检验方法验证和确认管理规程

1、第 第7页 /共7页 质量文件文件名称检验方法验证和确认管理规程编 码 版本号00文件属性 新订； 修订编写部门质控部起 草 人起草日期 年 月 日审 核 人审核日期 年 月 日批 准 人批准日期 年 月 日颁发部门质保部执行日期 年 月 日分 发质保部、质控部目的：规范检验方法的确认与验证。范围：适用于检验方法确认与验证。职责：质控部相关人员对此规程负责。内容：1.药典方法或其它法定标准收载的检验方法应当进行确认，以确保检验数据准确、可靠。确认内容如下：1.1方法选择性选择适当的仪器、试剂(包括仪器型号、GC或HPLC色谱柱、流动相配比等)使供试品溶液中目标峰与杂质峰能较好地分开，并确保目标

2、峰中没有其他杂质峰存在，必要时可采用二极管阵列检测器或质谱检测器对组分的单一性进行评价和确认。1.2系统适应性：1.2.1色谱柱的理论板数(n)用于评价色谱柱的分离效能。由于不同物质在同一色谱柱上的色谱行为不同，采用理论板数作为衡量柱效能的指标时，应指明测定物质，一般为待测组分或内标物质的理论板数。在规定的色谱条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分峰或内标物质峰的保留时间tR(以分钟或长度计，下同，但应取相同单位)和峰宽(W)或半高峰宽(Wh/2)，按n=16(tR/W)2或n=5.54(tR/Wh/2)2计算色谱柱的理论板数；或直接由色谱工作软件计

3、算出色谱柱的理论板数。1.2.2分离度(R)用于评价待测组分与相邻共存物或难分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统效能的关键指标。可以通过测定待测物质与已知杂质的分离度、也可以通过测定待测组分与某一添加的指标性成分(内标物质或其他难分离物质)的分离度，或将供试品或对照品用适当前方法降解，通过测定待测组分与某一降解产物的分离度举对色谱系统进行评价与控制。无论是定性鉴别还是定量分析，均要求待测峰与其他峰、内标峰或特定的杂质对照峰之间有较好的分离度。除另有规定外，待测组分与相邻共存物之间的分离度应大于1.5。分离度直接由色谱工作软件计算出色谱峰的分离度或由下列公式进行计算： 或 式中：tR2为相邻两

4、峰中后一峰的保留时间;tR1为相邻两峰中前一峰的保留时间；W1、W2及W1,h/2、W2,h/2分别为此相邻两峰的峰宽，及半高峰宽。当对测定结果有异议时，色谱柱的理论板数(n)和分离度(R)均以峰宽(W)的计算结果为准。1.2.3重复性用于评价连续进样中，色谱系统响应值的重复性能。采用外标法时，通常取各品种项下的对照品溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0；采用内标法时，通常配制相当于80，100%和120的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成3种不同浓度的溶液，分别至少进样2次，计算平均校正因子。其相对标准偏差应不大于2.0%。1.2.4拖尾因子(T)

5、用于评价色谱峰的对称性。为保证分离效果和测量精度，应检查待测峰的拖尾因子是否符合各品种项下的规定。色谱峰的拖尾因子直接由色谱工作软件计算或按下列公式进行计算：式中：W0.05h为5峰高处的峰宽；d1为峰顶点至峰前沿之间的距离除另有规定外，T应不大于2.0。2.在出现以下几种情况时，必须进行检验方法验证：采用新的检验方法、检验方法需变更的、采用药典及其它法定标准未收载的检验方法、法规规定的其他需要验证的检验方法。2.1验证涉及的方法2.1.1含量的气相或液相的测定方法。2.1.2清洁验证的检验方法：应当采用经验证的灵敏度高的检验方法检测残留物或污染物。每种方法的的检测限必须足够灵敏，能检测残留物

6、的限度标准。应当确定检验方法可达到的回收率。残留物的标准应当切实可行，并根据最有害的残留物来确定，可根据原药材的药理、毒理或生理活性来确定，也可根据原药材中最有害的组分来确定。2.1.3稳定性指示方法2.1.4其他必要的检验方法2.2验证涉及的内容如下表：项目内容鉴别杂质测定含量测定及溶出量测定定量限度专属性+精密度重复性-+-+中间精密度- +- +线性-+-+范围-+-+准确度-+-+检测限- -+-定量限-+-耐用性+稳定性-+-+注：“+”为需要验证的内容；“”已有重现性验证，不需要验证中间精密度；“”如一种方法不够专属性，可用其他检验方法予以补充；“”视具体情况予以验证。2.2.1选

7、择性(或专属性)选择适当的仪器、试剂(包括仪器型号、GC或HPLC色谱柱、流动相配比等)使供试品溶液中目标峰与杂质峰能较好地分开，并确保目标峰中没有其他杂质峰存在，必要时可采用二极管阵列检测器或质谱检测器对组分的单一性进行评价和确认。2.2.2精密度2.2.2.1系统精密度通过对单个测定值与平均值之间的偏差程度来衡量系统的误差。对同一均匀的样品溶液或标准品溶液，连续重复进样六次，记录每次进样后各组分的响应值、峰面积或峰高，计算相对标准偏差(RSD)。2.2.2.2方法精密度通过测定样品含量与真值(平均值)的偏差程度来衡量样品制备过程(包括称量、稀释)中的误差。分别对同一批号的样品称量六次，按含

8、量测定方法测定其含量，计算其相对标准偏差(RSD)，除另有规定外通常RSD2.0%。2.2.2.3中间精密度按验证确定的方法，同一人用同一仪器检测三批样品，每批间隔24小时以上，测定一次，共测定三次。或由两人分别使用不同的仪器检测同三批样品。2.2.3方法的线性范围2.2.3.1在含量测定浓度的50%150%选择五个以上(含五个)不同的浓度点，每一个浓度需测定三次，记录各对应浓度下的响应信号(峰高、峰面积或峰面积的比值)，以衡量样品量与检测器响应信号间的线性对应关系。2.2.3.2接受标准：相关系数r0.991.00。2.2.4方法的准确度衡量该方法的实测结果与真实值的吻合程度，即方法的回收率

9、。取已知浓度的样品(浓度范围为含量测定浓度的80%、100%、120%)各三份，每份进样测定三次，计算该方法的百分回收率。2.2.5检测限仪器能检测到样品中各组分的最低检测浓度，不需定量。2.2.5.1色谱类仪器在仪器系统性实验符合检测要求的条件下，测定三次空白样品，洗脱时间需用覆盖整个样品中所有组分的流出。计算平均噪声水平。根据产品检验规程规定的检测浓度配制梯度浓度，单针进样。当信噪比为3:1或2:1，确定该浓度为待确定的检测限。将该浓度溶液重复进样三次，若三次所得图谱的信噪比均为3:1或2:1，则确定该浓度为检测限。2.2.5.2光谱类仪器在仪器系统性实验符合检测要求的条件下，把3倍空白值

10、的标准偏差(测定次数n20)相对应的质量或浓度称为检出限。2.2.6定量限能够重复的、准确的测量峰面积(相当于供分析物)的进样量。2.2.6.1色谱类仪器色谱峰峰高等于噪声高的10倍。按检测限方法测定仪器的平均噪声，按检测限操作方法操作，将按信噪比为10:1的浓度定为定量限。2.2.6.2光谱类仪器在仪器系统性实验符合检测要求的条件下，把10倍空白值的标准偏差(测定次数n20)相对应的质量或浓度称为检出限。2.2.7方法耐用性(仅在新开发的方法的第一次验证时进行)HPLC法，方法耐用性要求进行考察的变动因素包括：流动相比例、流动相pH值、不同的色谱柱及柱温等；GC法，方法耐用性要求进行考察的变动因素包括：不同的色谱柱、柱温、检测器和载气流速(或柱压)等，主要考察杂质峰与目标峰的分离度能否达到要求，并确保目标峰中没有干扰峰存在，同时观察杂质峰的出峰顺序是否发生变化。2.2.8溶液稳定性将配制好的溶液间隔一定的时间(24小时内)分别进样，比较含量目标峰面积的变化。3.进行检验方法验证前，由验证部门进行验证的立项申请并经验证委员会批准后，进行验证方案的编制，在得到验证委员会的审批后方可付诸实施；验证方案应包括验证的目的、引用的标准、检验方法、验证项目、可接受标准、样品的测定、验证评价、结论要求等内容。4.进行相关的方法验证后，验证部门应出具相应的验证报告。5.由验证小组