细菌培养技术

1、细菌培育检测技术节概述 培育出来才能对它进展争辩和鉴定学问点导航一.培育基的种类培育基culture medium是细菌生长生殖所需要的各种养分物质的人工制品。适宜的培育基能使细菌在体外快速生长生殖，便于对细菌进展分别和鉴别。可分为根底培育基、养分培育基、 选择培育基、鉴别培育基、厌氧菌用培育基和特别培育基。一根底培育基只含有细菌生长所需的最根本养分成分，应用最广泛，为制备多种培育基的根底，常见的有肉汤培育基、琼脂培育基。二养分培育基在根底培育基中参加葡萄糖、血液、血清、腹水或酵母浸膏等有机物，可供养分要求较高的细菌生长需要或增菌用。如结核分枝杆菌培育基中添加鸡蛋、马铃薯、甘油等。三选择培育基

2、的 别。选择培育基多为固体平板，用于从标本中分别某些特定的细菌。四鉴别培育基鉴别和鉴定细菌。五厌氧菌用培育基 降低培育基中氧化复原电势，并应与外界空气隔绝，使培育根本身为无氧的环境。六特别培育基为某些需要在特别条件下才能生长的细菌培育 基、改进 Kagan氏培育基等。二.培育基的制备pH、过滤、分装、灭菌及检定和保存。三.细菌检验室的留意事项及无菌技术事项如下：细菌的培育应在接种罩或无菌室内进展。有条件的试验室可在超净工作台内进展。用接种环分别和移种细菌时，用前用后均需灭菌处理。一般承受火焰灭菌法。从培育瓶或试管培育物中取标本或移种时，在翻开瓶口、管口或关闭前，均要在火焰上 通过23次。切不行

3、将含菌材料污染台面和其他物体。3来苏5石炭酸处理污染台面或地面，至少浸泡 30 分种。工作完毕后，用紫外光灯照耀 30 分钟，或用 3来苏擦拭台面，并清洗双手。四、接种环和接种针使用接种环和接种针由三局部组成，即环针局部、金属柄局部和绝热柄局部。接种环和接种针通常选用电热镍24mm，环和针的长度为 4050mm。接种环针使用前后均应进展灭菌处理，将接种环针末端直立火焰中，烧红镍丝局部， 针金属柄旋转通过火焰 3 针完毕后马上将染菌的镍丝局部于复原焰内焰中加热，烤干环针端附着的细菌或标本，以免 环针上剩余的细菌或标本因突受高热，爆烈四溅，而污染环境和导致传染危急。然后再移于氧 化焰外焰中烧红灭菌

4、，最终将金属柄局部往复在火焰中通过3次。用完后的接种环针马上搁置于架上，切勿顺手弃置，以免灼焦台面或其他物件。 五、接种操作区进行，此外细菌学试验室所必需的设备还包括无菌工作台、生物安全柜和生物安全试验室。一接种罩 接种罩的式样很多，可用木框和玻璃制成，亦有用有机玻璃制成。接种罩在用前先以 3石炭酸或来苏轻拭，内需装有紫外线杀菌灯，用前可先行照耀，以保证罩内无尘埃和细菌。操作完毕后，应马上清理内部，并作罩内消毒处理。二无菌工作台 又称超净工作台rnh，目前多承受垂直层流的气流形 过滤，从出风面吹出的干净气流，以肯定的和均匀的断面风速通过工作区时，将尘埃颗粒和微生物 颗粒带走，从而形成无尘无菌的

5、工作环境。使用时应提前 50 分钟翻开紫外线杀菌灯，30 分钟后关闭并启动送风机。净化区内严禁存放不必要的物件，以保持干净气流型不受干扰。三无菌室 无菌室又称干净室n m，是在试验室内部安装的用于无菌操作的小室。室内应有空气过滤装置、紫外线杀菌灯等。四生物安全柜 biological safety cabinet，BSC目前微生物试验中多承受生物安全柜，是为操作原代培育物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的试验材料时，用来保护操 作 溅出物而设计的负压过滤排风柜。五生物安全试验室yy，简称L试验室”，是指通过标准的实 验安 全设备和二级防护屏障设施构成，试验室生物安全防护的安全设备和设施的不同

6、组合，构成 了四级生物安全防护水平，一级为最低。六、接种法依据待检标本的性质，培育目的及所用培育基的种类，承受不同的接种方法。常用的有平板划线分别培育法、斜面接种法、液体接种法和穿刺接种法。一平板划线分别培育法自形成菌落，以便依据菌落形态及特征，选择单个菌落，经过移种而获得纯种细菌纯培育。分别细菌最常用的为平板划线分别法。将接种环火焰灭菌，待冷却后取标本或混合菌液。用左手持起平板，使平皿盖向上放于台面上或翻开平皿盖。左手斜持45角平板，右手持已取材的接种环，在酒精灯上方 56cm 处作连续划线法分离细菌。划线时，接种环与平板呈3040角，轻轻接触平板，以腕力平行滑动接种环。应避开 将琼脂划破。

7、先在平板上 l5 处轻轻涂布，然后即可左右来回以作连续划线接种，线与线间留有适当距离，做到线密而不重复，将整个平板外表布满划线。假设菌量较大可承受分区划线法。可将平皿分为假设干个区5 个区l区轻轻涂布，再在 2，3区划线。每划完一个区域，均将接种环灭菌一次，冷后再化下一个区域。每一区域的划线均接触上一区域的接种线 2见图1。图20-1细菌分别接种法划线完毕，盖好皿盖，做好标记将平皿倒置，置 37培育 1824 小时后观看结果。二斜面接种法菌的某些培育特性。取菌种管置左手食指、中指、无名指之间，拇指压住管底部上侧面。火焰灭菌接种环。以右手小指与手掌拔取棉塞如同时持有两管，可用小指与无名指拔取另一

8、棉塞，将管口l2次。将已灭菌的接种环伸入菌种管中，从斜面上取少许菌，快速伸入待接种的培育基管中， 在斜37孵箱中培育1824 小时即可观看结果。三液体接种法应 持好菌种管及培育基管。灭菌接种环，由菌种管取菌，伸入培育基管中，在接近液面的管壁上方轻轻研磨，并沾 取少许培育基液体调和，使接种物充分混合于培育基的液体中。液体培育一般以 1824 小时观看生长特征为好。四穿刺接种法试管内半固体培育基承受此法接种，多用于保存菌种、观看动力及做厌氧培育等。亦可用于观察细菌的某些生化反响。持好菌种管和培育基管。以灭菌接种针从菌种管取菌。接种针直刺入培育基的中心半固体或一般琼脂高层直达管底部深入培育基 3/4 处或沿管壁刺入醋酸铅高层，接种后接种针应沿原路退出。经培育后即可观看结果。沿穿刺线生长，线外的培育基清亮者表示细菌无动力；穿刺线 模糊不清，或沿穿刺线向外集中生长，或整个培育基混浊者表示细菌有动力。 七、培育法和厌氧培育法。一一般培育法接种好的置 37孵箱中培育 1824 如结核分技杆菌需37 天甚至 l 个月才能生长。二二氧化碳培育法某些细菌的培育，需要 510%二氧化碳环境中培育才能生长良好。可承受二氧化碳孵箱，它能 点燃蜡烛放在缸中，加盖涂以凡士林密闭。因燃烧而产生