发酵工程与设备实验思考题答案

1、发酵工程与设备实验1. 决定摇瓶溶氧量的因素有哪些？它们如何影响摇瓶溶氧量？答：摇瓶的透气性：8 层纱布，纱布透气性越好，摇瓶溶氧量越大。摇瓶的转速：转速越大，培养基流动越剧烈，增大与气体接触面积。培养基的粘稠度：粘稠度越大，氧气越难进入，溶氧量越低。 (4)菌种的形态、密度：若菌体密度大，则相对不易溶。2. 显示后，颜色却呈较深的蓝色，试解释其原因。答：磷钼蓝受热，易被氧化成蓝色还原物。植酸钠中含杂质磷太多。培养基中含有的 P 没有被利用完全3. 红曲米发酵实验中，为何要添加酸水？无菌酸水如何制得？答：是为了洗脱菌种，同时为红曲霉生长创造酸性环境。制备：取一烧杯的蒸馏水，往水中加入乳酸并调P

2、H 至 4.0.然后取 10ml 配制好的溶液于干净的试管中，密封包扎后，放入高压灭菌锅灭菌，即可得到无菌酸水。4. 产植酸酶黑曲霉的分离实验中，为何选用植酸钙而不选用植酸钠？答：钠盐易溶解、钙盐难容，植酸钙被利用后易形成透明圈，从而筛选。5. 灭菌？答：脱氧胆酸钠高温时会与铁盐反应。氯霉素眼药水，生产过程中已经灭菌，若加入到培养基灭菌，高温高压会使其失活。6. 请详细说明产植酸酶黑曲霉的分离实验的实验原理。答：以植酸钙为唯一磷来源的选择培养基，同时以透明圈法，从土壤中分离筛选产植酸酶的黑曲霉7. 产植酸酶黑曲霉的摇瓶发酵实验中，摇瓶的作用有哪些？答：气体和营养分布均匀强化传热，使温度保持恒定

3、，不会出现局部温度过高代谢产物分散避免影响其他菌丝生长防止细胞沉淀8. 植酸酶酶活力测定实验中，若显色后的反应体系测定吸光度值为 2.23，说明什么问题？该如何调整实验方案？答：说明待测物浓度过大，应该稀释。9. 植酸酶活力测定时做标线的目的是什么？答：标线是反应吸光度与无机磷浓度之间的关系，待我们测的样品吸光度后即可在标线上读出对应无机磷浓度，从而进行酶活计算。10. 简述灭菌锅的使用方法及步骤。答：向锅内注入水至三脚架上边缘、进行预热。放入物品，将直排气管并放入排气槽。关盖，拧紧对应螺栓，打开开关加热待压力达到 0.05MPa，排冷空气，使压力归零。使温度维持在 121126，2030mi

4、n，之后，打开排气阀，自然归零，开盖，取出物品存用。11. 试述试管棉塞的详细制作步骤。答：剪方形纱布取方形棉花对折棉花紧卷棉花纱布包紧塞入试管并整理扎线去残角12. 试述锥形瓶棉塞的详细制作步骤。答：取适量棉花对折紧卷取适当大小方形纱布包紧塞入锥形瓶并整理将纱布对角，残角塞入纱布内13. 试述发酵瓶棉塞的详细制作步骤。答：取 8层纱布（取一张对折三次）塞在瓶口内整理纱布，使纱布与瓶壁接触处无折痕即可14. 试述平板菌落接种试管斜面的详细步骤。答：工具、手、试管斜面、平板、工作台等消毒点燃酒精灯，再消毒手，在酒精灯附近打开平板和试管塞用接种环在平板上取一环菌丝接种到斜面上，盖上平板，塞上试管塞

5、15. 试述摇瓶种子接种发酵瓶的详细步骤。答：工具、手、试管斜面、平板、工作台等消毒点燃酒精灯，再消毒手，在酒精灯附近打开瓶塞用移液管从种子瓶量取适量菌液接种到发酵瓶中盖上瓶盖，适宜条件下培养16. 试述红曲斜面孢子种接至三角瓶的详细步骤。答：工具、手、试管斜面、平板、工作台等消毒点燃酒精灯，再消毒手，在酒精灯附近打开无菌水试管塞和斜面试管塞把无菌水加入斜面中，盖上塞子，震荡在酒精灯旁打开摇瓶塞和斜面塞用移液管从斜面上吸取适量孢子液，注入摇瓶中盖上塞子，适宜条件下培养17. 植酸酶酶活力测定实验中，样品管与空白管的加样顺序有何不同？为什么不同？答：空白管：先加入 TCA，再加入植酸钠，加入 T

6、CA后抑制了酶的活性，使后续反应不能进行。 TCA 通过空白管的对照，能够得知酶的活性18. 植酸酶酶活力测定实验中，Vc、植酸钠和 TCA 的作用各是什么？19. 所培养的平板有没有可能得不到菌落？试分析得不到菌落的原因及措施。答：有可能。原因：无菌水没有冷却，植酸钙未混匀，稀释后浓度小，没有目标菌措施：对样品进行富集取稀释倍数低的稀释液人为原因引起的可重新培养平板20. 产植酸酶黑曲霉的分离实验中，平板中为什么要加入 1%脱氧胆酸钠溶液？答：抑制真菌菌落菌丝生长速度，防止连成一片，有利得到单菌落，便于实验现象的观察。21. 产植酸酶黑曲霉的分离实验中，氯霉素注射液或氯霉素眼药水为何不需要灭

7、菌，加入有何作用？答：氯霉素眼药水或注射液，生产过程中已经灭菌，若加入到培养基灭菌，高温高压会使其失活。作用：抑制杂菌生长22. 适？答：多半不是，应对菌种进行多次纯化，不断进行分离，可采用划线培养。23. 简述黑曲霉纯种培养操作过程中的关键无菌操作技术。答：关键无菌操作是斜面接种。操作在酒精灯附近灼烧接种环，靠壁冷却管口对准酒精灯和接种环灼烧试管口，棉塞应在火焰周围灭菌后方可塞入试管动作要迅速24. 答：摇瓶培养 Cc168鸡腿菌，周期短，产量高，成本低，污染少。25. 红曲米固态发酵中，为什么每天要将三角瓶摇动 23次？答：充分混匀菌体，充分发酵使温度较为恒定，不致局部过热影响发酵放出 C

8、O ，使 O充分接触，促进发酵26. 酸奶制做实验中，如何判断主发酵是否完成？答：若观察到凝固则说明完成PH检测27. 酸奶制作的基本原理是什么？答：通过乳酸菌发酵牛奶的乳糖产生乳酸，乳酸使牛奶中的酪蛋白（占乳蛋白 85%）变性凝固而使整个奶液呈凝乳状态。同时，可形成酸奶特有的香味和风味。28. 常用的酸奶发酵菌种有哪些？（写 35 种）答：保加利亚乳杆菌嗜热链球菌双歧乳杆菌嗜酸乳杆菌29. 植酸酶酶活力测定实验中，空白管和样品管的加样顺序有何不同？为什么？（重复题目）30. 酿制糯米甜酒的酒药中主要含何种微生物？糯米甜酒的发酵原理是什么？答：根霉，酵母。原理：米饭（淀粉）被根霉产生的糖化酶水解为葡萄糖，酵母则将得到的葡萄糖发酵为酒精31. 为什么糯米饭要降温至 35以下拌酒曲？为什么糯米饭一开始发酵时要挖个洞？后来为什么又要填平？答：温度一般为菌种生长的速度，依菌种而定。温度过高会将菌种杀死，降温后保证了酒化的温度。挖洞：充分与 O接触，利于菌种增殖填平是为了创造无氧条件，使酵母在无氧下进行发酵32. 为什么刚酿制的甜酒往往略带酸味？经低温存放后则酸味消失，香味更浓郁，试解释其中原因。答：微生物自身代谢产生有机酸使其带酸味。后熟原理：有机酸与生成的乙醇