十五张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月（4）附加剂干扰的排除片剂 滑石粉 过滤注射剂 抗氧剂 丙酮甲醛Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5 第一百一十六张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月CHHOOaS3aSO+H2NHON2252HONHCOS3a第一百一十七张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月2，6 - 二氯靛酚钠滴定法法（二）USPJP原理1、酚亚胺二氯靛酚，-62VitC第一百一十八张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月自身指示终点法方法2、第一百一十九张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月（2）快速滴定 2min内 （1）酸性环境 HPO3-HAc 稳定VitC防止其他还原性物质干扰（3）剩余比色测定 （定量过量）（测剩余染料）讨论3、第一百二十张，PPT共一百二十八页，创作于2022年6月（4）缺点 需经常标定贮存一周不稳定干扰多 氧化力较强第一百二十一