荧光定量PCR仪使用维护校准标准操作规程

1、精选文档文件名称AB7500荧光定量PCR仪使用、保护、校准标准操作规程颁发部门制定人：复核人：同意人：质保部制定日期：复核日期：同意日期：履行日期版本1.0编号SOP04006制作份数_份发送部门订正记录订正人订正原由订正内容版本订正日期目的：保证荧光定量PCR仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果剖析的标准化、规范化。范围：合用于AB7500荧光定量PCR仪的使用及保护。定义：无职责：荧光定量PCR仪使用人员负责本规程的实行。质保部对本规定的有效履行担当监察检查责任。内容：5.1室内温度控制在1530，相对湿度4575%。5.2仪器操作挨次翻开电脑显示器和电脑主机的电源开关，进入Windo

2、ws界面。接着翻开AB7500仪器电源开关，预热10分钟。点击7500Softwarev2.3图标，翻开软件。按压仪器托盘上的按压位，待托盘弹出后，将所需检测的8联PCR反响管或许96孔PCR反响板放入检测孔位，记下搁置地点。检测8联PCR反响管用反响孔模块，检测96孔PCR反响板用反响孔模块。（检测8联PCR反响管需放入盖紧管盖的空8联PCR反响管配平，检测96孔PCR反响板无需配平）再次按压托盘使其滑入仪器。新建扩增参数模板：比如新建一个UG-63-62的模板，扩增参数是95，10；（95，10；63，45）5cycles；（95，10；62，35）40cycles，在62时采集荧光信号（

3、HEX、FAM信号），.精选文档20l反响系统。在Setup-PlateSetup-DefineTargetsandSamples中，将TargetName下的Target1改成FAM；点击AddNewTarget，将新增的Target1改成HEX，点击Reportee下拉菜单，选择VIC。在Setup-RunMethod-GraphicalView中的ReactionVolumePerWell后边输入20（20l反响系统）。选中第一个HoldingStage，点击DeleteSelected删除；在CyclingStage中的NumberofCycles后输入5，在Step1中输入时间10秒

4、，在Step2中输入温度63度，输入时间45秒，将63度下边采集荧光图标点掉；点击AddStage下拉菜单项选择择Cycling，在CyclingStage中的NumberofCycles后输入40，在Step1中输入时间10秒，在Step2中输入温度62度，输入时间35秒，在62度下边点击图标采集荧光。点击Save下拉菜单下的SaveAsTamplate，文件名输入UG-63-62，保留在默认ab7500-config-tamplates文件夹内，封闭设置界面。已有扩增参数模板：在软件Home界面中点击Template，选择需要的模板，点击翻开。比如：UG-63-62，其扩增参数就是95，1

5、0；（95，10；63，45）5cycles；（95，10；62，35）40cycles，在62时采集荧光信号（HEX、FAM信号），ReactionVolumePerWell:20l（20l反响系统）。在Setup-PlateSetup-AssignTargetsandSamples中选择8联管摆放的地点，所有勾选Sample1；UGT1A1*6勾选HEX，UGT1A1*28勾选FAM。在Run-AmplificationPlot中点击STARTRUN，命名为20140101-1（当天日期+当天上机次数，例:2014年1月1日第1次上机编号为20140101-1），保留在默认文件夹中，开始运

6、转。结果剖析PCR反响结束后自动保留结果，对扩增曲线进行剖析。也可依据剖析后图像调理Baseline的Start值、End值以（用户可依据实质状况自行调整，Start值能够在315、End值可设在520），Threshold值（Rn）介绍设定为500015000，点击Analyze进行剖析，而后到Plate窗口下记录每个反响的Ct值。实验结束后拿出反响管（切勿翻开管盖），次序封闭AB7500软件、定量PCR仪电源，封闭电脑。5.3仪器保护每周保护检查计算机磁盘空间。如需要，将实验文件归档或备份。起码每周检查一次计算机磁盘空间。假如硬盘的可用空间不足其总容量的20%，应将较陈腐的数据传输到备份储

7、存设施上保留。封闭控制7500Instrument的计算机，30秒后再次开启计算机。.精选文档用无绒布块（不脱毛）蘸取75%酒精洁净7500Instrument的表面。（注：切勿使用有机溶剂清7500Instrument。）使用75%酒精浸泡反响管托架（晾干后放回仪器内）。每个月保护履行背景校准。（可履行一次背景校准以检查能否存在污染物）运转磁盘清理和磁盘碎片整理。起码每个月一次。当Windows?操作系统显示信息提示履行碎片整理时。?切勿同时运转磁盘管理适用工具和7500Real-TimePCRSoftware。每半年（6个月）保护检查灯具状态。在7500Software中，选择Instru

8、mentLampStatus/Replacement以确立卤素灯的状态。显示LampStatus/Replacement对话框：Condition表示以下此中一种状况：Good灯具工作优秀，不需要改换。单击Close。Failed一定改换灯具。单击Close，而后依据步骤改换卤素灯。ChangeSoon灯具使用超出2000小时；生产商建议将其改换。单击Close，而后决定能否改换灯具。假如断定改换，请依据步骤改换卤素灯。?Usage(Hours)灯具已照明的总小时数。?LampCurrent灯具的输出电流，以安培为单位(A)。低电流意味着灯具可能将要无效。?DateLastReplaced前一

9、次改换灯具的日期。在履行一次运转以前或时期，7500Software可能显示以下警示：.精选文档信息描绘WarningCannotdetectsufficientcurrentfrom在运转开始时，灯具电流低于可接受水平。在lamp.Eitherlampisnotinstalledproperlyor依据步骤改换卤素灯具以前，没法继needstobereplaced.续该运转。WarningCannotdetectsufficientcurrentfrom7500Software停止了该次运转，因为在运转lamp.Eitherlampisnotinstalledproperlyor中灯具电流降

10、落到可接受水平之下。在依据needstobereplaced.步骤改换卤素灯具以前，没法连续该运转。在信息框中单击OK，检查仪器日记，而后改换灯具。Warning-Thelampusagehasexceeded2000hr.Werecommendreplacingthelampsoontoensureoptimalassayperformance.履行目标区（ROI）校订。履行背景校准。履行光学校准。履行染料校准。履行RNaseP仪器考证试验。其余保护任务（需要时履行）在运转开始时，灯具使用时间超出2000小时。单击CancelRun，而后改换灯具，或许单击ContinueRun。从头运转RO

11、I、背景、光学和染料校准。样本块污染除去。履行以下程序，去除7500Instrument样本块的荧光污染。荧光污染是以致背景运转失败的常有原由，在此状况下，一个或多个反响孔会连续表现出异样的高信号。注意！切勿移去设施上的盖板。7500Instrument中没实用户可安全维修的组件。假如思疑存在问题，请联系生产商服务代表。全程戴前一次性无粉手套操作。找到样本块中受污染的反响孔（参阅“怎样确立污染”）。从7500Real-TimePCRInstrument中拿出反响板和托盘支架。a.按压托盘门，将其翻开。b.拿出反响板和托盘支架。c.封闭托盘门。以必定角度向托盘右边施加压力。.精选文档手动降低样本

12、块：a.在7500Software中，选择InstrumentInstrumentMaintenanceManager。b.在InstrumentMaintenanceManager的ROI选项卡中，单击StartManualCalibration。c.在ROIInspector对话框中，单击MoveBlock。d.当ROIInspector对话框显示“BlockDown”时，单击Done。封闭7500Real-TimePCRInstrument，而后拔下其电源电缆。同意仪器冷却15分钟。翻开7500Real-TimePCRInstrument的检查门。a.将薄型螺丝刀插入检查门边沿处的键销孔

13、内，而后推进以解开门栓。b.翻开仪器前门。抬起门栓，而后将受热的护盖门推到仪器的反面。使用少许的双蒸水，洁净样本块中被污染的反响孔：a.用移液管汲取少许双蒸水并滴入每个受污染的反响孔中。.精选文档b.抽吸并滴入反响孔中的双蒸水数次，以冲刷反响孔。c.将用过的双蒸水水吸入废液瓶中。d.使用棉花拭子，擦试每个被污染的反响孔的内壁。e.使用无绒布料，吸出剩余的双蒸水。7500Real-TimePCRInstrument将受热的护盖门拉到仪器的正面。抬起门栓，而后将受热的护盖门紧固到交错杆。翻开7500Real-TimePCRInstrument的检查门。?插上电源插头并开启7500Instrumen

14、t。?经过履行背景校准运转确认已除去污染（参阅“背景校准”）。假如污染仍旧存在，重复步骤至，而后使用95%乙醇溶液洁净样本块中受污染的反响孔：a.用移液管汲取少许95%乙醇溶液并滴入每个受污染的反响孔中。b.抽吸并滴入反响孔中的溶液数次，以冲刷反响孔。.精选文档c.将用过的乙醇溶液吸入废液瓶中。重要！使用漂白剂溶液或乙醇溶液洁净反响孔以后，应一直使用双蒸水冲刷反响孔。重复步骤至?，以冲刷样本块的反响孔，并考证已除去掉污染物。假如污染仍旧存在，重复步骤至，而后使用10%漂白剂溶液洁净样本块中受污染的反响孔：a.用移液管汲取少许10%漂白剂溶液并滴入每个受污染的反响孔中。b.抽吸并滴入反响孔中的溶

15、液数次，以冲刷反响孔。c.将用过的漂白剂溶液吸入废液瓶中。重要！使用漂白剂溶液或乙醇溶液洁净反响孔以后，应一直使用去离子水冲刷反响孔。重复步骤至?，以冲刷样本块的反响孔，并考证已除去掉污染物。假如仍有污染，请与生产商技术支持联系。?保证受热盖门完整封闭并上闩。假如没有，则7500Software显示错误信息。挪动PCR仪。（改换或挪动光学器件的任何零件后，一定履行ROI校准、背景校准、光学校准、染料校准以及RNaseP仪器考证。）改换卤素灯。全程戴前一次性无粉手套操作。封闭7500Instrument，而后拔下其电源电缆。同意仪器冷却15分钟。a.注意！灼热。7500Instrument和灯具

16、灼热！灯具在使用中会变得特别灼热。在办理灯具之前，应同意灯具冷却15分钟，并戴上无粉防备手套。b.重要！为防止灼伤及缩短新灯具的使用寿命，办理灯具时请戴前一次性无粉手套。c.注意！7500Instrument按设计仅可使用12V、75W的卤素灯。翻开7500Instrument的检查门。a.将薄型螺丝刀插入检查门边沿处的键销孔内，而后推进以解开门栓。b.翻开仪器前门。.精选文档从仪器中拿出灯具：a.向下滑动灯具开释杆。b.用手牢牢地抓住卤素灯并向上提，使灯具从安装槽口中脱出。ab查察灯具并确立有无故障迹象（有故障的灯具内壁上往常有碳黑层）。将新灯具安装至仪器上：.精选文档a.向上滑动灯具开释杆

17、。b.用手牢牢地握住灯具，将灯具放入带槽口的安装座内，而后当心地向下滑动灯具，使其到位。封闭仪器前门。插上电源插头并开启7500Instrument。翻开ROIInspector对话框：a.在7500Software中，选择InstrumentInstrumentMaintenanceManager。b.在InstrumentMaintenanceManager的ROI选项卡中，单击StartManualCalibration。在ROIInspector对话框中，选择LampControlIdle。?当仪器运转时，经过检查门上的空隙察看，保证灯具发光，而后单击Done。.精选文档?假如灯具发光

18、，在7500Software中选择InstrumentLampStatus/Replacement，单击ResetLampTimer，而后单击OK。假如灯具不发光，则替代的卤素灯可能出缺点。从头改换灯具。假如再次改换灯具后仍不发光，检查仪器的保险丝能否存在故障（参阅第71页）。改换灯具后，按次序履行以下校准。请参阅：目标区（ROI）校准背景校准光学校准染料校准考证仪器性能改换7500Instrument保险丝。保险丝破坏时，改换7500Real-TimePCRInstrument保险丝。（注意！为在长时间内防备火灾，改换保险丝时请使用种类和额定值与仪器原始保险丝同样的经认同的保险丝。）全程戴前

19、一次性无粉手套操作。封闭仪器电源，并拔下电源插头。使用平口螺丝刀从仪器上旋松并卸掉保险丝座。将每一个保险丝从其保险丝座中拿出，而后检查能否破坏。破坏的保险丝内部往常有炭黑覆盖。使用12.5A、250V、520mm保险丝改换破坏的保险丝。.精选文档注：电压和电流额定值见保险丝座。安装保险丝座。插上电源插头，而后开启仪器。假如仪器接通了电源，说明保险丝已安装成功。注：保险丝破坏可能是由仪器供电电源颠簸以致。为了防备连续出现故障，能够考虑安装电气保护设施，比如UPS或其余电涌保护器。更新Windows?操作系统。更新7500Software。监控仪器状态（使用FunctionTest对话框对主要75

20、00Instrument组件履行高级诊疗。一般情况下不需要履行功能测试，除非思疑有硬件故障，或许LifeTechnologies代表指示这样做。）在7500Software中，选择InstrumentFunction-Test。依据需要履行功能测试。要测试：所有组件单击AllTests，而后等待软件履行所有功能测试。一个或多个特定组件单击以下此中一项或多项。?USB测试7500Real-TimePCRInstrument和计算机之间的通用串行总线(USB)连接。假如7500Software能够和7500Real-TimePCRInstrument成立通讯，则表示测试经过。?CCD测试7500R

21、eal-TimePCRInstrument内的CCD摄像机。假如摄像机能够拍摄图像，则表示测试经过。?FilterWheel测试7500Real-TimePCRInstrument内的过滤轮。假如过滤轮控制器运行正确版本的固件，则表示测试经过。?Shutter测试7500Real-TimePCRInstrument的光学快门。假如快门控制器运转正确版本的固件，则表示测试经过。?Lamp测试7500Real-TimePCRInstrument的卤素灯。假如灯具控制器运转正确版本的固件，则表示测试经过。?ThermalCycler测试7500Real-TimePCRInstrument内的热循环仪

22、样本块。假如热循环仪的控制器运转正确版本的固件，则表示测试经过。.精选文档当7500Software达成一项测试时，软件报告该测试的经过/失败状态，并供给结果描绘。结束测试时，单击Close。5.4仪器校准目标区（ROI）校准全程戴前一次性无粉手套操作。从储存在冷冻柜内的光谱校准套件中拿出ROI校准反响板。让ROI校准反响板温度上涨至室内温度（约需5分钟）。在立刻运转反响板以前，不要从包装袋内拿出ROI校准反响板。反响孔中的荧光染料拥有光敏感特征。长时间曝光可降低染料在反响板中的荧光。从包装袋中拿出ROI校准反响板。将光学薄膜留在反响板上。不要抛弃寄存ROI校准反响板的包装袋。若储存于原始包袋

23、中，反响板最多可重复使用三次。振荡ROI校准反响板5秒钟。用板式离心计将反响板离心2分钟。ROI校准反响板一定充分混淆并离心。确认ROI校准反响板每个反响孔中的液体均位于反响孔底部。假如不是，则以更高的转速及更长的时间隔心反响板。按压托盘门，将其翻开。将反响板装入仪器中的反响板架。保证搁置时反响板在反响孔板适配器中被正确对齐。（装入标准反响板，使A12凹口地点位于托盘的右上角。）以必定角度向托盘右边施加压力，进而封闭托盘门。履行自动ROI校准在7500Software中，选择InstrumentInstrumentMaintenanceManager。在InstrumentMaintenanc

24、eManager的ROI选项卡中，单击StartCalibration。.精选文档依据导游的指示，达成校准。ROICalibration对话框显示三个选项卡：?Setup显示ROI校准设置说明。单击Next提示能够翻开Run选项卡。?Run单击STARTRUN能够开始校准流程并显示办理信息。单击Next提示能够翻开Analysis选项卡。Analysis指明校准状态（Passed/Failed）。假如校准失败，请参阅“清除ROI校准故障”。履行手动ROI校准在7500Software中，选择InstrumentInstrumentMaintenanceManager。在InstrumentMa

25、intenanceManager的ROI选项卡中，单击StartManualCalibration。在ROIInspector对话框中（如图1）：a.在ExposureTime字段中，输入2048。b.选择FilterA（滤光器1）。图1单击Snapshot，生成一张ROI图像。确立ROI图像能否可接受（下列图所示为未饱和以及过饱和的图像）。可接受图像中的反响孔：在可是饱和的前提下，一定尽可能光亮。（生成ROI校准时，假如反响孔过饱和，则显示一条警示。）能够含有但不是一定含有红色像素（表示饱和）。未饱和正常饱和过分饱和.精选文档可接受不行接受假如ROI图像可接受，转至步骤。假如ROI图像过饱和

26、，将ExposureTime降低一半，而后单击Snapshot。重复履行，直至获取可接受的ROI图像。假如没法获取可接受的图像，请参阅“清除ROI校准故障”。单击GenerateCalibration。7500Software采集一张截图，而后显示一个信息框或ROI图像：假如软件显示：履行：a.单击OK。b.将ExposureTime降低一半（参阅步骤a）。c.重复步骤和。或ROI图像特别模糊或许没法成功校准。请参阅“清除ROI校准故障”。可接受的校准图像考证以下各项：注：在所有反响孔四周出现绿色圆圈，表示反响孔成功校准。?WellsFound值为96。成功校准WellsFound一定.精选文

27、档为96。?在ROI图像上每个反响孔区的四周显示绿色圆圈。注：绿色圆圈表示反响孔地点的目标区已足够亮。单击SaveCalibration。软件保留滤光器1新产生的ROI校准。在ROIInspector的FilterMasksLoaded地区，“OK”出此刻滤光器1旁边。对其余滤光器重复步骤至，对每个滤光器履行校准以前，将ExposureTime重置为2048。当所有滤光器的FilterMasksLoaded都显示OK时，ROI校准达成。当所有滤光器的FilterMasksLoaded都是OK时，校准达成。点击Done。拆卸反响板（注意！灼热。仪器工作时期，样本块温度可能超出100C。若刚使用过

28、仪器，在样本块恢复至室温以前，请勿触摸样本块。）拿出校准反响板：按压托盘门，将其翻开。拿出校准反响板。按压托盘门，将其封闭。.精选文档将校准反响板放入其包装套中。假如要履行背景和光学校准：a.在接下来的8小时，将ROI校准反响板置于室温下。光学校准使用ROI校准反响板。次日将放入包装套的反响板放回储存在冷冻柜内的光谱校准套件中。重要！不要抛弃校准反响板。假如将反响板装在其原始包装套内储存，在翻开其包装后最多可重复使用反响板3次。重要！履行ROI校准后，也一定履行背景校准、光学校准、染料校准以及仪器考证。清除ROI校准故障问题/症状可能原由行动ROI校准失败样本块可能位于降1.假如ROIInsp

29、ector的CCDControl/Settings显示“BlockROI图像模糊低的地点。Up”，则单击BlockUp将样本块高升。2.检查确认受热的盖组件已被全程向前拉出，以保证托盘能够被正确推入。假如7500Instrument安装了受热盖栓，检查确认盖栓处于锁定地点。3.假如ROI校准仍旧失败，检查7500Instrument内的卤素灯状态（参阅“监控灯具状态”），而后，假如需要时，改换灯具（参阅“改换卤素灯”）。背景校准全程戴前一次性无粉手套操作。从储存在冷冻柜内的光谱校准套件中拿出准备好的背景反响板。让背景反响板温度上涨至室温（起码需要5分钟）。.精选文档从包装袋中拿出背景反响板。（

30、重要！不要抛弃寄存反响板的包装袋。若将背景反响板储存在其原始包装套内，背景反响板最多可重复使用三次。）振荡反响板5秒钟。用板式离心计将反响板离心2分钟。反响板一定充分混淆并离心。确认反响板每个背景反响孔中的液体均位于反响孔底部。假如不是，则以更长的时间隔心反响板。按压托盘门，将其翻开。将反响板装入仪器中的反响板架。保证搁置时反响板在反响孔板适配器中被正确对齐。以必定角度向托盘右边施加压力，进而封闭托盘门。（注：假如没法翻开托盘，样本块可能位于其“高升”地点，锁定了托盘门地点。要降低样本块，选择InstrumentCalibrate，然退后出ROIInspector。）在7500Software

31、中，选择InstrumentInstrumentMaintenanceManager。在InstrumentMaintenanceManager中，选择Background选项卡。在Background选项卡中，单击StartCalibration。依据导游的指示，达成校准。BackgroundCalibration对话框显示四个选项卡：Overview显示校准有关信息。?Setup显示背景校准设置说明。单击Next提示能够翻开Run选项卡。?Run单击STARTRUN能够开始校准流程并显示办理信息。单击Next提示能够翻开Analysis选项卡。?Analysis指明校准状态(Passed/

32、Failed)。假如校准失败，请参阅“清除背景校准故障”。注：开始校准以前，仪器可能暂停一段时间（最多可达10分钟），以同意受热的护盖达到正确温度。校准达成后，拿出校准反响板：按压托盘门，将其翻开。拿出校准反响板。按压托盘门，使其滑入仪器。将校准反响板放入其包装套内，并将包装好的反响板放回冷冻柜内的光谱校准套件中。（重要！不要抛弃校准反响板。假如将反响板装在其原始包装套内储存，在首次翻开其包装后最多可重复使用反响板3次。）清除背景校准故障问题/症状可能原由行动背景校准失败背景反响板上的一个或多1.使用同样的背景反响板重复履行校准。.精选文档个反响孔产生的光谱超出2.若校准再次失败，请使用另一不

33、一样的背景反仪器的最高限度。应板重复履行校准。3.若校准再次失败，请按下文“怎样确立污染”的说明，确立污染源。怎样确立污染若信号超出正常背景荧光的限度，则表示校准反响板或样本块上存在荧光污染物。常有污染物包含记号笔中残余的油墨、一次性手套洒落的粉末及尘埃。欲确立污染根源和地点：在查察原始数据时，选择反响板布局中数块连续的较小地区，以找出受污染反响孔的地点。将背景反响板旋转180，而后再次履行背景校准。重复步骤以找出污染物的地点。假如步骤和中找到的包含污染物的反响孔地点：?同样则表示样本块中含有污染物。请依据“样本块污染除去”的说明，除掉样本块中的污染物。?相反则表示背景反响板中含有污染物。抛弃

34、目前使用的背景反响板，并使用新背景反响板履行背景校准程序。假如改换背景反响板而且拿出样本块的污染后校准失败：将用黑纸覆盖的反响板装入7500Instrument。依据本章的说明，履行背景校准程序。校准达成后，选择反响板布局中的所有反响孔。查察光谱图谱中的峰值。假如峰值：?可见则表示7500Instrument的光学零件可能已被污染。请与生产商联系。?不存在则表示样本块已被污染。请依据“样本块污染除去”的说明，除掉样本块中的污染物。光学校准全程戴前一次性无粉手套操作。从储存在冷冻柜内的光谱校准套件中拿出ROI校准反响板。让ROI校准反响板温度上涨至室温（起码需要5分钟）。从包装袋中拿出ROI校准

35、反响板，振荡反响板5秒钟。（重要！不要抛弃寄存反响板的包装袋。若将ROI校准反响板储存在其原始包装套内，ROI校准反响板最多可重复使用三次。）（假如履行ROI校准后，将ROI校准反响板保持在室温，则跳到步骤，以减少在反响.精选文档板在室温时形成的冷凝。假如ROI校准反响板位于冷冻柜中，转至步骤。用板式离心计将反响板离心2分钟。ROI校准反响板一定充分混淆并离心。确认ROI校准反响板每个反响孔中的液体均位于反响孔底部。假如不是，则以更长的时间隔心反响板。按压托盘门，将其翻开。将反响板装入仪器中的反响板架。保证搁置时反响板在反响孔板适配器中被正确对齐。以必定角度向托盘右边施加压力，进而封闭托盘门。

36、在7500Software中，选择InstrumentInstrumentMaintenanceManager。在InstrumentMaintenanceManager中，选择Optical选项卡。在Optical选项卡中，单击StartCalibration。依据导游的指示，达成校准。OpticalCalibration对话框显示四个选项卡：?Overview显示校准有关信息。?Setup显示光学校准设置说明。单击Next提示能够翻开Run选项卡。?Run单击STARTRUN能够开始校准流程并显示办理信息。单击Next提示能够翻开Analysis选项卡。?Analysis指明校准状态(Pa

37、ssed/Failed)。假如校准失败，请参阅“清除背景校准故障”。注：开始校准以前，仪器可能暂停一段时间（最多可达10分钟），以同意受热的护盖达到正确温度。拿出校准反响板：按压托盘门，将其翻开。拿出校准反响板。按压托盘门，使其滑入仪器。将校准反响板放入其包装套中。将放入包装套的反响板放回储存在冷冻柜内的光谱校准套件中。（重要！不要抛弃校准反响板。假如将反响板装在其原始包装套内储存，在翻开其包装后最多可重复使用反响板3次。）染料校准全程戴前一次性无粉手套操作。从冷冻柜中拿出光谱校准套件，并从套件内拿出所有染料反响板。将光谱校准套件放回冷冻柜储藏。让染料反响板温度上涨至室内温度（约需5分钟）。（

38、重要！在立刻运转以前，请勿从包装袋内拿出染料反响板。在每个染料反响板上，反响孔中的荧光染料拥有光敏感特征。长时间裸露在光芒中会降低反响板的荧光信号强度。）注：假如将7500Real-TimePCRInstrument染料反响板储存在其原始包装内并放在冷冻柜中，.精选文档则在翻开包装后6个月内能够校准7500Real-TimePCRInstrument最多3次。在7500Software中，选择InstrumentInstrumentMaintenanceManager。在InstrumentMaintenanceManager中，选择Dye选项卡。在Dye屏幕上，选择SystemDyeCali

39、bration。单击StartCalibration。依据导游的指示，达成每个反响板的校准。（重要！在每个校准中，导游将独自指示。一定独立设置、运转和剖析每个染料反响板。）DyeCalibration对话框显示四个选项卡：Overview显示校准有关信息。当软件提示获取需要的资料时，选摘要校准的染料。?Setup显示染料校准设置说明。单击Next提示能够翻开Run选项卡。当软件提示装入染料反响板时，依据步骤所述准备并装载反响板。?Run单击STARTRUN能够开始校准流程并显示办理信息。单击Next提示能够翻开Analysis选项卡。Analysis指明校准状态(Passed/Failed)。

40、当软件提示剖析从每个染料反响板采集的光谱时，核实校准的状态：?Passed7500Instrument校准经过。转到步骤的。?Failed7500Instrument校准失败。请参阅“清除染料校准故障”。注：开始校准以前，仪器可能暂停一段时间（最多可达10分钟），以同意受热的护盖达到正确温度。将软件所需的染料反响板从其包装中拿出。振荡反响板5秒钟。（重要！不要抛弃寄存反响板的包装袋。若储存于原包袋中，反响板最多可重复使用3次。用板式离心计将反响板离心2分钟。反响板一定充分混淆并离心。确认反响板每个背景反响孔中的液体均位于反响孔底部。假如不是，则以更长的时间隔心反响板。检查并保证要装入的染料反响

41、板与在7500Software中选用的荧光般配。按压托盘门，将其翻开。将反响板装入仪器中的反响板架。保证搁置时反响板在反响孔板适配器中被正确对齐。封闭托盘门。以必定角度向托盘右边施加压力。（注：假如没法翻开托盘，样本块可能位于其“高升”地点，锁定了托盘地点。要降低样本块，选择InstrumentCalibrate，然退后出ROIInspector。）因为导游对每个染料校准独自供给指示，因此请对校准的每个染料履行以下程序。.精选文档ab考证校准状态：?Passed7500Instrument校准经过。转到b）。?Failed7500Instrument校准失败。请参阅“清除染料校准故障”。核实染

42、料光谱的分组：在反响板布局中，选择反响板的孔。检查原始数据。关于每个光谱，请确认峰值：位于7500Instrument的可检测范围内。无不规格光谱峰值。出此刻染料的正确通道上。假如某光谱不切合上述标准，请参阅“清除染料校准故障”。注：在含有同样染料的各反响孔中，光谱地点和峰值地点的差别是因为不一样反响孔之间的光学属性及激发能存在细微差别而惹起的。若所有光谱均可接受，则单击Next。拿出校准反响板：（注意！灼热。仪器工作时期，样本块温度可能超出100C。若刚使用过仪器，在样本块恢复至室温以前，请勿触摸样本块。）按压托盘门，将其翻开。拿出校准反响板。按压托盘门，将其封闭。将校准反响板放入其包装套中

43、。将放入包装套的反响板放回储存在冷冻柜内的光谱校准套件中。（注：假如将7500Real-TimePCRInstrument染料反响板储存在其原始包装内并放在.精选文档冷冻柜中，则在翻开包装后6个月内能够校准7500Real-TimePCRInstrument最多3次。）在依据指示将染料反响板拿出后，单击Finish。依据开始操作，准备并运转下一个反响板。滤光器峰值(nm)染料/光谱1-520FAM染料SYBRGreen染料2-550JOE染料VIC染料3-580CY3染料NED染料TAMRA染料4-610ROX染料TEXASRED染料5-670CY5染料.精选文档清除染料校准故障问题/症状可能

44、原由行动一个或多个原始光?光谱校准反响板未充分别1.卸载7500Instrument并查察光谱校准反响板的谱达到或低于校准心。反响孔。若反响孔中的液体不是：的可检测阈值。?光谱校准反响板含有陈腐试位于反响孔底部，请将反响板离心更长时间，剂或试剂体积不足。而后重复履行校准。?若正运转定制光谱校准反响体积相等，则表示反响板未密封以致试剂挥板，染料可能浓度不足。发。请将其抛弃，并运转另一反响板。2.若光谱校准反响板显示正常，则抛弃该反响板并运转另一块反响板。3.假如问题依旧存在，请与生产商联系。注：若正运转定制光谱校准反响板，请创立另一反应板但要增添产生不足信号的染料的浓度。一个或多个原始光?样本块

45、或光谱校准反响板含请依据“背景校准”操作，以确认能否存在谱超出7500有荧光污染物。污染物。若背景校准未显示样本块含有污染物，则Instrument的最高?若正运转定制光谱校准反响光谱校准反响板可能含有污染物。限量。板，染料可能浓度过大。光谱在一个以上的样本块或光谱校准反响板含注：若正运转定制光谱校准反响板，请创立另一反滤光器中含有峰有荧光污染物。应板但要降低超出可检测限量的染料的浓度。值。考证仪器性能全程戴前一次性无粉手套操作。冷冻柜中拿出TaqMan?RNaseP96-WellInstrumentVerificationPlate，而后让反响板温度上升到室温（大概需要5分钟）。从包装袋中拿

46、出RNaseP反响板。振荡反响板5秒钟。用板式离心计将反响板离心2分钟。反响板一定充分混淆并离心。确认液体位于反响板每个反应孔底部。假如不是，则再次以更长的时间隔心反响板。（重要！注意不要让RNaseP反响板的底部染上尘污。反响板底部沾上的液体和其余污染物可污染样品区组，以致异样高的背景信号。）.精选文档上图为RNaseP反响板上标准和未知种群的散布状况。RNaseP反响板包含五个重复组的标准物（1250、2500、5000、10,000和20,000拷贝）、两个未知重复组（5000和10,000拷贝）和阴性比较反响孔(NC)。按压托盘门，将其翻开。将反响板装入仪器中的反响板架。保证搁置时反响

47、板在反响孔板适配器中被正确对齐。封闭托盘门。以必定角度向托盘右边施加压力。开始运转反响板：在7500Software中，选择InstrumentInstrumentMaintenanceManager。InstrumentMaintenanceManager中，选择RNaseP选项卡。在RNaseP屏幕，单击StartRNasePRun。依据导游的指示，达成校准。RNaseP对话框显示四个选项卡：Overview显示校准有关信息。?Setup显示RNaseP运转设置说明。单击Next提示能够翻开Run选项卡。?Run单击STARTRUN能够开始运转流程并显示办理信息。单击Next提示能够翻开Analysis选项卡。?Analysis指明运转状态(Passed/Failed)。注：开始运转以前，仪器可能暂停（最长10分钟），以同意受热的护盖达到正确温度。注：7500Software达成RNaseP运转后，会自动剖析运转，并在Analysis屏幕显示结果。在RNasePRun导游的Analysis屏幕上，确认运转状态：?Passed7500InstrumentRNaseP运转经过。转到步骤。?Fai