附子中新乌头碱的含量测定

1、附子中新乌头碱的含量测定【摘要】目的建立以高效液相色谱法测定附子中新乌头碱含量的方法。方法采用elhr-18色谱柱(5,4.6250)，以甲醇水三乙胺75250.033为流动相，流速为1.0lin-1，检测波长为233n，柱温为30。结果新乌头碱在0.04640.3248g范围内呈良好线性关系，r=0.9999；平均回收率为100.7%，RSD=2.19%。结论该方法操作简便、准确、重复性好，可用于附子中新乌头碱的含量测定。【关键词】附子；新乌头碱；高效液相色谱法附子为毛茛科植物乌头AnituarihaeliDebx.子根的加工品，具有回阳救逆、补火助阳、逐风寒湿邪的成效1。附子的主要成分是乌

2、头类生物碱，可分为单酯类、双酯类和胺基醇类生物碱。其中以双酯型类生物碱如乌头碱、次乌头碱、新乌头碱成分毒性较大，但又同时是附子的药性成分。历代医家都非常重视附子的毒性及其用量2。为保证用药的平安性，本文在参考有关文献的根底上3，4，对附子生品中的新乌头碱进展含量测定，希望可以为其在质量控制方面提供一定的根据。1仪器与试药1.1仪器岛津L-20A高效液相色谱仪,HS10260D超声洗洁器，XS205电子天平十万分之一，JT1003电子天平千分之一。1.2试药新乌头碱对照品中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110799202204；甲醇为色谱纯；三乙胺、乙醚为分析纯；盐酸；氨水；纯洁水。

3、2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：elhr-18(5，4.6250)；流动相为甲醇-水-三乙胺75250.033；流速：1.0lin-1；检测波长：233n；柱温：30。进样量：5l。在该色谱条件下，新乌头碱与杂峰别离良好。结果见图12。2.2溶液的配制2.2.1对照品溶液的制备精细称取新乌头碱对照品适量，配制成0.116gl-1的对照品溶液，再精细汲取此对照品溶液，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0，2.4，2.8l分别定容于5l容量瓶中。转贴于论文联盟.ll.2.2.2样品溶液的制备精细称取生附子粉末40目约1.4g，置于具塞三角锥形瓶中，参加浓氨水2l，浸润0.5h,再加75l乙醚摇

4、匀，放置过夜，超声功率500，工作频率40kHz提取15in,过滤，再以25l乙醚分次洗涤药渣，过滤，合并滤液和洗液，45水浴挥干，0.037盐酸甲醇溶液溶解残渣，并定容至25l，摇匀，临用前用0.45微孔滤膜滤过，即得供试样品溶液。2.3标准曲线的绘制劝2.2.1项下制得的对照品溶液，均进样5l，在233n处检测，以峰面积值A对进样量进展线形回归，得回归方程为：A=8625582-142.3115，r0.9999n=7，结果说明,在0.04640.3248g范围内新乌头碱峰面积与进样量呈良好的线性关系。2.4精细度实验精细汲取同一供试样品溶液5l注入高效液相色谱仪,重复进样6次，测得新乌头碱

5、的峰面积，RSD=1.52。结果说明仪器精细度良好。2.5稳定性实验精细汲取放置0，2，4，6，8h的样品溶液5l分别注入高效液相色谱仪，测得相应的峰面积，RSD=2.19。结果说明，供试品溶液在8h内稳定性良好。2.6重复性实验精细称取同一药材6份按“2.2.2项下供试品的制备方法制备，分别汲取上述样品溶液5l注入高效液相色谱仪，测其峰面积并计算含量，RSD=2.06。2.7加样回收率实验精细称取含量样品约0.7g9份，分别精细参加新乌头碱对照品溶液适量使其中新乌头碱含量为样品中新乌头碱含量的80%3份、100%3份、120%3份。按“2.2.2项制备，按上述色谱条件测定，并计算新乌头碱含量

6、及RSD值。结果见表1。表1回收率实验结果略2.8样品含量测定对生附子、白附片、黑附子3种药材分别按“样品溶液的制备方法处理，依法测定。结果见表2。表2样品含量测定结果略3讨论通过对3种不同炮制方法所制成的附子中新乌头碱的含量测定可知，不同炮制方法的附子中新乌头碱的含量差异较大，其中生附子中新乌头碱的含量较高。本实验中曾进展了流动相系统的优化研究，比拟了乙腈0.03乙二胺4654，乙腈0.03乙二胺4060，乙腈0.03乙二胺4258，乙腈0.2冰醋酸三乙胺调pH6.253763，甲醇水三乙胺70300.1，甲醇水三乙胺70300.04，甲醇水三乙胺90100.04，甲醇水三乙胺80200.0

7、8，甲醇水三乙胺75250.1，甲醇水三乙胺72280.037，甲醇水三乙胺74260.035，甲醇水三乙胺75250.033等流动相系统的出峰效果，以最后一种对新乌头碱的检测效果最正确，在此色谱条件下，新乌头碱与杂峰别离良好、峰形亦佳，应选用此流动相。在样品的提取方法上，我们对直接超声提取及放置过夜后超声提取两种提取方法的提取效果进展了比照研究，结果发现放置过夜后超声提取对新乌头碱的提取率最高，且通过加样回收率实验说明放置过夜后超声提取方法对新乌头碱的提取可靠，同时，发现超声提取时间对新乌头碱的含量有显著影响。以超声15in的提取率最高再增加提取时间其含量无明显升高，应选15in。在定容溶剂

8、的考察上，我们分别对二氯甲烷和盐酸甲醇溶液的效果进展了比照研究，结果发现用盐酸甲醇溶液定容时供试液的稳定性较好。对于盐酸甲醇溶液的浓度，查文献资料及试验验证后，采用0.037。采用高效液相色谱法测定附子中新乌头碱的含量此方法具有简便、可靠、重现性较好的优点。但由于采用手动进样器，且无在线脱气系统,其结果容易受流动相、空气湿度、温度、操作人等诸多因素影响。因此应注意高效液相色谱的标准化操作,保证实验测定的准确性和稳定性。【参考文献】1国家药典委员会.中国药典，I部S.北京：化学工业出版社，2022：132.2江京莉，周远鹏.附子的药理作用和毒性J.中成药，1991，1312：37.3王瑞，刘芳，孙毅坤，等.不同附子炮制品中乌头碱、新乌