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文档简介
1、ICS 65. 020. 20B 04DB12天 津 市 地 方 标 准DB12/T 8402018西瓜种子纯度SSR分子标记鉴定方法Method of identifying seed purity of watermelon by using SSR-based marker2018-12-01 实施2018- 11 -07 2018-12-01 实施天津市市场和质量监督管理委员会 发布DB12/T 8402018DB12/T 8402018 XG-23F:TGTTGAGATTCTTTUATTTCAACTGTR: TGGGTCAAAGIATTTTTGCTTTTT55120 12824XG-
2、24F:TTCAACCAAGCAGTTCTTAACACAAR: GATGCATTAAGATTTTCGTTTCGC55170 18425XG-25F: TCTGTGTGGATGCAAATGGT R: GCTAATCGAGCCCAGTTACG5524925826XG-26F:CTTGAGCATTTGGCTTCCTAGTGT R: GTCAAAATGTCCTTTGATTCCCAA55168 14727XG-27F: TTCCACACCAAGGAGGIAGG R: CATGTCATTCGATAAAGCAGAAA5523724928XG-28F:GGAAGAGTGAGGTGATAAATCAAIATGTR
3、:AATTGUCCCAAAIATCCATATGAC55143 152附录C（规范性附录）制胶过程C. 1凝胶制作将玻璃板洗净，用无水乙醇擦两遍，晾干。在长板上涂1%亲和硅烷，在短板上涂2%玻璃硅烷。操作 过程中防止两块玻璃板互相污染。待玻璃板彻底干燥后，将其组装好，用水平仪调平。取4. 5%丙烯酰胺 胶80 mL,加入TEMED 80卩L和10%过硫酸铉400卩L,迅速混匀后灌胶。灌胶过程中防止气泡产生。灌 胶结束后，将梳子齿向外，轻轻的插入胶中，使其聚合1 h以上。6. 2预电泳待胶凝固后，拔岀梳子，将电泳槽组装好，80 W恒功率下预电泳15 min20 min。C. 3变性在20卩L PCR产物中加入4卩L 6X变性上样缓冲液，混匀后，在PCR仪上运行变性程序：95 。变 性5 min, 4 C冷却 10 min。C. 4电泳用洗耳球吹洗加样槽，清除气泡和杂质。每个加样孔加入5卩L变性后的PCR产物。80W恒功率电泳 至上部的指示带（二甲苯青）到达胶板的中部。C.5银染电泳结束后，小心分开两块玻璃板，凝胶紧贴在长板上。将长板置于固定液中轻轻晃动3 min；双 蒸水快速漂洗1次，不超过10 s；染色液中染色5 mi
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