动物细胞的基本形态观察和细胞计数实验原理及步骤VIP

1、实验一：动物细胞的基本形态观察和细胞计数【课前预习】1细胞计数的基本原理？2细胞计数与细菌计数的异同点？【目的要求】制备不同细胞的临时制片，观察、了解细胞的基本形态；掌握细胞计数方法。【基本原理】细胞的形态结构与功能相关是很多细胞的共同特点，在分化程度较高的细胞更为明显，这种合理性是生物漫长进化过程所形成的。例如：具有收缩机能的肌细胞伸展为细长形；具有感受刺激和传导冲动机能的神经细胞有长短不一的树枝状突起；游离的血细胞为圆形、椭圆形或圆饼形。不论细胞的形状如何，细胞的结构一般分为三大部分：细胞膜、细胞质和细胞核。但也有例外。例如：哺乳类红细胞成熟时细胞核消失。细胞计数一般用血细胞计数板，按白细

2、胞计数方法进行计数。细胞计数时，先将培养细胞或血细胞稀释成细胞悬液，然后将细胞悬液滴入细胞计数板内，计数计数板上计数室四大格内的细胞数。根据计数室的容积及稀释倍数，即可计算出细胞浓度。【实验用品】1材料：鸡一只2器材和仪器：显微镜、载片、盖片、吸水纸、手术器材、解剖盘、血球计数板、小平皿、牙签3试剂：0.85生理盐水、Ringer 氏液【方法步骤】1制备10%的鸡血细胞悬液。2鸡血涂片的制备与观察取鸡血悬液，靠近一端滴在载片上将另一载片的一端呈45角紧贴在血滴的前缘，均匀用力向前推，使血液在载片上形成均匀的薄层 (图l1)。晾干，显微镜下观察。图11 血涂片的制备3细胞计数1）制备鸡红细胞悬液

3、：用Ringer 液按确定的稀释倍数制成鸡红细胞悬液。2）熟悉血细胞计数板：血细胞计数板呈长方形，有2 个计数室。每个计数室分为9 个大正方格，每个大格边长为1mm ， 计数室的底与盖玻片间的距离为0.1mm ， 及每大格的容积为1mm1mm0.1mm=0.1mm3。四角的每个大格被分为16 个中格；中央的大格被分为25 个中格，中央的每个中格又被分为16 个小格。3）滴片：每人取1 付血细胞计数板及1 张盖玻片，用布将盖玻片擦净，把盖玻片盖在血细胞计数板槽上，然后用吸管将制备好的鸡血细胞悬液混匀，吸取血细胞悬液，滴1 滴于血细胞计数板的盖玻片一侧边缘，使细胞悬液自然流入计数室内。注意血细胞悬

4、液不可滴的过多，如溢出或盖玻片内有气泡必须重做，否则将影响计数结果。该吸管加完样后不能再用。4）计数：在低倍镜下按图计算计数板的四角大方格（每个大方格又分16 个小方格）内的细胞数。计数时，只计数完整的细胞，若聚成一团的细胞则按一个细胞进行计数。数出计数板上计数室四角四大格中的细胞数，如细胞压在格线上时，数上不数下，数左不数右。二次重复计数不应超过5。【实验结果】1鸡血涂片的制备与观察显微镜观察可见鸡红细胞为椭球形，有核。白细胞数目少，为圆形。2细胞浓度计算 将四大格的细胞总数除以4，得出平均每大格的细胞数，每大格的容积为0.1mm3，乘以10000 即为1000mm3（1ml）。因此，不同稀

5、释倍数细胞悬液的细胞浓度可用下式计算：细胞浓度（细胞数ml）（四大格的细胞数4）10000稀释倍数【实验报告】1绘图：显微镜下观察的各种细胞形态2计数每毫升细胞悬液中的细胞数（注意单位：个/ml）3为什么细胞计数时，细胞悬液逸出凹槽外或有气泡时要重做？附： 必须注意的问题生物绘图方法绘图是生物实验报告的一种重要形式，其基本要求如下：1准备好3H 铅笔、橡皮、刀、尺子及绘图纸，将绘图纸放在观察物的有边、纸下不要垫书或纸张。2绘图时，特别注意观察物的形状、各部分的位置、比例和毗邻关系。3图的位置、大小要适宜，图占报告纸左上方2/3 的面积，并考虑注字的位置。4观察清楚后，选择典型的细胞或组织，左眼看显微镜，右眼配合右手，先用铅笔在纸上轻轻描出轮廓，使形状正确，然后再用清晰的线条绘出，线条粗细要均匀不要重复。5用圆小点表示明暗和立体感，点的大小要均匀，不能涂阴影。6图绘好后，要在图的右侧注明各部分结构名称，引线要直而平行，长短适度，各引线不能交叉，各线