流式细胞术在周期与凋亡中的应用

1、流式细胞术在周期与凋亡中的应用第1页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五目 录010203工作原理周期应用凋亡应用04案例分析第2页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五Published journal（sci papers1000)第3页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五第4页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五概念流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来 第5页，共3

2、4页，2022年，5月20日，1点31分，星期五仪器基本组成流动室和液流系统流动室 鞘液SHEATH 激光源和光学系统光源滤片光电管和检测系统光电倍增管PMT计算机和分析系统 计算机第6页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五液流系统Injector TipFluorescencesignalsFocused laserbeamSheath fluid流动室第7页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五光路图Air-cooled Argon Ion LaserBeam Shaping LensesHigh SensitivityQuartz Flow CellFo

3、rward ScatterDetectorSide ScatterDetector525BP FL1 (FITC)575BP FL2 (PE)620BP FL3 (ECD)675BP FL4 (PC5)488DL488BK550DL600DL645DL流动室第8页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五激光配置488nm氩离子激光器633nm氦氖激光器大功率紫外激光器第9页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五光路 - 滤片特性 长通滤片 允许长于设定波长的光通过 短通滤片 允许短于设定波长的光通过 带通滤片 允许一定带宽的波长通过630 nm BandPass

4、FilterWhite Light Source第10页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五光信号收集 光信号分离，导向，各探测通道PMT接收并转化为电信号。二色镜 1 2 3带通滤波片光电倍增管激光束细胞收集透镜前向散射光侧向散射光，荧光第11页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五数据处理FSC SSC FL1 FL2 FL3脉冲处理，模数转换光信号电信号记录数据，显示结果（面积，峰高，宽度）第12页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五颗粒度细胞大小参数非荧光信号第13页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五FL1 FIT

5、C,GFP(PMT2)FL2 PE (PMT3)FL3 ECD,PI (PMT4)FL4 PC5,APC (PMT5)荧光信号第14页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五激光器第15页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五周期应用第16页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五第17页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五单参数直方图第18页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五DNA细胞周期分析细胞周期G2MG0G1s 200 400 600 8001000G0G1sG2MDNA分析DNA含量细胞数量2N4N第1

6、9页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五产品列表第20页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五研究领域第21页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五分析软件Modfit: 第22页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五凋亡研究在G0/G1峰前出现一个亚二倍体峰，即凋亡峰。检测调亡，可进行抗肿瘤药物研究和某些因素对细胞的损伤机理的研究。第23页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五第24页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五细胞凋亡第25页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五凋亡

7、检测-每一步都有检测试剂盒第26页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五细胞膜变化的检测磷脂酰丝氨酸（PS）的检测早期凋亡第27页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五早期凋亡PS检测及结果判断早期凋亡特征磷脂膜（PS）外翻，但是细胞膜保持完整性，因此PI染色为阴性DNA没有发生断裂 结果判定早期凋亡：AnnexinV+/PI-死亡或者晚期凋亡： AnnexinV+/PI+正常的活细胞： AnnexinV-/PI-第28页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五线粒体水平检测相关产品线粒体膜电位的检测原理：荧光染料JC-1在活细胞中以聚体形式存在于

8、线粒体基质上产生红色荧光，在凋亡细胞中，以单体形式存在不与线粒体结合而产生绿色荧光。操作简单，试剂直接加入细胞中，20分钟后检测第29页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五JC-1 检测结果流式图Antifibrotic effects of ZK14, a novel nitric oxide-donating biphenyldicarboxylate derivative, on rat HSC-T6 cells and CCl4-induced hepatic fibrosisLiDai, HuiJi, Xiang-wenKong and Yi-huaZhang第30

9、页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五DNA水平的凋亡检测-晚期检测凋亡晚期DNA内切酶活性被激活升高，双链DNA在核小体之间切断形成185bp为基数的有序片段检测方法Tunel流式法，通过在核酸片段末端标记，跟传统相比优点在于可以计算凋亡百分比DNA Ladder分析，但凋亡细胞太少时作不到第31页，共34页，2022年，5月20日，1点31分，星期五TUNEL简介通过DNA末端转移酶将带标记的 dNTP （多为dUTP）接到DNA片段的3-OH端，再通过荧光检测定量分析结果。TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling）第32页，共3