食用菌栽培24课件

1、食用菌栽培课件24第九章菌种的分离、提纯、扩大、培养与保第一节菌种的分离与提纯进入课文三、菌种的提纯如果分离的菌种已污染，可以使用相应的办法除掉。 (一)使用抑制培养基(二)排除细菌或酵母菌污染(三)排除霉菌污染(四)菌丝再提纯(五)单根菌丝提纯技术(六)菌丝生长速度、生长量的测试使用抑制培养基从腐朽严重的木材块上分离菌丝时，新生菌常会伴随着各种各样的细菌、霉菌出现。在这种情况下，可向培养基中加入选择性强的抗菌剂，如涕必灵(TBZ)或多菌灵(MBC)。抗细菌的如培养基加入30mg/L左右的四环素或氯霉素等，以抑制细菌的出现。此外，也可以在培养基内添加链霉素3040mg/L或金霉素2030mg/

2、L或高锰酸钾50mg/L。返回排除细菌或酵母菌污染 组织分离，基内菌丝分离将分离物接种在无冷凝水、硬度较高的斜面培养基上，再降低培养温度至1520。利用某些大型真菌在较低的温度下，菌丝生长速度比细菌菌苔蔓延速度快的特点，用尖细的接种针切割菌丝的前端，转接到新的试管斜面培养基中培养，连续23次就能获得所要的纯菌丝。也可以用接种铲将斜面污染的细菌菌苔铲除掉，打破试管，挑取内部有基内菌丝的琼脂块，移入无冷凝水的培养基上。适合于菌龄较长、被好气性细污染的试管。 返回排除霉菌污染分离培养后，若发现有色的霉菌小斑点污染，最好放弃。如由同一材料分离得来的，每支试管都是如此，那就要重新分离。如果霉菌菌落刚出现

3、孢子，孢子尚未成熟，尚未变色，则可采用前端菌丝切割法提纯。如果霉菌菌落的颜色已加深，则意味着众多的孢子已成熟，若采用前端菌丝切割法提纯意义不大。可将1%多菌灵的湿滤纸盖在霉菌的菌落上，以防止提纯时，试管振动使孢子扩散。然后，用火焰灭菌过的接种铲将分离物表层铲掉，随之，用另一接种针钩取分离物位置下的基内菌丝。霉菌的污染还常见于棉塞上，这多是棉塞受潮所致。返回(四)菌丝再提纯采用切割法或基内菌丝挑取法提纯后，一般都能获得纯菌丝，但也偶有提而不纯的现象发生，这就必须对菌丝再提纯。为了判断提纯后菌落的纯度，将菌丝块接入琼脂培养皿平板培养基内，如果纯种菌丝，菌落会逐渐向四周辐射状散开，外缘整齐，如果菌种

4、不纯，混有其它丝状真菌，菌丝生长速度不一，菌落外缘便参差不齐，培养皿内产生的色素也分布不匀。再提纯时，对菌落中生长速度较为一致的部分施行菌丝前端切割，移植至新的培养基。返回单根菌丝提纯技术将怀疑混有杂菌的菌丝，用尖细的接种针切割带有培养基的菌落前端23mm2的薄片，移接入PDA培养基，每支试管可移接数点，放在所分离的菌种的最隹温度下培养，隔12小时后，在阳光下观察各接种块菌丝生长的状态。选取菌丝显现出分叉状，用锋利的接种针仔细地将贴在培养基面上的单根菌丝带培养基切割下来，移入PDA培养基内，塞上棉塞，再用放大镜观察判断是否为单根菌丝，则应继续培养1224小时后，再重复上述过程。适合于菌丝生长速

5、度快，密度不高的菌类，如草菇 返回第二节菌种的扩大、培养一、菌种的扩大 经分离、提纯、出菇试验确定为生产用种后，为了适应生产栽培需要，要进行菌种的扩大、繁殖。二、贴标签 无论是菌种分离、提纯，还是一级、二级或三级种的扩大，无菌操作后应马上贴标签。三.菌种培养 培养室内温度、湿度、光照、空气等条件彼此联系，互相影响。 (一)一级菌种的扩大培养1.单一菌丝类型一级菌种的扩大培养(1)单一菌丝类型一级菌种接种无菌操作要点a在无菌箱内，将待接的斜面试管(无冷凝水)、购来或自行培养好的一级原始种，酒精灯、火柴盒、接种针等放入接菌箱内。下一页单一菌丝类型一级菌种接种无菌操作要点b按接种箱操作规程进行消毒。

6、c打开工作灯，用75%的酒精棉球擦双手，伸入接种箱内，再擦接种工具。d点燃酒精灯。5右手持接种针，将顶端烧红，并将整支接种针过火几次。6用左手手指和手掌托持两支试管，食指与中指与中指夹持一级原始种，无名指和小指夹持空白斜面培养基试管。用右手无名指和小指夹持原始种棉塞，小指和鱼际夹持空白试管棉塞。火焰封口双管。下一页(二)二级菌种的扩大培养1.单一菌丝类型二级菌种的扩大培养将灭菌好的二级菌种培养瓶数十瓶(视接种箱的大小)连同接种工具、一级菌种放入接菌箱内，按常规进行熏蒸消毒。按无菌操作要求，在接种箱内将接种针进行火焰灭菌、冷却。将一级菌块划成1大小的接种块，用接种钩钩住，弯钩朝上，左手持二级菌种

7、瓶横放，用右手小指和鱼际抓住棉塞，左手将二级种瓶反时针旋转后退，拨脱棉塞，火焰封口。 下一页二级菌种的扩大培养将已钩取的菌种块抖入二级菌种瓶，塞上棉塞。经摇二级菌种瓶，使菌种块滚至培养基面中央。按此法每支试管可接二级菌种瓶810瓶。操作时注意：不能将二级种瓶口朝上，同时注意拨出棉塞后，不能碰到其它器具及接种箱壁。若接种块掉在箱底上，应弃之不用。每接完一支一级种，接种工具应重新火焰灭菌。待整箱二级菌种瓶全部接完后，开启箱盖。下一页2.混合型二级菌种的扩大培养混合型原种的接种和单一型二级种接种的方法大同小异。显著不同的是：银耳一级种培养基的前后端应弃之不用，仅要绣球状银耳纯白菌丝及附近长有黑灰色羽

8、毛状菌丝的菌块。按上述方法，连同培养基整块钩取出，移入菌种瓶内，每支试管仅能接一瓶二级菌种，不能贪多。接完二级菌种，用手拍打，振动瓶，使一级菌种块纯白菌丝面朝上，千万不能朝下，否则报废。 下一页混合型二级菌种的扩大培养培养温度初期2728，促使羽毛状菌丝蔓延，56天之后马上降至2223，这是纯白菌丝生长适宜的温度。接种后培养2025天，接种块逐渐形成胶质化的原基团，并吐出水珠，适合作为段木银耳种，菌龄控制在4045天。若在同样的温度下，1213天胶化，并逐渐开片，吐黄水，则适合作为代料棒栽银耳种，菌龄控制在1518天内使用。 下一页混合型三级种的扩大培养接种匙铲接量只需蚕豆大小，移入三级种瓶内

9、，每瓶二级菌种可接34瓶三级种，其余弃之不用。因银耳是混合型的，纯白菌丝仅生长在表面浅层培养基内，又由于羽毛状菌丝繁殖十分迅速，所以银耳培养基装料只需装1/4瓶即可。移接中注意防止烫伤菌丝。返回二、贴标签一级种试管标签应贴在前端，既不能遮住棉塞，又不遮住培养基斜面的部位，以免在检查棉塞和斜面是否污染时千万不便；二级、三级种标签多贴在瓶上部侧壁；塑料袋难贴标签，可将标签贴在塑料套环上。出可用记号笔将标签内容写在塑料袋外。标签内容 注明菌种名称、菌株号、接种者或单位接种日期四项。菌种名可用中文注明，也常用拉丁文学名的缩写注明。习惯上常用的缩写字母。 下一页贴标签菌种名 多写在标签的第一行，字体较大

10、。菌株号 是某一菌种特定菌株代号，更多的是用有一定代表意义的数字表示，它一般要求用较小号的字符写在菌种之后。购买一级菌种代号不宜自行更改。接种者或单位 是注明该菌种制作责任人。接种日期 菌种使用时作为推算菌龄的依据。科研上，育种上的标签一般较复杂，内容较多，除上述内容外，还要注明分离方法如孢子分离(S)、组织分离(T)、基内菌丝分离(M)等。 返回菌种培养培养室内温度、湿度、光照、空气等条件彼此联系，互相影响。 1.温度控制 培养室内温度应根据季节变化进行控制，并结合培养阶段确定培养温度。(1)冬季保温、夏季降温 冬季气温低，菌种培养室要有保温措施，使培养室温度保持在25左右，不保温浪费然。夏

11、季菌种呼吸产生热量，使培养室温度升高，可达45，在这个温度下培养的菌种，菌丝弱，有时还能造成菌种死亡，所以要有降温措施。(2)变温培养 大多数的菌种菌丝体生长阶段25生长最快，20以下菌丝最壮。我们目前大多培养菌种采用初期培养温度2628，这时气温虽然2628，但菌种瓶或袋内温度低，有利于瓶或袋内栽培料吸温，菌种恢复的快；菌种培养中期(菌种恢复已封面并向下生长几厘米)培养温度控制23，这时袋内温度比气温高23，袋内温度则25，菌丝生长最快；培养后期温度控制在20以下，菌丝生长最壮。下一页菌种培养2.湿度控制 培养室湿度最好控制在RH50%，不宜太湿，湿度过大，霉菌易繁殖。3.通风换气 食用菌是

12、好气性真菌，菌丝体生长阶段需要充足的氧气。通风换气消除呼吸过程产生的二氧化碳，通过气体扩散得到氧气。同时通过通风换气排除呼吸过程产生的热量。4.光 菌丝体生长阶段不需要光线。培养室尽可能暗。5.污染的检查 培养过程中塑料袋制种最好不要经常检查是否有污染，检查菌种时常常手提袋口，袋 内吸气造成污染。检查用工作灯照射，发现有污染的提出。下一页第三节 菌种质量的鉴定菌种质量的优劣是一个非常严肃的问题。菌种生产必须首先保证质量。一.一级菌种鉴定 一是鉴定所分离得到的菌株或从外地引进的菌株是不是我们所需要栽培的菌株。二是判别所得到的菌种是否优良。常见几种食用菌一级菌种主要特征(见附表)香菇、木耳、蘑菇、

13、草菇、金针菇。下一页二.二级或三级种的鉴定(一)木腐菌类的鉴定除银耳外，以木屑作培养基的菌种，外观上，菌丝洁白，浓密，木屑被分解后，逐渐从棕褐色转为淡黄色，若瓶内的菌丝柱和瓶壁脱离，说明培养基偏干，培养室内空气相对湿度偏低或菌种老化。有时瓶底出现黄色分泌液，说明菌种已完全老化。若瓶袋内下半部木屑未分解，仍为棕褐色，说明培养时间不足，需在培养，如菌种瓶或袋底份量较重，菌丝前端密集，生长停滞，形成抑制线，这是由配料过湿所致。下一页(二)草腐生菌类二、三级菌种的鉴定蘑菇和草菇均属于草腐生菌类。其二、三级菌种形态差异较大，蘑菇又因菌株不同，出现较大的差别。蘑菇气生型菌株菌丝旺盛，雪白，蔓延过程菌丝前端

14、呈扇形展开，当培养基过湿时，极易形成块状的菌皮。贴生型的菌株菌丝极为纤细，呈蓝灰色，不易形成菌被。草菇菌种的菌丝为透明状，银灰色，生长迅速，后期出现红褐色的厚垣孢子。厚垣孢子少的，一般出菇的子实体大，反之则小。下一页(三)菌种的选购具体的选购方法归纳起来就是“提、闻、看”提 用手提棉塞，看棉塞松紧是否适度，过松过紧都不行。闻 闻菌种的气味，若菌种散发出酸、霉、臭味，则说明菌种已污染，不是纯培养菌丝。纯培养菌种具有特殊香味。看 看菌种的外观，看是否破管、破瓶、破袋，再看菌种是否否“纯、正、壮、润”具体来说纯度高，不能有杂菌；菌丝体色泽正，多数种类的菌丝应纯白、原种、栽培种菌丝连结成块，无老化、变

15、色、吐黄水、长子实体原基等现象，菌丝粗壮，长势强；培养体要湿润，含水量适宜，不干缩脱壁。下一页三、矿物油法此法是将液体石蜡油加入欲保存的菌株斜面上。液体石蜡油先经1211小时高压灭菌。为了除去高压灭菌时混入的水分 ，再经150170干热1小时，待水分完全蒸发，石蜡呈透明状为止。从干燥箱中取出，冷却至室温。使用时将无菌液体石蜡油倒入保存菌种的试管，至离琼脂上部1处竖立保存。注入过多时，保存后成活率低，反之，琼脂易干燥。使用时用接种铲从斜面上铲取一小块菌丝块，原管仍可以重新封蜡继续保存。刚从液体石蜡油中移出的菌种菌丝体常沾有石蜡油，生长较弱，要重新移植一次恢复正常生长。保存温度10以上室温。下一页四、安瓿瓶保存孢子法国外用安瓿代替试管，在室温下，将蘑菇孢子典藏在真空干燥的安瓿瓶中3年，还具有活力。也可以用1060指形管或用10安瓿瓶作为容器收藏香菇孢子。本方