第5组缺氧动物模型复制

1、缺氧动物模型及中枢神经系统功能抑制和低温对缺氧的影响浙江大学医学院临床医学专业3A 班 5 组乏氧性缺氧和血液性缺氧的动物模型方法；观察缺氧过程中呼吸的摘要 目的 学习反应及血液色泽和全身一般情况的变化；了解温度和中枢神经系统机能状态对缺氧耐受的影响以及对照实验和控制实验条件重要性。方法 给小白鼠注射氯丙嗪并放在冰浴的纱布上以抑制中枢神经系统功能，观察其对缺氧的影响。分别通过密闭瓶、CO 吸入、注射亚硝酸钠来不同的缺氧动物模型。 结果 氯丙嗪加冰浴组小鼠的存活时间为 43.012.9min，显著长于对照组小鼠存活时间 15.33.6min（p0.01）。氯丙嗪加冰组和对照组小鼠的总耗氧量分别为

2、 17.64.9mL 和 18.23.5mL。氯丙嗪加冰浴组小鼠的总耗氧率为 5.000.89%，对照组小鼠的总耗氧率为 1.940.46%，两者存在显著差异（p0.01）。亚硝酸钠组小鼠的存活时间为 8.82.6min，显著小于亚硝酸钠加美兰组小鼠的存活时间 15.15.2min（p0.01）。乏氧型缺氧小鼠肝脏呈暗红色，CO小鼠肝脏呈樱桃红色，NaNO2小鼠肝脏呈深咖啡色，NaNO2且用美兰治疗小鼠肝脏呈浅咖啡色。结论 腹腔注射氯丙嗪加冰浴可延长在缺氧环境中的存活时间。CO、NaNO2可缩短小鼠的存活时间，降低呼吸频率，造成小鼠血液型缺氧。美兰可以在一定程度上对抗 NaNO2，延长小鼠的存

3、活时间。 缺氧模型 氯丙嗪 一氧化碳 亚硝酸钠 美兰1.材料1.1实验动物: 小鼠(mouse)1.2药品和试剂: 0.25%氯丙嗪(chlorpromazine) 、钠石灰（soda Lime）1.3器械: 密闭瓶、注射器，测耗氧装置（oxygen consumption gauge）1.4 小鼠捉拿方法右手抓鼠尾 鼠尾略向后拉左手的拇指和食指抓住小鼠两耳后项背部皮毛 以无名指及小指鼠尾 左手翻转使鼠腹部朝上,头略朝下。1.5 小鼠腹腔注射右手持注射器45 度角刺入腹白线偏左的下腹部，进针 3mm 左右有落空感时表示已进入腹腔，回抽无肠液、尿液（有空气）即可注射。切误使针头向上注射，以防针头

4、刺伤内脏。1.6 实验动物分组、处理1.7 总耗氧率计算公式：总耗氧率=总耗氧量(mL)鼠重(g)存活时间(min)1.8 数据处理数据以xs 表示，显著性差异采用 t 检验。2.方法2.1 中枢神经系统机能状况和低温对缺氧耐受性的影响取 2 只相同体重相近的小鼠，准确称取体重（W），并随机分为生理盐水组和氯丙嗪组。生理盐水组按 0.1ml/10g 体重腹腔注射生理盐水，并置于室温中；氯丙嗪组按 0.1ml/10g体重腹腔注射 0.25氯丙嗪，并放置在冰浴的纱布上，待呼吸频率降至 70 次/min 后，将 2只小鼠分别放入盛有钠石灰的 125mL 广口瓶内，连接好测耗氧装置。观察小鼠的活动情况

5、。从密闭测耗氧装置开始计时至小鼠，小鼠的存活时间（T）。待小鼠后从量筒读出液面下降的体积（mL），即为小鼠的总耗氧量（A）。解剖生理盐水组小鼠尸体，将肝、肺置于滤纸上，观察并血液和脏器颜色。根据总耗氧量、存活时间、鼠体重三项指标，按以下公式计算：RmL/（gmin）=A（mL）/W（g）T（min）2.2CO和乏氧模型取 2 只相同体重相近的小鼠随机分为乏氧性缺氧组和一氧化碳组。乏氧性缺氧组小鼠放入含有 5g 钠石灰的 100ml 密闭瓶中；一氧化碳组小鼠放入 500ml 密闭瓶，注入 10ml CO 气体。注入 CO 或放入钠石灰的小鼠的时间。解剖小鼠尸体肝和血液颜色变化。2.3 亚硝酸钠取

6、相同、体重相近的小鼠 2 只，随机分为亚硝酸钠组和亚硝酸钠加亚甲蓝组。观察皮肤黏膜颜色。2 只小鼠分别腹腔注射 0.2mL 亚硝酸钠。亚硝酸钠加亚甲蓝组小鼠在注射亚硝酸钠后立即注射 0.2mL 亚甲蓝，亚硝酸钠组小鼠在注射亚硝酸钠后注射生理盐水0.2mL。小鼠表现、皮肤黏膜颜色变化及时间。解剖小鼠尸体，肝脏和血液颜色变化。2.4 统计方法小鼠存活时间及耗氧率以XS 表示，统计学分析采用 t 检验。小鼠存活率用百分率表示，统计学分析用卡方检验。结果氯丙嗪加冰浴对小鼠耐氧性的影响氯丙嗪加冰浴组小鼠的存活时间 43.012.9min 明显大于对照组小鼠存活时间15.33.6min，两者存在高度显著性

7、差异（p0.01）。氯丙嗪加冰组和对照组小鼠的总耗氧量分别为 17.64.9mL 和 18.23.5mL。氯丙嗪加冰浴组小鼠的总耗氧率为 5.000.89%，对照组小鼠的总耗氧率为 1.940.46%，两者间存在高度显著性差异（p0.01）。见表 1。3.2 亚硝酸钠及美兰的治疗效果亚硝酸钠组小鼠的存活时间为 8.82.6min，明显小于亚硝酸钠加美兰组小鼠的存活时间 15.15.2min，两者间存在高度显著性差异（p0.01）。3.3 乏氧、CO、亚硝酸钠小鼠的呼吸频率乏氧型缺氧小鼠于 5min，且随着氧总量的减少小鼠呼吸频率加快；CO小鼠在 12min 时，随着 CO程度的加深，呼吸频率呈

8、增高态势；NaNO2小鼠在 12min时，随注射NaNO2 后时间的推移，呼吸频率逐渐加快；而用美兰解毒的小鼠，存活时间为 24min，且呼吸频率先加快后减慢。3.4 不同原因缺氧小鼠皮肤及肝脏颜色的特征变化乏氧型缺氧耳、尾、口唇颜色青紫色，肝血颜色色。CO耳、尾、口唇颜色和肝血颜色均为樱桃红色。NaNO2耳、尾、口唇颜色为青石板色，肝血颜色为深咖啡色。NaNO2+美兰组耳、尾、口唇颜色为稍浅的青石板色，肝血颜色为浅咖啡色。4.4.1 中枢神经系统功能抑制和低温对缺氧的影响中枢神经系统功能抑制和低温可以提高小鼠的耐氧性。氯丙嗪为吩噻嗪类抗药物，对中枢神经系统有抑制作用，起到安定效果。它阻断 D

9、A 受体、5-HT 受体、M 胆碱手头、肾上腺素受体，因此作用广泛，副作用也多。小鼠注射氯丙嗪后，能明显减少自发活动，配合物理降温（冰浴、冰袋）可诱使其进入假冬眠状态。此时，小鼠体温降低、基础代谢及组织耗氧量减少，增强了小鼠对缺氧的耐受力。因此，在氧总量相等的条件下，氯丙嗪加冰浴组小鼠的存活时间长于生理盐水组。4.2 不同原因造成的缺氧缺氧是指当供应组织的氧，或组织利用氧时，机体的机能和代谢发生异常变化的病理过程。缺氧时多种疾病共有的病理过程。根据缺氧的原因不同可将缺氧分为乏氧性缺氧，血液性缺氧，循环性缺氧和组织缺氧四种类型。不同类型的缺氧，其机体的代偿适应性反应和症状表现有所不同。乏氧性缺氧

10、，主要特征是动脉血氧分压降低，动脉血氧含量的血液中脱氧血红蛋白浓度约为 2.6g/dl。乏氧性缺氧降低，组织供氧。正常毛细时，动静脉血中的脱氧血红蛋白浓度增高。当毛细血液中脱氧血红蛋白浓度达到或超过5g/dl 时，皮肤和粘膜呈青紫色，即为发绀。4.3COCO时，可引起血液性缺氧。CO 与血红蛋白结合形成碳氧血红蛋白，由于 CO 与血红蛋白的亲和力比氧与血红蛋白的亲和力高 210 倍，当吸入气中含 0.1的 CO 时，血液中有 50%的血红蛋白成为碳氧血红蛋白而失去携氧能力。同时，CO 还可抑制红细胞的糖酵解，使 2，3二磷酸甘油酸生成减少，氧离曲线左移，HbO2 中的氧气不易，从而加重组织缺氧

11、。当血液中的 HbCO 增加至 1020%时，动物可出现头痛、乏力、眩晕、等症状；增至 50%时，可迅速出现痉挛、呼吸、，甚至。此时，由于动物动脉血氧分压不降低，而含过多的HbCO，故其皮肤、粘膜呈樱桃红色。4.4 亚硝酸盐正常时，血红蛋白中的铁主要以二价铁的形式存在，亚硝酸盐作为氧化剂可使血红素中的二价铁氧化成三价铁，形成高铁血红蛋白，导致高铁血红蛋白血症。高铁血红蛋白中的三价铁因与羟基结合牢固而失去结合氧的能力，或者血红蛋白分子中的四个二价铁中有部分氧化成三价铁，剩余的二价铁虽能结合氧，但不易解离，导致氧离曲线左移，使组织缺氧。亚硝酸盐等氧化剂时，如高铁血红蛋白含量超过血红蛋白总量的 10

12、，就可出现缺氧表现；严重时，皮肤和粘膜可出现青紫色。低浓度美蓝是一种还原剂，可抑制氧化剂所产生的反应。5.参考文献1药理学 人民卫生2011 150151.2、生理科学实验浙江大学2012 225227.附录：表 1.氯丙嗪、冰浴对小鼠耐氧性的影响小鼠体重（g）存活时间（min）总耗氧量（mL）总耗氧率（%）样本对照组实验组对照组实验组对照组实验组对照组实验组12323175921215.371.5522223173519.121.25.102.6332222164519195.401.9242424124818.5176.421.4852222195720.5164.901.2862324174016184.091.8872222165219225.401.92822227195.110.63.252.349242416.532.220195.052.4622.670 22.890 15.33. 43.012 17.64.18.23.xs5.000.891.940.46#.87.936.9*95P(t-test)/1.22446E-05/9.76152E-08注：*p0.01 vs对照组。表 2 亚硝酸钠和美兰解毒的效果注：第 1 组实验数据废弃表 3.乏氧、CO