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1、miRNA 的具体研究方法及研究思路lin-4，第一个已知的 miRNA，在 1993 年被发现。自此，miRNA 的研究就一发不可收拾。线虫、果蝇等模式生物的研究鉴定出miRNA 的许多重要功能，包括发育期间细胞增殖和死亡的协调，抗逆性，脂肪代谢等等。相对于这些低等的模式生物，哺乳动物的miRNA 功能研究可就复杂得多。在开始的几年，科学家们的首要目标是利用克隆、生物信息学和基因表达等方法编纂出完整的 miRNA 目录和它的表达方式。随着这个目标日益接近，研究重心又转移至 miRNA 功能的阐释。针对这一目标，涌现出多种技术，有报告基因分析、原位杂交、过表达和沉默、生物信息学预测算法等，它们

2、都有助于 miRNA 功能的推断。分析 miRNA 的表达miRNAmiRNAmiRNA 就是这么鉴定出的。然而，正向遗传学这么多年来也就鉴定出miRNAmiRNA列，它们就有潜力耐受，因此很难击中。另外，由于冗余，表型筛miRNA之后，定向克隆技术的出现，让多种细胞系和组织中的miRNAmiRNARNA18-25 ntRNA53接头，并进RT-PCRcDNARNA。目前测序技术的蓬勃发展也大大促进了这种方法。然而对于某些只在特定细胞类型中表miRNAmiRNAmiRNAmiRNAmiRNAmiRNAmiRNAmiRNAmiRNA有时，我们并不需要全盘了解所有 miRNA，而只是想了解发育或分

3、化的不同阶段、某种疾病状态下特异表达的 miRNA。这时，芯片就成为一种强大的工具，能监测组织特异的 miRNA 表达，帮您挑出关键的 miRNA。目前市场上多个 miRNA 芯片包括了最新的Sanger miRBase 数据库 14.0 版的内容，让您能紧跟形势。尽管最初 miRNA 芯片的交叉杂交和特异性为人诟病，但经过改进，很多已经能够分辨出单个碱基的差异。有了它，人们绘制出细胞分化期间的 miRNA 表达谱；有了它，人们了解到疾病状态下异常的miRNA 表达模式。ABI 公司还开发出一种类似芯片的 TaqMan miRNA Array，在一张微流体卡片上集合了数百个 TaqMan mi

4、RNA Assay，尽管通量不如芯片高，但发挥了 TaqMan 分析的优势高灵敏度、高特异性和宽动态范围。鉴定 miRNA 的功能miRNA 的功能研究与基因相似，过表达和沉默是两种有力的方法。miRNAmiRNAmiRNAmiRNAmiRNADicermiRNA内。不过，仅有 miRNA 过表达的结论往往不让人信服，我们还需要功能丧失（loss-of-function）实验来证实。对于小鼠中的 miRNA 研究，科学家们开发出一些遗传方法， 来产生功能丧失的突变。目前主要有三种：(1) Dicer 酶的突变，让所有成熟的 miRNA 都缺失；(2) 小鼠中 miRNA 基因的敲除；(3)miRNA 靶位点的突变。不过，miRNAmiRNAmiRNA2-O-甲基

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