MSC无血清培养基说明书

1、 3/3MSC无血清培养基说明书 http:/./doc/d89e5ad776a20029bd642d21.html NutriStem? MSC XF Medium 间充质干细胞无血清培养基 使用说明1. 培养基组分 产品名称 NutriStem? MSC XF Basal Medium 间充质干细胞无血清基础培养基 NutriStem? MSC XF Supplement 间充质干细胞无血清营养添加物 NutriStem? MSC XF Basal Medium 间充质干细胞无血清基础培养基 NutriStem? MSC XF Supplement 间充质干细胞无血清营养添加物 注意: 作

2、为完全的，即用型的培养基，不需要额外的添加物。两种组分不单独销售。 2. 产品描述 NutriStem? MSC XF Medium是无血清、不含异源动物成分(Xeno-free) 的人类间充质干细 胞培养基，可促进多种来源的人类间充质干细胞的生长，如骨髓（BM-hMSC）、脂肪组织 （AT-hMSC）、脐带（UCM-hMSC）。NutriStem? MSC XF Medium可促进人类间充质干 细胞的长期生长，同时还能保持多向分化潜能。NutriStem? MSC XF Medium和MSC间充质 干细胞促贴壁试剂（货号: 05-752-1）共同使用，细胞贴壁及增殖效果更好。 3. 特点 ?

3、 ? ? ? ? ? 无血清、不含异源动物成分：所有成分都是明确的，且同种来源（人），包括蛋白质； 不含抗生素； 能够培养不同来源的人类间充质干细胞； 维持人类间间充质干细胞的长期生长，保留类纤维原细胞形态； 极低的背景分化率； 维持间充质干细胞的自我更新及多向分化潜能，可分化为骨细胞、脂肪细胞及软骨细胞。 货号 05-200-1A 05-201-1U 05-200-1B 05-201-1-06 规格 500 ml 3 ml 100 ml 0.6 ml 储存条件 4C -20C 4C -20C4. hMSCs对NutriStem? MSC XF Medium的适应性 若之前使用血清培养法，转换

4、至NutriStem? MSC XF Medium间充质干细胞无血清培养，可 能会面临细胞适应的问题，需要逐步适应，并优化培养方案，建议从原代开始使用。 注意：如同任何培养体系的转换，在新的培养体系下细胞会损失一部分并需要一定过程适应。Biological IndustriesServes Life SciencesPage 1 of 5 http:/./doc/d89e5ad776a20029bd642d21.html 5. 注意事项和免责声明 5.1 如果观察培养基中有可见的沉淀物，不能再使用 5.2 超过标签上的截止使用日期，不得再使用 5.3 所有组分均应避光保存 6. 完全即用型培养

5、基的准备 ? ? 冻存的NutriStem? MSC XF Supplement间充质干细胞无血清营养添加物需要在室温或 2-8C解冻，避免重复冻融。 完全的NutriStem? MSC XF Medium：将0.6ml的NutriStem?间充质干细胞营养添加物 加进100ml的NutriStem?间充质干细胞基础培养基中（同样的，将3ml的NutriStem?间充质 干细胞营养添加物加到500ml的NutriStem?间充质干细胞基础培养基中），2-8C避光保存， 混合完全的NutriStem? MSC XF Medium在2-8C直到14天都是稳定的。 7. MSC贴壁试剂（货号: 05

6、-752-1）的包被培养皿的准备工作 7.1 使用无菌的DPBS溶液（货号: 02-023-1，不含Ca2+ and Mg2+），将MSC促贴壁试剂稀释 100倍，用移液管轻轻搅拌混合； 7.2 用稀释过的MSC贴壁试剂涂层培养皿； 7.3 使用合适的量以涂层培养孔或板，使用量参照表1； 7.4 轻轻摇动培养皿，用保鲜膜包裹涂层的培养皿，然后在2-8C孵育过夜； 7.5 或者在CO2培养箱（36-38C）至少孵育30分钟； 7.6 接种前，用DPBS轻轻冲洗培养器皿。 表 1 涂层过程中贴壁试剂建议使用量 培养器皿 96 孔板 24 孔板 12 孔板 6 孔板 T25 瓶 注意： 1. 长时间

7、用MSC贴壁试剂孵育(至72hr)不会降低细胞贴壁和扩散性能。 2. 涂层的培养皿需在无菌条件下2-8C储存，需在一周内使用。 表面积 cm2/孔或瓶 0.3 1.9 3.8 9.4 25 稀释 100 倍后的 MSC 贴壁试 剂/孔或瓶 0.1 ml 0.40 ml 0.8 ml 2 ml 5.5 mlBiological IndustriesServes Life SciencesPage 2 of 5 http:/./doc/d89e5ad776a20029bd642d21.html 8. 培养hMSCs 8.1 复苏冻存的hMSCs 8.1.1 取5-10ml NutriStem? M

8、SC XF Medium完全培养基，放入50ml的圆锥管中，37C水 浴槽预热； 8.1.2 将一管冻存的hMSCs直接放在37C水浴槽快速解冻，并轻微搅拌； 8.1.3 慢慢将细胞滴加到预热的培养基中； 8.1.4 常温下，细胞在300-400 xg离心4-5分钟； 8.1.5 除去上清，然后用0.5-1ml的完全培养基重新悬浮细胞； 8.1.6 进行活细胞计数（如:台盼蓝拒染实验或XTT）； 8.1.7 加一定量的NutriStem? MSC XF Medium完全培养基； 8.1.8 将细胞转移到用MSC贴壁试剂包被过的培养皿中，接种密度需要计算（见表2）； 8.1.9 CO2培养箱孵育

9、(36-38C) 注意： 不建议直接离心解冻复苏之后的hMSCs。 在这种情况下， 最好跳过步骤4和5， 直接将解冻复苏的细胞加到MSC贴壁溶液涂层的培养皿里， 另外加一定量的NutriStem? MSC XF Medium完全培养基。 8.2 接种hMSCs NutriStem? MSC XF Medium适用于多种来源的hMSCs优化增殖。 MSC来源的多样性和捐赠者的不同会影响MSC增殖速率。为优化hMSCs在NutriStem? MSC XF Medium的增殖，建议接种浓度为5000-6000 cell/cm2（表2），然后每2-3天用新鲜的完 全的NutriStem? MSC XF

10、 Medium喂养细胞，当达到80%融合时(confluence -即细胞聚集生 长面积达到80%的培养皿面积)，进行传代。 注意： 下面的培养方案是基于使用间充质干细胞消化分离溶液(植物酵素)（货号：03-075-1）。另外， 也可以使用其他hMSC消化分离试剂，如间充质干细胞消化分离溶液(非酶法)（货号： 03-077-1）。在这种情况下，请按照相应的使用说明书进行操作。 接种说明书 8.2.1 开始前，将 MSC 消化分离试剂（货号：03-075-1）预热到室温； 8.2.2 移去培养皿中培养基，用不含 Ca, Mg 的 DPBS 浸洗一次； 8.2.3 将 1-3ml 的 MSC 消化

11、分离试剂加入到 T25 培养瓶中（分离试剂加样量取决于培养面积 大小，以浸没细胞为宜）；Biological IndustriesServes Life SciencesPage 3 of 5 http:/./doc/d89e5ad776a20029bd642d21.html 注意事项：细胞融合率愈高或传代次数愈多，分离试剂用量也需相应增加。 8.2.4 在室温下孵育 2-10 分钟，在显微镜下确定细胞分离/脱壁（孵育 37C 不会加速分离）。 通常在 2-5 分钟内细胞分离，轻敲培养瓶/或用枪头轻微吹打，可使细胞彻底分离； 8.2.5 分离后，在 5-10ml 的 DPBS 或用预热的 Nu

12、triStem? MSC XF Medium 中悬浮细胞 将 悬浮的细胞收集到 15ml 的管子中，重新清洗培养瓶可以得到全部的细胞； 8.2.6 在室温下，以 300-400 xg 离心细胞 4-5 分钟，小心地去掉上清液； 8.2.7 用少量预热的 NutriStem? MSC XF Medium 重新悬浮细胞团，进行细胞计数； 8.2.8 重新接种细胞到预先涂层的培养板中，按照表 2，计算接种密度和需要培养基的量； 8.2.9 在 CO2 培养箱中孵育； 8.2.10 每 2-3 天，用新鲜的 NutriStem? MSC XF Medium 重新喂养细胞。 表 2 建议接种密度（大约

13、5000-6000 个细胞/cm2） 培养容器 12-well plate 6-well plate T25-flask 8.3 hMSCs 低温贮藏 8.3.1 用低于室温， 2-8以下的 MSC 冻存液 （货号： 05-712-1， 建议使用 0.5-1 x106 细胞/ml， 1ml/管）快速悬浮 hMSC 团； 8.3.2 快速将冻存管命名并安放在合适的冻存容器中； 8.3.3 将冻存管转移到液态罐中。 9. 质量控制 为保证 NutriStem? MSC XF Medium 的质量，每个批号的培养基均通过 MSC 生长曲线试验 并能维持和扩增无分化的 hMSCs。附加试验：PH，渗透

14、压，内毒素及无菌试验。 10. 相关产品 产品名称 MSC Attachment Solution 间充质干细胞促贴壁试剂 MSC Freezing Solution 无血清间充质干细胞冻存液 MSC Dissociation Solution 间充质干细胞分离溶液(植物酵素) Non-Enzymatic MSC Dissociation Solution 间充质干细胞分离溶液(非酶法) 货号 05-752-1F/H 05-712-1D/E 03-075-1B/C 03-077-1B/C 规格 1ml/5ml 10ml/50ml 100ml/20ml 100ml/20ml 储存条件 2-8 2

15、-8 -20 2-8 表面积cm2 3.8 9.4 25 培养基用量 1ml/well 2ml/well 5ml/T-25 建议接种密度 1.8-2.3 x 104cells / well 4.5-5.5 x 104cells / well 12-15 x 104cells / T-25Biological IndustriesServes Life SciencesPage 4 of 5 http:/./doc/d89e5ad776a20029bd642d21.html Dulbeccos Phosphate Buffered Saline, w/o Calcium and Magnesium DPBS（无 Ca & Mg） Nutristem hESC XF with HSA 胚胎干细胞专用无血清完全培养基（含人血清 白蛋