乳酸含量的测定方法(实训指导)

1、乳酸含量的测定方法（实训指导）L一乳酸的含量测定方法有UV-酶法、酶电极法、旋光法、气相色谱法、高教液相色谱法等。旋光法因受其他物质干扰，及测定时间长，手段繁琐，故不适合子L一乳酸的定量测定UV酶法测定精度商，但部分试剂依赖进口，费用高且测定时间长，故亦不宜在食品、饮料的质量检测及L乳酸的工业化生产中应用，酶电极法测定迅速，准确、简便、廉价，适合于各种场合对L一乳酸含量的测定。以啤酒中乳酸含量的测定为实训案例，介绍酸碱滴定法和褪色光度法测定柠檬酸含量的方法。1酸碱滴定法测定原理将试样加入过量的NaOH标准溶液，加热后使乳酸和乳酸干酐与碱反应完全，冷却后以酚酞作指示剂，用强酸标准溶液滴定过量的碱

2、。根据消耗的强酸标准溶液体积，可以求出乳酸的含量。仪器设备三角瓶150mL、碱式滴定管试剂1mol/L氢氧化钠标准溶液1%酚酞指示剂c2H2sOmi/L硫酸标准溶液错误!未找到引用源。1.4操作步骤（1）1mol/L氢氧化钠标准滴定液的配制与标定配制：取澄清的氢氧化钠饱和溶液56mL，加新沸过的冷蒸馏水定容至1000mL。标定：精密称取在105干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾6.000g，加新沸过的冷蒸储水50mL,振摇，使其尽量溶解；加酚酗指示液2滴，用氢氧化钠饱和溶液滴定，在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。每1mL氢氧化钠滴定液(lmol/L)相当于204.2mg

3、的邻苯二甲酸氢钾。CH2so/lmol/L硫酸标准溶液的配制与标定配制：取硫酸30mL(硫酸的密度为1.84g/mL,浓度为95%),缓缓注入适量的水中，冷却至室温，加水稀释至1000mL,摇匀。标定：取在270-300干燥恒重的基准无水碳酸钠约1.0g,精密称定(精确至0.001),加水50mL使溶解，加甲基红-澳甲酚绿混合指示液10滴，用配制好的硫酸溶液滴定至溶液由绿色变为紫红色时，煮沸2分钟，冷却至室温，继续滴定至溶液颜色有绿色变为暗紫色。计算：每1mL硫酸滴定液(0.5mol/L)相当于53.OOmg的无水碳酸钠。根据滴定用硫酸溶液消耗量与无水碳酸钠的取用量，算出硫酸溶液的浓度，即得。

4、m一称取无水碳酸钠的质量，g;V1一滴定无水碳酸钠消耗的硫酸标准溶液的体积，mL;V2一滴定空白试验消耗的硫酸标准溶液的体积，mL；0.05299与1mL硫酸滴定液(0.5mol/L)相当的无水碳酸钠的质量。表4：硫酸标准溶液配方C错误未找到引用源。H2so4/1mol/L硫酸/mL基准无水碳酸钠/g1301.00.5150.80.130.21%酚酞指示剂的配制取酚酞1g,加乙醇100mL使溶解。(4)溴甲酚绿混合指示液(5)啤酒酒液中乳酸含量的测定称取试样1.5g(称准至0.0002g)于150mL的三角瓶中，加50ml新煮沸的冷蒸储水，精确加40mLimol/L氢氧化钠标准溶液，煮沸5分钟

5、，加酚献指示液2滴，趁热用硫酸标准滴定液(lmol/L)滴定，酚献指示液变红时停止滴定，记录消耗硫酸滴定液的体积数(mL),每1mL氢氧化钠滴定液(0.lmol/L)相当于90.08mg乳酸(C3H6。3)。用空白试验校正。1.5结果记录与计算乳酸含量测定结果数据记录如下表表5：乳酸含量测定结果记录表测定内容-一一一一_测定次数123硫酸标准溶液的浓度/mol/L滴定管初始读数/mL滴定管终读数/mL试样消耗硫酸标准溶液的体积/mL空白滴定消耗硫酸标准溶液的体积/mL乳酸含量，w%乳酸平均含量/%相对平均偏差/%计算公式:w乳酸含量，V1-试样消耗硫酸标准溶液的体积，mLV2-空白滴定消耗硫酸

6、标准溶液的体积，mLc-硫酸标准溶液的浓度，mol/Lm称取样品质量0.09008与1mL硫酸标准溶液相当的以毫克表示的乳酸质量。2对羟基联苯比色法测定啤酒中乳酸含量测定原理在除去蛋白质，葡萄糖等干扰物质的啤酒中，乳酸在铜离子的催化下，与浓硫酸作用生成乙醛，乙醛能与对羟基联苯作用生成在565nm处有特征吸收的紫红色物质，在一定范围内，乳酸浓度与波长为565nm的吸光度呈线性关系，因此可以通过测定565nm处的吸光度来测定乳酸的含量。仪器设备（1）分光光度计，1cm比色皿；（2）离心机；（3）恒温水浴锅；（4）试管混旋器，SK-2；（5）具塞试管，5mL；（6）具塞比色管，20mL。试剂与溶液所

7、用试剂无水乳酸锂、对羟基联苯、钨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、40%乙醛溶液、无水葡萄糖、蔗糖均为分析纯试剂。主要溶液（1）钨酸溶液：0.303mol/L硫酸及10%（W/V）钨酸钠（Na2WO42H2O）溶液等体积混合，当天配用。（2）20%（W/V）硫酸铜溶液：称取硫酸铜（CuSO45H2O）20g，加蒸馏水约70mL，加热使溶解，再用蒸馏水稀释至100mL。（3）4%（W/V）硫酸铜溶液：20%硫酸铜溶液10mL加蒸馏水稀释至50mL。（4）对羟基联苯溶液：称取对羟基联苯1.5g溶于0.125mol/L氢氧化钠100mL中（稍稍加温助溶）。贮棕色瓶中，保存于冰箱内，可使用一个月。（5）

8、乳酸标准储存液（1mg/mL）：精确称取无水乳酸锂106.5mg，溶于50mL蒸馏水中，加0.5M硫酸20mL,再加蒸水稀释至100mL。混匀后保存于冰箱。(6)乳酸标准应用液(200g/mL):使用时取储存液10mL用蒸馏水稀释至50mL。在冰箱中可保存数天。(7)醛溶液(50g/mL)：称取预冷40%的乙醛溶液25mg，加蒸馏水稀释至200mL。操作步骤(1)样品处理取约3mL左右啤酒酒液，3000r/min离心5min，吸取上清液稀释一定倍数后，吸取稀释液00mL于洁净离心管中，准确加入00mL钨酸溶液，混匀，室温静置至溶液有明显絮状物出现(约3045min)，10000r/min离心1

9、0min，取上清液加入0.3g活性炭，反复摇后置室温30min，过滤，滤液收集于5mL具塞试管中，60水浴保温0.5h，冷却待用。(2)标准曲线的绘制用200g/mL乳酸应用标准液，同样品溶液(酒液)预处理后(可以不稀释)，按下表6数量在预先编好号的试管中加入标准乳酸滤液和蒸馏水。表6：乳酸标准液配制试管号1234567滤液/mL0.000.100.200.300.400.500.60蒸馏水/mL001.901.801.701.601.501.40各管中分别加入氢氧化钙粉末100mg，混匀，8000r/min离心5min，取上清液1.5mL，加入预先加有20mg氢氧化钙粉末的小试管中，混匀，加

10、0.1mL20%硫酸铜溶液，称重，迅速混匀，沸水浴3min，水浴冷却，补足重量，3000r/min离心5min，各吸上清液0.5mL加入比色管中。在各管加入25L的4%硫酸铜溶液，混匀后置冰水浴内冷却。将预冷的浓硫酸缓缓加入各管中，每管各加6.0mL，边加边摇，混匀后置沸水浴中准确加热5min，取出后迅速置冰水浴中冷却3min左右。在各管中加0.5%对羟基联苯溶液0.05mL，充分振摇后，放置0.5h，其间每10min混摇一次。各管置于沸水浴中准确加热90s，立即放入冰水浴中冷却。在波长565nm处用lcm比色皿，1管作为参比，分别测定吸光度(A)。所得数据以乳酸含量为横坐标，以565nm处的

11、光吸收为纵坐标，作标准曲线。表7：标准曲线的绘制表溶液中乳酸的含量(口g/mL)吸光度A（3）啤酒酒液中乳酸含量的测定取酒液滤液按标准曲线的测定方法，以蒸馏水为空白测定其在560nm处的光吸收，所得数据在标准曲线上查得相应的乳酸含量，即为酒液中的乳酸含量。酒液乳酸含量=标准曲线上查得相应的乳酸含量X稀释倍数5注意事项（1）用硫酸铜和氢氧化钙去除葡萄糖、醛类等干扰物质，在本质上是利用了氢氧化铜中铜离子在碱性条件下能将葡萄糖等含还原性醛基的物质氧化的性质（而使葡萄糖等干扰物除去）。但这步反应需在加热条件下才能进行。在做葡萄糖和乙醛的干扰试验时发现，在不加热时，显色后颜色非常深（影响乳酸的测定）。因此去除葡萄糖、醛类等干扰物质的操作必须要加热才行。（2）本实验成功与否与所用浓硫