血尿分泌物培训

1、血液常规规检查的的基础知知识一、红细细胞（RRBC）计计数意义义红细胞增增多见于于：（1）血血液中红红细胞绝绝对值增增多，见见于真性性红细胞胞增多症症；（2）机机体长期期缺氧，如如慢性肺肺源性心心脏病、发绀性性先天性性心脏病病引起继继发性红红细胞增增多；（3）因因一时性性血浆中中水分丢丢失过多多、血液液浓缩，如如剧烈吐吐泻、脱脱水、烧烧伤引起起相对性性红细胞胞增多。红细胞减减少见于于各种原原因引起起的贫血血，如骨骨髓造血血功能障障碍，造造血原料料缺乏，红红细胞破破坏过多多、过早早等。二、血红红蛋白（HHb）测测定意义义其增减减的意义义大致与与红细胞胞增减相相似，但但在各种种不同类类型贫血血时，

2、红红细胞数数与血红红蛋白量量的减低低不一定定呈平行行关系。如小红红细胞性性贫血时时，血红红蛋白含含量比红红细胞数数减少更更为明显显；在大大红细胞胞性贫血血时，则则红细胞胞减少的的程度较较血红蛋蛋白减少少更为严严重。三、红细细胞形态态学检查查红细胞大大小异常常包括：1.小红红细胞，直直径小于于6m，厚厚度薄，常常见于缺缺铁性贫贫血。2.大红红细胞，直直径大于于10m，体体积大，常常见于维维生素BB12或或叶酸缺缺乏引起起的巨幼幼红细胞胞性贫血血。3.红细细胞大小小不均，大大小相差差1倍以以上，常常见于各各种增生生性贫血血，但不不见于再再生障碍碍性贫血血。红细胞形形态异常常包括：1.球形形红细胞胞

3、，直径径缩小，厚厚度增加加，常见见于遗传传性球形形红细胞胞增多症症、自身身免疫性性溶血性性贫血。2.靶形形红细胞胞，呈靶靶形，主主要见于于珠蛋白白生成障障碍性贫贫血、某某些血红红蛋白病病、脾切切除术后后等3.椭圆圆形红细细胞，长长径增大大，横径径缩小，呈呈椭圆形形，见于于遗传性性椭圆形形细胞增增多症，也也可见于于巨幼红红细胞性性贫血。4.镰形形红细胞胞，如镰镰刀形、柳叶状状等，主主要见于于镰形红红细胞性性贫血。5.红细细胞缗线线状形成成，呈平平行叠串串状排列列，见于于骨髓瘤瘤、高球球蛋白血血症、高高纤维蛋蛋白血症症等。红细胞染染色异常常，红细细胞染色色深浅反反映着血血红蛋白白含量，包包括：1.

4、低色色素性，红红细胞内内含血红红蛋白减减少，见见于缺铁铁性贫血血及其他他低色素素性贫血血。2.高色色素性，红红细胞内内含血红红蛋白较较多，多多见于巨巨幼红细细胞性贫贫血。3.嗜多多色性，是是未完全全成熟的的红细胞胞，呈灰灰蓝色，体体积稍大大，见于于骨髓造造红细胞胞功能旺旺盛的增增生性贫贫血。红细胞结结构异常常包括：1.嗜碱碱性点彩彩，见于于重金属属（铅、铋、银银等）中中毒，硝硝基苯、苯胺等等中毒及及溶血性性贫血、恶性肿肿瘤等。2.卡卡波（CCaboot）环环，可能能是幼红红细胞核核膜的残残余物，见见于溶血血性贫血血、某些些增生性性贫血。3.何-乔（HHoweell-Jollly）小小体，可可能

5、是细细胞核的的残余物物，见于于巨幼红红细胞性性贫血、溶血性性贫血及及脾切除除术后。四、白细细胞（WWBC）计计数意义义白细胞增增多见于于：急性感感染：包包括化脓脓菌感染染、杆菌菌感染引引起肾孟孟肾炎、胆囊炎炎等，病病毒感染染引起传传染性单单核细胞胞增多症症、乙型型脑炎等等，寄生生虫感染染引起急急性血吸吸虫病，螺螺旋体病病引起的的钩端螺螺旋体病病等，重重度感染染时可引引起白细细胞总数数显著增增高并可可出现明明显核左左移。严重烧烧伤、较较大手术术后、心心肌梗死死等引起起的组织织损伤、坏死。数量极极度增高高时，见见于恶性性肿瘤、白血病病，尤其其是慢性性白血病病。见于急急性失血血，尤其其是内脏脏破裂、

6、宫外孕孕等引起起的内出出血。见于急急性化学学药物有有机磷中中毒，也也见于糖糖尿病酮酮症酸中中毒、尿尿毒症等等引起的的代谢性性中毒。白细胞总总数减少少见于：革兰阴阴性杆菌菌感染，如如伤寒、副伤寒寒沙门菌菌，病毒毒感染，如如流感、病毒性性肝炎，寄寄生虫感感染，如如疟疾等等。某些血血液病，如如再生障障碍性贫贫血、粒粒细胞缺缺乏症、白细胞胞不增多多型白血血病等。自身免免疫性疾疾病，如如系统性性红斑狼狼疮、免免疫抗体体导致的的白细胞胞减少。理化损损伤及药药物反应应，如苯苯及其衍衍生物引引起的放放射线损损伤、化化学品中中毒，如如氯霉素素、保泰泰松、抗抗癌药等等引起的的各种反反应。其他，如如肝硬化化、脾功功

7、能亢进进等。五、白细细胞分类类（DCC）意义义中性粒细细胞（NN）总数数的增多多或减少少的临床床意义与与白细胞胞相似。嗜酸性性粒细胞胞（E）增增多见于于：过敏性性变态反反应，如如支气管管哮喘、药物性性皮疹、血管神神经性水水肿、血血清病等等。寄生虫虫病，如如肠道寄寄生虫钩钩虫、蛔蛔虫等。某些皮皮肤病，如如湿疹、天疱疮疮、剥脱脱性皮炎炎等。急性传传染病恢恢复时，一一般在常常起病时时细胞数数减少，当当开始恢恢复时可可呈现增增多，提提示病情情好转。某些血血液病及及恶性肿肿瘤，如如慢性粒粒细胞性性白血病病、淋巴巴瘤、肺肺癌等。嗜酸性性粒细胞胞减少见见于：当肾上上皮质功功能亢进进或应用用肾上腺腺皮质激激素

8、治疗疗时。急性发发热性传传染病，尤尤其在伤伤寒、副副伤寒、严重烧烧伤、大大手术后后。嗜碱性粒粒细胞（B）增增多见于于：某些血血液病如如慢性粒粒细胞性性白血病病、红细细胞增多多症；脾切除除术后、疫苗预预防注射射后等。嗜碱性性粒细胞胞减少一一般无临临床意义义。1.淋巴巴细胞（LL）增多多见于：初生婴婴儿、儿儿童的生生理性增增多；某些血血液病如如再生障障碍性贫贫血、粒粒细胞减减少症可可引起淋淋巴细胞胞相对性性增多；某些感感染，如如病毒感感染性疾疾病、细细菌性感感染如百百日咳、慢性感感染如结结核病的的恢复期期；急、慢慢性淋巴巴细胞性性白血病病。2.淋巴巴细胞减减少大多多是相对对性减少少，或见见于长期期

9、接触放放射线或或应用肾肾上腺皮皮质激素素治疗后后。单核细胞胞（M）增增多见于于：某些感感染如结结核病活活动期，亚亚急性细细菌性心心内膜炎炎、疟疾疾等；某些血血液病，如如淋巴瘤瘤、高雪雪病、单单核细胞胞性白血血病且可可出现原原、幼单单核细胞胞。单核核细胞减减少一般般无特殊殊临床意意义。六、白细细胞的常常见形态态变化中性粒细细胞的核核象变化化包括：核左移移，常见见于感染染，尤以以急性化化脓性感感染最常常见，其其他如急急性中毒毒、急性性溶血时时也可出出现。核右移移，主要要见于营营养性巨巨幼红细细胞性贫贫血、使使用抗代代谢药物物治疗后后、感染染恢复期期等。中性粒细细胞的形形态异常常包括：中毒颗颗粒：常

10、常见于严严重的化化脓性感感染、大大面积烧烧伤等。空泡变变性：常常见于严严重感染染，特别别是败血血症，因因粒细胞胞受损发发生脂肪肪变性所所致。核变性性，临床床意义同同空泡变变性。棒状小小体，仅仅见于白白血病细细胞中，但但在急性性淋巴细细胞白血血病则不不出现棒棒状小体体。淋巴细胞胞形态变变异根据据形态特特点分为为3型：型（空空泡型）、型（不不规则型型）、型（幼幼稚型）。除以上上3型外外，尚可可有呈浆浆细胞样样或组织织细胞样样的异形形淋巴细细胞，见见于：病毒感感染性疾疾病；某些细细菌性感感染，原原虫、螺螺旋体感感染；某些免免疫性疾疾病、药药物过敏敏等。七、血小小板计数数意义血小板减减少见于于：血小板

11、板生成减减少，如如再生障障碍性贫贫血、急急性白血血病、骨骨髓纤维维化、放放射线损损伤；血小板板破坏过过多，如如免疫性性血小板板减少性性紫癜、过敏性性药物损损伤；血小板板消耗过过多，如如弥散性性血管内内凝血、血栓性性血小板板减少性性紫癜；血小板板分布异异常，如如脾肿大大、输入入大量血血浆血液液受稀释释等。血小板增增多见于于：急性大大失血和和溶血后后可呈反反应性增增多；骨髓增增生病，如如原发性性血小板板增多症症、慢性性粒细胞胞性白血血病、真真性红细细胞增多多症等。血小板学学形态检检查正常常血小板板呈圆形形或椭圆圆形，直直径24m，含含嗜天青青颗粒。功能正正常的血血小板多多数个成成簇聚集集，若呈呈单

12、个分分散分布布提示血血小板功功能不良良。幼稚稚血小板板体积大大，胞质质蓝色加加深。当当血小板板异常增增生时，呈呈大小不不等，形形态异常常。血常规检检验中的的注意事事项血细胞检检验是指指对血液液中白细细胞（WWBC）、红细胞胞（RBBC）、血小板板（PLLT）、血红蛋蛋白（HHGB）及及相关数数据的计计数检测测分析，也也称血常常规检验验。血常常规检验验不仅是是诊断各各种血液液病的主主要依据据，而且且对其它它系统疾疾病的诊诊断和鉴鉴别也可可提供许许多重要要信息，是是临床医医学检验验中最常常用、最最重要的的基本内内容之一一。血常常规检验验的最原原始的手手段是通通过显微微镜人工工镜检，随随着基础础医学

13、的的发展，高高科学技技术的应应用，血血液细胞胞分析仪仪已成为为取代镜镜检进行行血常规规分析的的重要手手段，尤尤其是带带分类的的血液分分析仪。无论是镜镜检、还还是使用用血液分分析仪，要要获得血血常规检检验的稳稳定可靠靠、准确确的数据据，防止止临床诊诊疗人出出错误的的判断，实实验室检检验要充充分考虑虑影响血血常规检检验中的的多种影影响因素素，并严严格加以以控制：一标本本的采集集为了取得得准确、可靠的的检验结结果，必必须取得得高质量量的标本本。高质质量的标标本是高高质量检检验的第第一步。保证血血液标本本中各项项细胞的的完整形形态是作作为血常常规检验验用的高高质量的的标本的的最基本本的要求求。血液液细

14、胞检检验标本本的制备备分为采采集和抗抗凝2个个步骤。1标本本的采集集按采血部部位的不不同，取取得血常常规检验验标本，最最常用的的途径是是静脉采采血和末末梢毛细细血管采采血。各各类文献献均表明明，静脉脉血血样样是最可可靠的标标本，手手指血是是末梢毛毛细血管管血样中中与静脉脉血差异异最小且且较为稳稳定的血血样。有有研究表表明，与与静脉血血相比，手手指血的的准确性性和可重重复性仍仍然较差差：白细细胞计数数明显高高（+88%）而而血小板板计数明明显低（-9%）。因此，绝绝大多数数专家建建议：血血常规检检验特别别是应用用血液分分析仪时时，应使使用静脉脉血。2标本本的抗凝凝用于血常常规检验验的血样样必须经

15、经抗凝剂剂抗凝处处理，在在目前的的众多抗抗凝剂中中，EDDTA盐盐（EDDTA-Na22,EDDTA-K2,EDTTA-KK3）是是对白细细胞形态态和血小小板影响响相对较较小的抗抗凝剂，最最适合用用于血常常规检验验。除采采血因素素的影响响（生理理性因素素、采血血部位等等）外，多多数情况况下，血血样的质质量取决决于血液液和抗凝凝剂的比比例。血血液比例例过高时时，由于于抗凝剂剂相对不不足，血血浆中出出现微凝凝血块的的可能性性增加，在在用于血血细胞分分析仪时时，微凝凝血块可可能阻塞塞仪器，同同时影响响一些检检验指标标。血液液比例过过低，抗抗凝剂相相对过剩剩，对检检验指标标会造成成严重影影响。血血液经

16、EEDTAA抗凝后后，白细细胞的形形态会发发生改变变，这种种改变和和时间及及EDTTA浓度度有关。EDTTA的最最佳浓度度（与血血液比）为为1.55mg/ml,如果血血样少，EEDTAA的浓度度达到22.5mmg/mml，中中性粒细细胞肿胀胀、分叶叶消失，血血小板肿肿胀、崩崩解、产产生正常常血小板板大小的的碎片，这这些改变变都会使使血常规规检验和和血细胞胞计数得得出错误误结果。这一点点在用自自动血细细胞分析析仪时尤尤为重要要。静脉血和和末梢血血均可经经抗凝剂剂抗凝成成全血标标本（标标本中不不含稀释释液，或或对标本本造成的的稀释的的影响极极小），显显而易见见，末梢梢血抗凝凝标本要要达到合合适的血

17、血液和抗抗凝剂的的比例是是非常困困难的。因此，多多数专家家建议，在在制备全全血比例例是非常常困难的的。因此此，多数数专家建建议，在在制备全全血标本本时，应应使用定定量的含含EDTTA盐的的真空采采血管采采集静脉脉血。无论镜检检，或是是使用血血液细胞胞分析仪仪，由于于绝大多多数的对对标本稀稀释的稀稀释液中中含有抗抗凝剂，在在一定量量的稀释释液中可可直接加加入微量量静脉血血或末梢梢血液（110-440l）即即可制备备成通常常所说的的预稀释释标本。多数情情况下，预预稀释标标本的制制备适用用于末梢梢血的血血样。二标本本的稀释释血液是由由血细胞胞和血浆浆两部分分组成的的红色粘粘稠混悬悬液。在在进行血血细

18、胞检检验计数数时，直直接用血血液计数数是困难难的，无无论是镜镜检还是是用血细细胞分析析仪，血血液均需需合适准准确的稀稀释后才才能进行行血细胞胞的检验验计数。基于血血细胞分分析仪的的基本原原理，在在血细胞胞分析仪仪的设计计应用中中，稀释释倍数和和计数容容量是最最重要的的设计指指标之一一。自50年年代初，美美国库尔尔特先生生研制了了电阻法法（小孔孔原理）血血细胞分分析仪以以来，血血细胞的的稀释液液为介质质的流动动的形式式通过传传感器测测量计数数（如图图-1），血血细胞通通过传感感器时一一定需要要排队通通过，否否则可能能就会造造成重合合损失（如如图-22）。实际应用用时，是是将血液液稀释于于稀释液液

19、中形成成稀释标标本（稀稀释比为为1：NN），以以流动检检测的方方式测出出一定量量（V）的的稀释标标本内的的血细胞胞数（TT），经经换算后后得出血血液中的的细胞浓浓度（LL）：LL-TN/VV。由此可见见，准确确合理的的稀释倍倍数（在在用于仪仪器时，RRBC、PLTT的稀释释倍数一一般为11：1000000至1：30000；WWBC、HGBB的稀释释倍数一一般为11：2550左右右）和准准确、稳稳定的测测量容量量是血细细胞检测测的又一一重要基基础。稀稀释倍数数过低，会会形成细细胞排队队通过传传感器的的重合缺缺损；稀稀释倍数数过大，则则会造成成一定测测量容量量内血细细胞的数数量过少少，这都都会严重

20、重影响血血液细胞胞检验的的测量精精度。三标本本的储存存如前文所所述，抗抗凝剂因因时间和和浓度的的不同，会会造成对对血细胞胞形态的的影响。有研究究表明，用用EDTTA抗凝凝静脉血血标本，在在标本收收集后的的5分钟钟内或330分钟钟后，88小时内内（室温温）检测测，可以以得到最最佳的检检测结果果。如果果不需要要血小板板和白细细胞分类类的准确确数据，则则标本可可以在22-8的条件件下存入入至244小时。预稀释标标本一般般需要在在标本制制备后110分钟钟内予以以测量；如果稀稀释液中中添加细细胞稳定定剂，预预稀释标标本的存存放时间间也不可可超过44小时。总之，影影响血常常规检验验结果的的因素很很多，要要

21、想取得得准确的的检验数数据，就就要在实实验的每每一个步步骤中都都严格按按照操作作规程进进行。血液标本本的采集集及运送送是保证证结果的的重要环环节血液标本本的采集集及运送送是保证证结果的的重要环环节，正正确的血血液常规规标本的的采集、接收及及保存，使使标本中中的待测测成分不不受影响响，保证证检测结结果准确确可靠。范围适适用于血血液白细细胞、红红细胞、血红蛋蛋白、血血小板、红细胞胞比积、红细胞胞体积分分布宽度度、平均均血红蛋蛋白含量量、平均均血红蛋蛋白浓度度、平均均红细胞胞体积、血小板板体积分分布宽度度、血小小板压积积、白细细胞分类类、嗜酸酸细胞计计数。采血时凡凡位于体体表的浅浅静脉均均可作为为采

22、血部部位，通通常采用用肘部静静脉，肘肘部静脉脉不明显显时，可可用手背背静脉或或内踝静静脉。幼幼儿可于于颈外静静脉采血血。采血血处应避避免有皮皮肤红肿肿、溃疡疡等现象象。采血血时如病病人检测测项目多多，应先先采常规规血，防防止血小小板发生生聚集。止血带带压迫时时间不能能过长，最最好不超超过0.5 mmin，以以避免瘀瘀血和血血液浓缩缩（有试试验证明明，压迫迫时间过过长，可可引起纤纤溶活性性增强，血血小板释释放及某某些因子子活性增增强，影影响某些些实验结结果）。最好采采用封闭闭式真空空采血器器，既有有利于标标本的收收集运送送和保存存，又便便于防止止血液交交叉感染染。抽血血时避免免产生大大量泡沫沫，

23、否则则可能导导致溶血血。溶血血标本会会造成红红细胞计计数降低低，红细细胞比积积降低。血液抽抽出后立立即轻轻轻摇动，使使血液和和抗凝剂剂混匀，以以防血液液凝固。血液检检查的标标本量与与抗凝剂剂比例要要合适。血液比比例过高高时，血血浆中容容易出现现微凝血血块，可可能阻塞塞血细胞胞分析仪仪，同时时影响一一些检验验结果。血液比比例过低低，抗凝凝剂相对对过剩，会会引起血血细胞形形态和体体积的一一些改变变，这些些改变会会使血常常规检验验得出错错误结果果。血液标本本的保存存与运送送。血常常规血液液标本采采集后应应立即送送检，如如不能及及时送检检或分析析，必须须采取保保存措施施，应在在48低温冰冰箱冷藏藏，但

24、低低温保存存不要超超过4 h，保保存条件件非常重重要，不不适当保保存直接接影响实实验结果果。标本本应由检检验人员员或临床床医护人人员采集集，住院院病人标标本应有有明确标标记，与与医师申申请单内内容相符符。标本本运送要要做到专专人专送送。血涂片的的制备将血标本本均匀地地涂抹在在清洁干干燥的载载玻片上上，经染染色后在在显微镜镜下检查查，这是是血细胞胞形态学学检查的的基本方方法，临临床应用用很广，特特别是对对各种血血液病的的形态学学诊断很很有价值值。但是是，如果果血徐片片制备不不良，染染色不佳佳，常使使血细胞胞的形态态学鉴别别和诊断断发生困困难，甚甚至导致致错误的的结论。如血膜膜过厚，细细胞重叠叠缩

25、小；血膜太太薄，白白细胞多多集中于于边缘。因此，制制备厚薄薄适宜、分布均均匀的血血涂片是是血液学学检验的的基本技技术之一一。一、载玻玻片的清清洁新载玻片片上常有有游离碱碱质，必必须用约约lmoolLL HCCI浸泡泡24hh后，再再用清水水彻底冲冲洗，干干燥备用用。用过过的载玻玻片可放放入含适适量肥皂皂或合成成洗涤剂剂的清水水中煮沸沸20mmin，再再用热水水将肥皂皂和血膜膜洗净，用用清水反反复冲洗洗，干燥燥备用。如急用用载玻片片，可将将其置00、9乙乙醇中浸浸泡lhh，用蒸蒸馏水洗洗净后，擦擦干或烘烘干备用用。使用用载玻片片时，只只能手持持玻片边边缘，切切勿用手手触及玻玻片表面面，以保保持玻

26、片片清洁、干燥、中性、无油腻腻。二、制作作血涂片片的标本本血涂片既既可由非非抗凝的的静脉血血和毛细细血管血血制备，也也可由EEDTAA抗凝血血制备。EDTTA抗凝凝血中，钙钙离子被被螫合后后，能阻阻止血小小板聚集集，推片片时血小小板均匀匀平铺，显显微镜下下易于对对血小板板进行观观察评价价。但有有时可观观察到因因EDTTA引起起的红细细胞皱缩缩及白细细胞丛集集现象。但随着着血液分分析仪的的逐步普普及，血血标本多多为EDDTA抗抗凝血，除除作全血血细细胞胞计数及及多参数数分析外外，制备备血涂片片也非常常方便，虽虽有上述述弊端，但但显微镜镜下易于于发现。三、血涂涂片的制制备血涂片的的制备方方法很多多

27、，如手手工推片片法、自自动推片片法、载载（盖）玻玻片压拉拉法、旋旋转涂片片法、棕棕黄层（bbufffyccoatt）涂片片法及厚厚血膜涂涂片法等等，现介介绍如下下。1、手工工推片法法取血标标本一滴滴置载玻玻片的一一端，以以边缘平平滑的推推片一端端，从血血滴前沿沿方向接接触血液液，使血血液沿推推片散开开，推片片与载玻玻片保持持2530oo的平面面夹角，平平稳地将将血向前前推动，血血液即在在载玻片片上形成成一薄层层血膜。将制成成的血膜膜在空气气中挥动动，使迅迅速干燥燥，以免免血细胞胞皱缩。一张良好好的涂片片，要求求厚薄适适宜，头头体尾分分明，边边缘整齐齐，两侧侧应留有有空隙。玻片的的一端应应留有贴

28、贴标签的的地方。涂片的的好坏与与血滴大大小、推推片与载载片之间间角度、推片时时的速度度有关。血滴大大、角度度大、速速度快，则则血膜厚厚；反之之则血膜膜薄。血血膜分布布不匀，主主要是推推片边缘缘不齐、用力不不匀或载载玻片不不清洁所所致。2、载玻玻片压拉拉法取两两张贴有有标签的的载玻片片备用，将将血液滴滴于一张张载玻片片的近中中央处，立立即将另另一载玻玻片于之之贴合，四四角对齐齐，标签签一端一一个，使使贴合后后的玻片片间留下下如标签签一样厚厚的间距距。先将将血滴沿沿纵向轻轻压展开开，再将将两玻片片横向均均匀拉开开，得到到两张血血膜。此此法最适适用于血血细胞的的活体染染色，预预先将染染料滴加加在玻片

29、片上，干干燥后备备用。涂涂制时先先将血液液与染料料混染一一段时间间，再按按上述方方法制成成血涂片片，显微微镜下检检查，如如网织红红细胞的的检验。3、旋转转器涂片片法旋转转涂片器器的基本本结构是是：在与与电动机机转轴垂垂直的方方向装一一水平转转盘，正正中夹置置载玻片片。徐制制时将血血标本滴滴加在载载玻片的的中央，开开动旋转转涂片机机，在规规定的时时间内即即可制备备一张良良好的血血涂片。对该仪仪器的要要求应具具有低惯惯性高转转矩，开开动时能能立即加加速（550000rmmin），关关机时能能迅速停停止（OO、255s内）。使用这这种仪器器涂片，白白细胞及及红细胞胞能均匀匀分布在在玻片上上，且形形态

30、保持持完好。4、棕黄黄层涂片片法为了了获得较较多的有有核细胞胞，使用用离心的的方法，将将EDTTA抗凝凝血作分分层离心心（RCCF22660g，55minn），取取红细胞胞层上的的棕黄层层（有核核细胞和和血小板板集中层层，）作作标本，用用手工推推制成涂涂片供检检查用。5、厚血血膜涂片片法从指指尖或耳耳垂取血血1滴（约约20uul）于于载玻片片中央，用用推片的的一角将将血由内内向外旋旋转涂布布，制成成厚薄均均匀、直直径约11、5ccm的圆圆形血膜膜，自然然干燥后后，滴加加数滴蒸蒸馏水，使使红细胞胞溶解，脱脱去血红红蛋白。倾去水水后血膜膜呈灰白白色，干干后染色色镜检。厚血膜膜片因取取血量多多，待检

31、检成分较较集中，因因此特别别适合于于疟原虫虫、丝虫虫的微丝丝蚴等的的检查。血细胞常常用的染染色方法法细胞涂片片，在用用普通光光学显微微镜观察察之前需需要固定定和染色色。固定定是将细细胞蛋白白质和多多糖等成成分迅速速交联凝凝固，以以保持其其原有结结构不发发生变化化。染色色的目的的是使细细胞的主主要结构构，如细细胞质、细胞核核、细胞胞器等染染上不同同的颜色色，便于于显微镜镜下观察察。各种种细胞涂涂片，常常用的染染色方法法有瑞氏氏（Wrrighht）、姬姆萨萨（Giiemssa）、巴氏（PPaPaaniccolaaou）和和苏木素素一伊红红比emmat00Xyllin eossin，HHE）染染色。

32、一、染料料与染色色染料（ddyess）是一一种具有有颜色的的有机化化合物，最最早用于于织物的的着色。随着生生物医学学的不断断发展，显显微镜技技术的出出现和逐逐步完善善，科学学家们用用染料将将生物组组织细胞胞和病原原体着色色，以利利在显微微镜下观观察各种种结构，这这种染料料称为生生物学染染色剂（bbiollogyy sttainns，BBS），生生物染色色剂的发发现和利利用促进进了医学学生物学学的进一一步发展展。（一）细细胞学的的基本染染料染料可分分为两大大类，即即天然染染料和人人工合成成染料。生物染染色剂多多属于后后者。各各种生物物学染色色剂都具具有产生生颜色和和与被染染组织亲亲合两种种性质。

33、这两种种性质主主要由两两种特殊殊基团即即发色基基团（cchroomopphorro）和和助色基基团（aauxoochrromee）所产产生。所谓发色色基团，是是染料产产生颜色色标志的的未饱和和基团。不同的的有机化化合物可可以吸收收不同波波长的光光，如吸吸收可见见光区以以外的光光，这些些物质是是无色的的；如吸吸收可见见光区内内某些波波长的光光，这些些物质是是有色的的，其肉肉眼可见见的颜色色为被吸吸收光颜颜色的互互补色。一般饱饱和芳香香族化合合物很少少有可见见光区的的吸收带带，因而而无颜色色可见。相反，如如苯的衍衍生物则则具有此此吸收带带而呈现现颜色。这些化化合物显显示的吸吸收带与与不稳定定价键（

34、如如键）有有关。对对苯二酚酚是无色色的，但但氧化失失去两个个氢原子子时变为为具黄色色的对醌醌式结构构，这种种使有机机化合物物在可见见光区内内产生光光吸收的的基团称称为发色色基团，常常见的发发色基团团有烯基基、炔基基、羰基基、偶氮氮基、亚亚硝基等等。助色色基团是是一种能能使化合合物发生生电离作作用的辅辅助原子子团，能能与发色色基团构构成更完完整的共共轭体系系，使分分子激发发能进一一步降低低，染料料的色泽泽加深并并使其与与被染组组织更具具亲合力力，染料料的助色色基团是是使染料料成为盐盐类的部部分，助助色基团团的性质质决定染染料在水水溶液中中的荷电电性，常常见的助助色基团团有羟基基、竣基基、氨基基等

35、。根根据助色色基团的的性质，将将生物学学染色剂剂分成碱碱性染料料和酸性性染料两两大类，即即能接受受质子者者为碱性性染料，能能释放质质子者为为酸性染染料。1、碱性性染料（bbasiic ddyess）属苯苯胺类蓝蓝色染料料，如噻噻嗪（tthiaazinns）系系列，包包括亚甲甲蓝（mmethhyleene bluue）、天青AA（azzureeA）、天青BB（azzuree B）、天青CC（azzuree C）和和硫堇（tthiooninne），它它们的区区别在于于结合甲甲基的数数量。以以天青BB为例，它它含有两两个发色色基团，一一个次氨氨基（N一）和和一个邻邻醌式基基团。助助色基团团为氨基基（

36、一NNH2），结结合一个个质子后后荷正电电，亦称称阳离子子染料。因此，这这些染料料与细胞胞内的酸酸性成分分，如DDNA、RNAA、特异异的中性性颗粒基基质、某某些胞浆浆蛋白等等结合，主主要是染染细胞核核的染料料。还有有一个很很重要染染核染料料是苏木木（heemattoxyylinne），属属媒染料料（moordaant dyees），需需媒染剂剂（如AAl3+）参与与才能使使细胞核核着色。2、酸性性染料（aacidd dyyes）细细胞学较较重要的的酸性染染料有两两大类，即即荧烷一一氧杂蒽蒽染料（hhoraanexanntheene dyees）和和偶氮染染料（aazoddyess）。前前者是

37、一一类以氧氧杂蒽和和醌式苯苯环作为为发色基基团，以以羧基（COOOH）为为助色基基团的染染料，因因为羧基基能提供供一个质质子，亦亦称“阴离子子染料”。这类类染料的的代表是是伊红YY（eoosinn Y，俗俗称黄色色伊红）和和伊红BB（eoosinn B，俗俗称蓝色色伊红）。这两种种染料特特别适于于与噻嗪嗪类染料料（亚甲甲蓝，天天青B等等）作对对比染色色，形成成红蓝分分明、色色泽艳丽丽的结果果，因为为伊红具具较强的的扩散吸吸附染色色特性。酸性偶偶氮类染染料有橙橙黄G（oorannge G）、刚果红红（coongoo reed）、亮藏花花精（bbrillliaant crooceiin）等等。由于

38、于酸性染染料是阴阴离子型型染料，因因此它们们与细胞胞中的碱碱性成分分结合并并染色，如如血红蛋蛋白、嗜嗜酸性颗颗粒成分分及胞浆浆中的一一些蛋白白质。除上述酸酸性和碱碱性染料料外，有有的还将将在同一一条件下下既具阴阴离子型型又有阳阳离子型型的染色色剂称复复合染料料，如瑞瑞氏染色色剂、姬姬姆萨染染色剂等等。（二）染染色原理理细胞着色色的原理理至今虽虽无满意意的解释释，但多多数学者者认为是是物理作作用和化化学作用用综合的的结果。1、物理理作用包括毛细细管现象象和渗透透、吸收收、吸附附作用等等。通过过这些因因素，染染料的色色素粒子子就能顺顺利地进进入组织织、细胞胞并与其其牢固结结合而着着色。瑞氏染色色法

39、Wrfeeht和和Gieemsaa都于119022年报告告了各自自的新的的血液学学染色剂剂，其主主要特点点是在制制备多色色性亚甲甲蓝（主主要指天天青B）方方面做了了改进，使使血细胞胞和疟原原虫着色色较好，操操作简便便。上述染色色法均是是含伊红红和亚甲甲基蓝衍衍生物的的复合染染料。在在临床检检验工作作中，瑞瑞氏染色色法常用用于血液液、其他他体液、分泌物物和排泄泄物涂片片中各种种细胞的的染色，有有利于在在显微镜镜下观察察细胞形形态及对对细胞进进行分类类检查。【染色原原理】瑞氏染色色分两相相进行，第第一相是是酸性染染料伊红红与细胞胞中的碱碱性物质质如血红红蛋白、嗜酸性性颗粒等等结合；碱性染染料天青青

40、B与细细胞中的的酸性物物质如核核染色质质（chhromattin）、特异中中性颗粒粒、血小小板及富富含核蛋蛋白的胞胞质结合合。第二二相是天天青B和和伊红在在适宜条条件下形形成紫色色的天青青B一伊伊红复合合物（aazurre BBeoosinn coompllex），这这种复合合物是形形成RoomannowsskyGieemsaa效应的的基础。RomaanowwskyyGiiemssa效应应包括：白细胞胞核染色色质染成成紫色，疟疟原虫的的染色质质染成红红色；中性粒粒细胞的的颗粒及及血小板板颗粒区区染成紫紫色；产生本本效应必必须有两两种染料料参与，一一种是天天青B，另另一种是是伊红。Witttek

41、iind（119855）指出出，天青青B与DDNA分分子中的的磷酸基基结合，而而伊红既既与DNNA分子子中的阳阳离子部部位结合合，又与与天青BB结合，与与天青BB的结合合力来源源于电子子供一受受体的电电子转移移力，天天青B的的甲氨基基（NNHCHHs）与与伊红分分子中的的叛基（COOOH）间间形成氢氢键。因因此，天天青B是是噻嗪类类染料中中能与伊伊红形成成复合物物的最佳佳选择，因因为拥有有四个甲甲基侧链链的亚甲甲蓝不能能以氢键键与伊红红结合。甲醇除作作为染料料的溶剂剂，能将将瑞氏染染料解离离成带正正电荷的的天青BB和带负负电荷伊伊红外，因因其具有有脱水力力，还可可将细胞胞固定为为一定形形态，并

42、并使蛋白白沉淀为为颗粒状状、网状状结构，增增加细胞胞与染料料的接触触表面，增增强染色色效果。细胞中的的各种有有机物质质（特别别是蛋白白质）、染料等等对环境境的州值值非常敏敏感。如如环境偏偏酸，氢氢离子增增多，降降低对碱碱性染料料的亲和和力；增增强伊红红着色，出出现异常常红染；相反，则则可出现现异常蓝蓝染。最最佳环境境应维持持在PHH值6 466、8。因此，必必须使用用缓冲溶溶液。【试剂】1、Wrrighht染液液瑞氏染染粉0.1g；甲醇660.00ml。将瑞氏染染料放入入清洁干干燥乳钵钵里，加加少量甲甲醇，充充分研磨磨使染料料溶解，将将已溶解解的染料料倒入棕棕色试剂剂瓶中，未未溶解的的再加少少

43、量甲醇醇研磨，直直至染料料溶完，甲甲醇全部部用完为为止。或或将瑞氏氏染粉和和甲醇直直接置于于棕色瓶瓶中，加加碎玻璃璃适量，立立即用力力振荡ssminn，置室室温中，连连续3天天，每天天振摇223次次，促其其溶解。配好后后放室温温，一周周后即可可使用。新配染染液效果果差，放放置时间间越长天天青B越越多，染染色效果果越好。久置应应密封，以以免甲醇醇挥发或或氧化成成甲酸，甲甲醇需用用AR级级。上述述量染液液中也可可加中性性甘油33ml，除除可防止止染色中中甲醇过过早挥发发外，并并可使细细胞着色色清晰。1、磷酸酸盐缓冲冲液（PPBS，ppH6.466.8）磷酸二氢氢钾（无无水）00.3gg；磷酸氢二二

44、钠（无无水）00.2gg；蒸馏水加加至10000mml。配好后用用磷酸盐盐溶液校校正pHH，塞紧紧瓶口备备用。【染色方方法】（1）用用蜡笔在在血膜两两头划线线，然后后将血片片平放在在染色架架上；（2）加加瑞氏染染液数滴滴，覆盖盖整个血血膜，固固定细胞胞约lmmin；（3）滴滴加等量量或稍多多的缓冲冲液，与与染液充充分混匀匀，染色色5110miin；（4）用用清水冲冲去染液液，待干干后镜检检。【染色结结果】在在正常情情况下，血血膜外观观染成淡淡紫红色色。显微微镜下，红红细胞呈呈粉红色色，在厚厚薄均匀匀处，略略有碟状状感；白白细胞浆浆中颗粒粒清楚，并并显示出出各种细细胞特有有的色彩彩。细胞胞核染紫

45、紫红色，核核染色质质结构清清楚。染色偏酸酸，则红红细胞和和嗜酸性性粒细胞胞颗粒偏偏红，白白细胞核核呈淡蓝蓝色或不不着色。染色偏偏碱，则则所有细细胞呈灰灰蓝色，颗颗粒深暗暗。嗜酸酸性颗粒粒可染成成暗褐色色，甚至至紫黑或或蓝色。中性颗颗粒偏粗粗、偏碱碱，染成成紫黑色色，血膜膜厚的部部位呈绿绿色。【注意事事项】1、未干干透血膜膜的不能能立即染染色，否否则染色色时易脱脱落。2、染色色时间，与与染液浓浓度、室室温及细细胞多少少有关。梁液淡淡、室温温低、细细胞多，则则染色时时间长；反之则则可减少少染色时时间。染染液浓淡淡及染色色时间长长短要摸摸索，特特别是更更换染液液时更应应如此。3、染液液不能过过少，以

46、以防蒸发发沉淀，一一旦染液液沉淀在在血膜上上，则不不易冲掉掉。4、冲洗洗时不能能先倒掉掉染液，应应以流水水冲去，以以防染料料沉着在在血膜上上。冲洗洗染料时时间不能能过长，以以防脱色色。冲洗洗完的血血片应立立放于架架上，防防止剩余余水分浸浸泡脱色色。5、如血血膜上有有染料颗颗粒沉积积，可用用甲醇溶溶解，但但需立即即用水冲冲掉甲醇醇，以免免脱色。6、染色色过谈，可可以复染染，复架架时应先先加缓冲冲液，创创造良好好染色环环境，而而后加染染液，或或加染液液与缓冲冲液的混混合液，不不可先加加染液。7、染色色过深可可用水冲冲洗或浸浸泡一定定时间，也也可用甲甲醇脱色色。8、染色色偏酸或或偏碱时时，均应应更换

47、缓缓冲液再再重染。白细胞计计数的误误差因素素分析技术误误差：器器材、标标本要求求、加盖盖玻片影影响、冲冲池影响响、计数数原则（记记上不计计下，记记左不记记右）、计数室室内细胞胞分布要要均匀、有核红红细胞影影响。固有误误差：主主要指记记数域误误差。还还包括计计数池误误差和吸吸管误差差。生理状状态影响响：运动动、劳动动、冷水水浴、酷酷热、严严寒等出出现一过过性白细细胞增高高。1.技术术误差,可通过过规范、熟练的的操作,仪器的的校正、试剂的的标准化化和操作作人员责责任心的的增强而而减小或或消除(器材,标本要要求,加加盖玻片片影响,充池影影响,计计数原则则,细胞胞分布要要均匀,有核红红细胞影影响);2

48、.固有有误差,主要指指计数域域误差,即由于于每次充充池后血血细胞在在计数室室内分布布不可能能完全相相同所造造成的误误差,属属于偶然然误差.3.生生理状态态影响:运动,劳动冷冷热水浴浴,酷热热,严寒寒等常出出现一过过性白细细胞增高高;一日日之内白白细胞数数最高与与最低可可差1倍倍;吸烟烟者比非非吸烟者者高300%.血细胞分分析仪的的最新发发展血细胞分分析仪的的发展已已有500年历史史了，国国内医院院应用血血细胞分分析仪的的情况也也越来越越普及。近年来来由于综综合性高高科技的的飞速发发展，血血细胞分分析仪上上也不断断采用了了最新的的电子、光学、化学和和计算机机技术，从从而不断断满足临临床工作作对血

49、液液细胞分分析的要要求。提提供更加加方便适适用、更更多功能能和参数数、更加加准确、更快速速度的血血细胞分分析仪，已已经是各各血细胞胞分析仪仪生产厂厂商的目目标。一血细胞胞分析仪仪近年来来的发展展变化1.血常常规检验验多参数数化近年来许许多血细细胞分析析仪器都都在增加加新的参参数以满满足临床床在诊断断和鉴别别诊断方方面的需需求。最最初的血血细胞计计数仪(Celll CCounnterr)仅仅仅能够计计数红细细胞(RRBC)和白细细胞(WWBC)，后来来又有了了血红蛋蛋白(HHBG)、血小小板(PPLT)、红细细胞压积积(HCCT)、平均红红细胞体体积(MMCV)等几个个参数。而发展展成为血血细胞

50、分分析仪(Hemmatoologgy AAnallyzeer)后后，又增增加了许许多分析析和计算算参数。最早加加入到并并得到公公认的参参数是红红细胞体体积分布布宽度(RDWW)，目目前该参参数已经经成为许许多型号号血细胞胞分析仪仪的标准准参数，在在各种贫贫血的诊诊断和治治疗中起起着重要要作用，而而该参数数是很难难应用人人工方法法测定的的。随后后有关平平均血小小板体积积(MPPV)、血小板板体积分分布宽度度(PDDW)、血小板板压积(PCTT)、大大血小板板比率、白细胞胞三分群群、白细细胞五分分类、血血红蛋白白浓度分分布宽度度、异常常淋巴细细胞提示示、幼稚稚细胞提提示等各各种参数数和功能能也不断

51、断的添加加到一些些品牌的的仪器上上，目前前有的仪仪器甚至至可以提提供400500种测量量或计算算参数。但很多多的新参参数目前前仍不能能应用于于临床，仅仅限定在在实验室室中供研研究使用用。在美美国凡进进入临床床应用的的新的实实验参数数，需要要经过FFDA(美国食食品和药药品管理理局)的的批准认认可，其其批准原原则是经经过多年年实验认认证，该该参数应应该是对对临床诊诊断有用用的、安安全的和和高效率率的。这这个认证证是非常常严格的的，而在在我国目目前还缺缺乏这样样严格的的认证和和批准体体系。2.多功功能合成成扩展血细胞分分析仪已已经不仅仅仅局限限在进行行常规血血细胞分分析，近近年来它它增加了了许多扩

52、扩展的功功能。例例如将网网织红细细胞(RRET)的计数数和分析析功能加加入其中中，例如如Bayyer ADVVIA 1200型;SSysmmex SE-90000/SSE-995000/XEE-21100型型;Cooultter MAXXM/SSTKSS/HmmX/GGEN.S型;Abbbottt CEELL-DYNN32000/335000R/440000型等。一些仪仪器另外外增加了了幼稚细细胞分析析和有核核红细胞胞分析功功能，甚甚至对血血液细胞胞中的某某些寄生生虫进行行提示，例例如Syysmeex SSF-330000/SEE-90000/SE-95000/XXE-221000;Baaye

53、rr ADDVIAA 1220;AAbboott CELLL-DDYN335000/40000;Couulteer HHmX/LH7750/GENN.S Sysstemm 2型型等。更更有一些些仪器把把流式细细胞分析析仪的某某些功能能合并到到血细胞胞分析仪仪上，这这样在进进行常规规血细胞胞分析时时就可以以得到某某些淋巴巴细胞亚亚群的分分析结果果，例如如在Cooultter STKKS上可可以同时时测定CCD4和和CD88，在AAbboott CELLL-DDYN 40000上可可以测定定CD33、CDD4、CCD8和和CD661，使使得一机机两用。3.检测测速度的的提高许多仪器器由于增增加了自

54、自动进样样系统，测测定速度度加快，一一般可以以达到每每小时8801100个个样品，在在不包含含网织细细胞检测测的情况况下，CCoullterr GEEN.SS Syysteem 22型每小小时测定定1055个标本本;Baayerr ADDVIAA 1220每小小时1220个标标本;而而Syssmexx KXX-21100可可以达到到每小时时1500个标本本。这些些仪器都都可以在在自动成成批进样样的同时时，随时时插入急急诊检验验的标本本。4.方法法的改进进和进展展为了做到到更加准准确的计计数和分分析、更更多的测测定和分分析参数数，血细细胞测定定和分析析的方法法已经不不局限于于某一种种单一的的方法

55、，如如传统的的电阻抗抗法或后后来应用用的激光光散射法法，还加加了多项项技术的的相互联联合应用用。例如如在白细细胞分类类上，各各厂家分分别采用用了不同同的方法法，Cooutller采采用了VVCS技技术，即即体积测测量、射射频高频频传导性性和激光光散射技技术;SSysmmex则则采用了了直流电电阻抗(DC)与射频频(RFF)和特特殊细胞胞染色技技术;BBayeer公司司的ADDVIAA1200则采用用激光散散射和细细胞化学学(过氧氧化酶和和嗜碱细细胞染色色)技术术;而AAbboott是是采用多多角度偏偏振光散散射(MMAPSSS)技技术对白白细胞进进行分析析。除了了在白细细胞分类类上采用用多种处

56、处理方法法外，在在红细胞胞和血小小板分析析上也采采用了光光学和电电阻法结结合的处处理方法法，以期期得到更更正确的的结果;对红细细胞体积积进行三三维空间间分析(3D)，体积积大小和和色素含含量的分分析;对对血红蛋蛋白测定定不仅使使用比色色法，同同时还使使用激光光散射法法进行单单个红细细胞血红红蛋白量量的分析析，以尽尽量减少少高WBBC、乳乳糜血、高胆红红素等对对HBGG比色的的影响。由于方方法的改改进，这这些仪器器已经不不仅仅采采用23种试试剂来完完成测定定工作，常常常是66种以上上的试剂剂联合使使用，才才能够适适应方法法的要求求，例如如Bayyer ADVVIA1120型型需要多多达111种试

57、剂剂，而这这些试剂剂由于技技术含量量较高，专专用性强强，各厂厂家产品品之间不不能混用用，生产产技术要要求高，因因此国内内还没有有替代产产品出现现。5.应用用的方便便性对于操作作者来说说，仪器器最大的的优越性性还应该该体现在在操作的的方便性性和灵活活性上。许多厂厂家都考考虑到了了这一点点。例如如可以使使用静脉脉或末稍稍血液;可以在在标本量量很大的的情况下下选择全全自动进进样系统统，也可可使用单单独闭盖盖或开盖盖取样系系统(闭闭盖全自自动进样样或单独独进样对对操作者者是非常常安全的的操作方方式);对项目目可作适适当的组组合，以以适应临临床及患患者的需需求，例例如操作作者可以以选择CCBC方方式(仅

58、仅含细胞胞计数、不分类类)、CCBC+DIFFF方式式(计数数加分类类)、RRET方方式，可可将它们们任意单单选或组组合;条条码的应应用给标标本编号号提供了了方便，仪仪器通过过自动扫扫描条码码，来鉴鉴别标本本的来源源、需要要检测的的项目和和区分患患者，最最后根据据条码提提供的信信息将结结果返回回到临床床或病人人档案中中，为检检验数据据的电子子化提供供了极大大方便，也也减少了了编号带带来的差差错。上上述的许许多功能能已经在在许多新新型的高高级五分分类式血血细胞分分析仪中中得到实实现。二血细胞胞分析仪仪产品的的系列化化和流水水线化1.产品品的系列列化各有实力力的公司司不断开开发系列列化产品品以满足

59、足不同类类型用户户的需要要。例如如Couulteer公司司的ACCT系列列仪器，有有最简单单的ACCT 88型只有有8个参参数到112参数数，到也也有188参数三三分类的的ACTT DIIFF，亦亦有5分分类的AACT 5-DDIFFF，甚至至还有可可增加动动物血液液分析的的型号。Syssmexx的多种种系列化化仪器如如SE系系列、KK系列、F系列列等在我我国也很很常见。此外AAbboott、ABXX、日本本光电、Sweelabb等公司司都有各各种系列列化仪器器不断推推出，以以满足各各种需求求。2.流水水线化在全自动动血液分分析仪器器的基础础上实现现全自动动流水线线化，是是血液分分析的又又一大

60、飞飞跃，但但这需要要雄厚的的资金支支持。所所谓流水水线化即即是将血血液常规规分析中中的所有有步骤和和项目进进行系统统性联合合，将血血液常规规分析、网织红红细胞分分析、血血片的制制备(选选择、涂涂片、编编号、染染色、干干燥)等等系列步步骤通过过仪器自自动完成成。这种种流水线线可以将将具有不不同功能能的单个个设备用用自动传传送系统统连接在在一起，例例如Syysmeex的HHST型型小型流流水线血血液分析析仪(图图1)将将电脑控控制终端端、SEE-90000血血细胞分分析仪、R-330000网织细细胞分析析仪、SSP-1100血血片涂片片机连结结在一起起，使血血液标本本从计数数开始自自动按程程序运行