高效液相色谱蒸发光散射检测法测定金银花中绿原酸和木犀草苷的

1、高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定金银花中绿原酸和木犀草苷的库尔班江苏文琴张鹏威【摘要】目的创立高效液相色谱-蒸发光散射检测HPL-ELSD法测定金银花中绿原酸及木犀草苷的要领。要领接纳hrasil18色谱柱(4.6250，5.0)为色谱柱，用乙腈(A)-0.5%冰醋酸(B)为活动相梯度洗脱，以蒸发光散射检测器检测绿原酸和木犀草苷。梯度步伐为：0in(A：10%，B：90%)16in(A：25%，B：75%)22in(A：50%，B：50%)；流速1.0lin-1；检测器漂移管温度110，载气流速3.0lin-1。结果绿原酸及木犀草苷的回归方程别离为：lgA=1.34lg+4.360，r=0.

2、9995；lgA=1.653lg+5.327,r=0.9996。线性范畴别离为5.045g和0.43.6g；均匀接纳率别离为99.94%(RSD=1.43%，n=5)和100.85%(RSD=1.78%，n=5)。结论该要领操纵轻便、结果正确，专属性强，分散结果和重现性好，可有用收缩总阐发时间。为较全面操纵金银花药材的质量操纵提供了轻便可靠的要领。【关键词】金银花绿原酸木犀草苷高效液相色谱-蒸发光散射检测器含量测定Abstrat:bjetiveTdevelpaethdfrdeterinatinfhlrgeniaid(hA)andgalutelin(Gal)inFlsLnieraeJapniae

3、.ethdsAnHPLequippedithELSDethdasappliedtquantifyhlrgeniaidandgalutelinTheanalytiallunashrasil18(4.6250,5.0)iththeteperaturef30.ThehratgrafrthehAandGalasdevelpednagradientphase.Tslutinereaetnitrile(A)and0.5%aetiaidslutinandthegradientdeasasflls：0in(A：10%,B：90%)16in(A:25%,B:75%)22in(A：50%,B：50%).Thefl

4、rateas1.0lin-1Theteperaturefdrifttubeassetat110andtheflratefgasaintainedat3.0lin-1ResultsThealibratinurvesfhAandGalerelinearintherangef5.045gand0.43.6g，andtheaveragereveriesere99.94%(RSDas1.43%)and100.85%(RSDas1.78%)respetivelynlusinTheethdisaurate，speifi，andanshrtenthettalanalytialtiefFlsLnieraeJap

5、niae1仪器与质料1.1仪器Agilent1100高效液相色谱仪美国，安捷伦公司；Allteh2000型蒸发光散射检测器美国，Allteh公司；K无油空压机(天津，兴国科技)；SB2200超声波洗濯器(上海超声仪器厂)；ETTLER220电子天平(美国，梅特勒公司)。1.2质料绿原酸购于中国药品生物成品检定所，批号110753-202213，木犀草苷购于上海郎中堂化剂公司，纯度大于98%；从差异产地网络5批金银格式品，通过天津药物研究院张鑫新老师断定，天津、河南、山东产为忍冬LnierajapniaThunb.,陕西产为红腺忍冬L.hypglauaiq.，新疆产为山银花L.nfusaD.；水

6、为饮用纯洁水杭州娃哈哈团体，冰醋酸(天津奥凯化工商业)。别的试剂均为阐发纯。2要领与结果2.1色谱条件与体系实用性试验Krasil18色谱柱(4.6250，5)，柱温30；梯度洗脱，活动相A为：乙腈，活动相B为：0.5%冰醋酸水溶液,梯度步伐为：0in(A：10%，B：90%)16in(A：25%，B：75%)22in(A：50%,B：50%)，每次重新开始梯度前，以0in时比例活动相平衡10in。流速1.0lin-1；ELSD检测器参数为：漂移管温度110，气体流速3.0lin-1。理论塔板数按木犀草苷峰盘算不低于2000，与相邻峰的分散度大于2.0。色谱图见图1。2.2溶液的配制2.3线性

7、干系观察别离细密汲取上述比较品溶液2，5，8，11，15，18l，注入色谱仪，按上述色谱条件测定，以峰面积对数比照拟品进样量对数举行线性回归，别离得绿原酸及木犀草苷的回归方程别离为：lgA=1.34lg+4.360，r=0.9995；lgA=1.653lg+5.327，r=0.9996，线性范畴别离为5.045g和0.43.6g。2.4提取要领观察细密称取金银花药材粉末约2.0g，用加石油醚609020l脱脂，置具塞三角瓶中，别离用80l70%乙醇、甲醇超声提取两次20l2或1次40l1，30in/次，过滤，归并滤液，用相应溶液洗涤滤渣，将滤液60减压蒸干，用甲醇定量转移至2l容量瓶中，摇匀，

8、滤过，取续滤液，取10l进样阐发，比力色谱峰面积大校结果表白以40l70%乙醇超声提取两次20l2即能完全提取绿原酸和木犀草苷。2.5要领学观察细密汲取同一样品溶液，一连进样5次，10l/次，测定峰面积，绿原酸和木犀草苷峰面积的RSD(n=5)值别离为0.73%和0.84%。表白仪器细密度精良。取同一批供试品溶液，室温避光安排，别离于0，2，4，8，12，24h举行测定，结果绿原酸、木犀草苷峰面积的RSD(n=6)别离为1.72%，0.54%；表白供试品溶液在24h内不变。细密称取5份已重复测定的金银花药材粉末1.0g，别离细密参加绿原酸和木犀草苷比较品溶液适量，按“2.2项下要领测定含量，盘

9、算接纳率。结果见表12。表1绿原酸的加样接纳率测定结果略表2木犀草苷的加样接纳率测定结果略2.6样品测定差异产地的样品按上述要领制备样品溶液，按含量测定项下的色谱条件举行测定，每个产地样品平行测定3次，取峰面积均匀值，按尺度曲线盘算差异产地金银花中绿原酸和木犀草苷含量。结果见表3。表3样品含量测定结果略3讨论蒸发光散射检测器可以检测任何挥发性比活动相小的化合物，因此其顺应性比UV检测器要广，但其敏捷度比UV要低约一个数目级4，6。金银花中木犀草苷的含量相对较低，因此本文接纳加大样品浓度的要领来降服ELSD敏捷度低的缺点。为了使待测物提取完全，将?中国药典?里的一次提取改为分两次提取，在利用雷同

10、量的溶剂条件下进步了提取服从。从本实行色谱图可以看出在活动相组分产生变革的阶段，色谱图的基线照旧比力平展，这是由于ELSD检测器是利用样品蒸发所形成的气溶胶引起的光散射而产生信号的，只要仪器漂移管温度充足高，载气充足大，就可制止产生溶剂信号，制止对样品的滋扰。而通用的UV检测器中活动相组分变革时会引起光折射引起基线不稳，因此利用ELSD检测有大概举行较大梯度的活动相切换以收缩阐发时间。由于金银花的产地差异，其绿原酸和木犀草苷含量也差异，但测定结果表白，百般品中的绿原酸和木犀草苷含量均切合2022年版?中国药典?部划定1。【参考文献】1国度药典委员会.中国药典,部S.北京：化学产业出书社，2022：152.2武晓红，田智勇，王焕.金银花的研究新希望J.时珍国医国药，2022，16(l2)：1303.3石钺，石任兵，陆蕴如.我国药用金银花资源、化学身分及药理研究希望J.中国药学杂志，199