乳酸脱氢酶测定操作规程(SOP)

1、乳酸脱氢酶（LDH）测定操作规程（SOP）一、用途本产品用于体外定量测定血清、血浆样品中乳酸脱氢酶 （LDH）的活性。二、临床意义（一）概述乳酸脱氢酶（LDH）,又称L 乳酸一NAD+氧化还原酶， 酶编号为EC 1.1127,分子量约为34000道尔顿。LDH是 一种细胞质酶，存在于所有组织细胞中。由于组织中的 LDH 浓度比血浆高约500倍，即使组织的轻微损伤也将导致血清 中活性的明显增高，在肝、心肌、骨骼肌和肾中发现高度组 织特异性活性的酶。（二）临床意义乳酸脱氢酶增高主要见于心肌梗死、肝炎、肺梗死、某 些恶性肿瘤、白血病等。某些肿瘤转移所致的胸腹水中乳酸 脱氢酶活力往往升高。目前，常用于

2、心肌梗死、肝病和某些 恶性肿瘤的辅助诊断。（三）医学决定水平170U/L:此值在参考范围以内，等于或低于此值可排除 许多与LDH 升高有关的疾病，而考虑其他的诊断。此值还可 作为病人自身的对照，用来与以前或将来的测定值作比较。 300U/L：高于此水平时，应考虑到可能引起LDH升高的各 种疾病，如心肌梗塞、肝病变、传染性单核细胞增多症、进 行性肌营养不良等。因此，应作其他各种试验，以作出明确 诊断。血清溶血可使测定值增高，应予以注意。500U/L：高于此值，常见于巨幼细胞性溶血，急性白 血病、慢性粒细胞性白血病、转移癌和肝昏迷等，此时应作 其他多种检测来作出正确诊断。三、检验原理L-乳酸+NA

3、D+ ldh丙酮酸+NADH+H+NADH 的生成速率与样品中 LDH 活性成正比，在 340nm 波 长处，通过连续监测吸光度的上升速率（AA/min），即可计 算出样品中 LDH 的活性。四、样品血液样品原则上采集晨起空腹血（禁食 12 小时）；患者 处于平静、休息状态，减少患者由于运动、饮食带来的影响； 静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后 1 分钟内采 血，回血后立即松开；正确使用抗凝剂；防止溶血；防止过 失性采样。样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破 损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆， 防止样品对环境的污染、水分蒸发。LDH 测定样品为不溶血的血清

4、、血浆（肝素抗凝）。样品 应在低温条件下运输保存，样品中 LDH 在室温保存可稳定 2天。五、试剂（一）试剂组成R：试剂11L-乳酸62mmol/LR：试剂22氧化型辅酶I （NAD+）16.7mmol/L酶类校准品（需另购） 不同批号试剂中各组份不能互换。（二）试剂准备R和R试剂为即用型液体试剂，开瓶装载即可使用，用12后应及时冷藏保存。（三）试剂的保存及稳定性不能冰冻试剂。未开瓶的R和R试剂应在28C密闭避光贮存，稳12定期为瓶签标示的有效期。开瓶后的试剂应在28C保存， 稳定期为 30 天。（四）试剂性能可接受的指标空白吸光度：试剂空白在主波长340nm、副波长405nm 处，10mm光

5、径下，吸光度值W0.700。（五）试剂使用中的注意事项严格按照试剂说明书的要求使用试剂。试剂28C密闭避光贮存可稳定至瓶签标示的有效 期。对超过有效期的试剂不能使用。严禁放置0C以下保存。试剂开瓶后，如果长期放置，会吸收空气中的二氧 化碳，导致pH值下降，造成测定值不准确，因此请尽快使 用。当试剂变混浊或被污染或空白吸光度值0.700时， 表明试剂已失效，应弃去。装载试剂时防止产生气泡，否则结果无法保证。不同批号的试剂之间尽管批间差很小，但仍然不能 混用，否则试剂的稳定性将无法保证。（六）预防危险发生的注意事项 使用时应避免与人体接触，当试剂误入口中或眼中，或者附着到皮肤上的时候，请立即用大量

6、清水冲洗，如有必要， 请接受医生的治疗。（七）处理废弃物时的注意事项 试剂反应后所产生的废液及使用后的包装材料应集中收集后按照相关法规进行废物处理。六、操作步骤基本参数方 法：速率法样品/试剂：1/50主波长：340nm反应温度：37C副波长：405nm反应时间：10min操作1）二步法加入物空白（B）校准（C）测定（U）样品（ul）-6校准品（ul）-6-蒸馏水 / 生理盐水6(ul)试剂 R (ul)1240240240混匀，37C恒温5分钟。试剂 R （卩 1）6060602混匀，37C恒温1分钟，340nm波长处以空白管调零测定初始吸光度，然后准确测定平均每分钟吸光度变化率 A/min

7、。（2）一步法工作液配制：根据测定所需试剂量，取 R 和 R 按 4:1 比12 例混合即为工作液。样 品（ul）-20校准品（u 1）-20-蒸馏水/生理盐水（u20-l）工作液（ul）100010001000混匀，37C恒温1分钟，340nm波长处以空白管调零测定 初始吸光度，然后准确测定平均每分钟吸光度变化率 A/min。操作流程图空白调零 时间: 温度空白调零 时间: 温度:37C主波长:340nm副波长:405nm5 分钟 1 分钟 1-2 分钟R1：240 卩 IR2：60样品:6卩1ul计算样品LDH活性（U/L）AXF=A/min理论F值：F=8199注：由于理论 F 值是在理

8、想条件下计算出的，每个实验 室使用仪器和测定条件都不一样，故如果用理论 F 值计算， 可能存在偏差，应使用校准品进行校准。七、参考值范围109-245 U/L 八、注意事项（一）本试剂尽管具有较好的抗交叉污染能力，但仍然建议 各实验室应根据仪器性能及实验室条件做好防止交叉污染 的工作。（二）试剂与样品用量可根据不同仪器的需要，在试剂样品 体积比例不变的条件下，适当增加或减少试剂与样品的用 量。（三）采用必要的预防措施使用试剂，试剂使用后应立即盖 紧瓶盖，避免污染。（四）准确的结果取决于准确校正的仪器、温度及时间的控 制。（五）红细胞内LDH含量比血清或血浆高数倍，样品应尽量 避免溶血。（六）药物、抗凝剂、促凝剂、分离胶等其他物质都可能对 测定值造成无法预知的干扰。当怀疑标本存在这些干扰物质 的影响时，请停药后或采用无任何添加剂的血清进行测定。（七）由于有些试剂中含有高浓度的L型LDH作为工具酶，可能会导致