1型糖尿病大鼠肾脏Ⅳ型胶原的表达及坎地沙坦的干预作用

1、1型糖尿病大鼠肾脏型胶原的表达及坎地沙坦的干预作用1型糖尿病大鼠肾脏型胶原的表达及坎地沙坦的干预作用【关键词】糖尿病肾病;大鼠;型胶原;坎地沙坦【关键词】糖尿病肾病;大鼠;型胶原;坎地沙坦在我国，糖尿病肾病(dn)是导致终末期肾病的第三大病因，仅次于肾炎和高血压。型胶原是肾小球系膜和基底膜的主要组分之一，是dn时细胞外基质增殖的主要成分，是dn早期表现之一。在dn中阻断ras系统可以有效减轻尿白蛋白程度，延缓肾动脉硬化及肾脏纤维化的进展。坎地沙坦作为较强的血管紧张素1型受体(at1)阻滞剂，对于其能否改善糖尿病大鼠肾脏构造及功能损伤报道不多。本研究观察坎地沙坦对糖尿病大鼠肾脏功能、肾小球病理形

2、态改变及型胶原的影响，为dn的防治提供理论根据。1材料与方法1.1动物模型建立和分组清洁级雄性istar大鼠36只，体重(20020)g，购自河北医科大学实验动物中心。随机选取12只为正常对照组(n组)，余24只一次性腹腔注射链脲佐菌素(stz)55g/kg，72h后尾静脉取血测随机血糖16.7l/l为糖尿病大鼠。造模成功的大鼠随机平分为糖尿病组(d组，n=12)和坎地沙坦干预组(d组，n=12)。干预组大鼠给予5gkg-1d-1坎地沙坦(维尔亚，重庆圣华曦药业)灌胃，另两组给予等量生理盐水灌胃。实验期间自由进食、饮水，不使用胰岛素及其他降糖药物。1.2方法1.2.1标本搜集1.2.2指标测定

3、fpg、sr及ur用美国产bekanx20自动生化分析仪测定;r按公式计算：ur每in尿量(l)/sr，并以体重(kg)校正。24huae采用放射免疫法检测;肾重指数(ki)=左侧肾脏重量(g)/体重(g)。采用panlab无创血压测量仪测量大鼠清醒状态下尾动脉收缩压(sbp)(取3次测量的均值)。1.2.3肾脏病理检查1.2.4免疫组化检测采用免疫细胞组化染色法(sab)法(sp试剂盒购于北京中山生物技术)，以磷酸盐缓冲液(pbs)代替一抗作阴性对照染色。石蜡包埋切片常规脱蜡至水，3%过氧化氢甲醇灭活内源性过氧化物酶,胰酶修复抗原后，山羊血清封闭非特异性抗原，滴加兔抗大鼠型胶原抗体(1100

4、，武汉博士德公司)，4孵育过夜。滴加二抗、三抗，最后显微镜下控制二氨基联苯胺(dab)显色，苏木素复染。肾小球型胶原表达采用半定量分析，即随机选取10个正切的肾小球(400倍)，根据着色情况计算阳性指数(pi)2，pi=阳性信号面积阳性强度，求和，取平均值。1.3统计学分析采用spss13.0统计软件包进展分析，数据资料以xs表示，多组间均数比拟采用方差分析，组间两两比拟采用q检验。2结果2.1根本指标实验完毕时，与n组相比，d组fpg、24huae、ki、r均显著升高，差异有统计学意义(p0.01);与d组相比，d组除fpg外，均明显降低(p0.05);三组间大鼠sbp差异无统计学意义(p0

5、.05)。见表1。2.2肾小球形态病理变化石蜡切片经he和pas染色，与n组比拟，d组大鼠ga和gv均显著增大(p0.01)，肾小球内pas阳性染色物质增多，系膜区增宽，系膜细胞增生，肾小球基底膜增厚，f明显增高(p0.01);d组较d组ga、gv及f均明显减小(p0.05)。见表2。2.3肾小球型胶原表达免疫组化结果显示，n组大鼠肾小球仅有少量型胶原表达，d组较n组肾小球型胶原表达明显增强(p0.01)，染色深且面积增大;d组较d组肾小球型胶原表达明显减弱(p0.05)。见表2。表1各组大鼠fpg、24huae、ki、r及sbp的比拟表2各组大鼠ga、f、gv及肾小球型胶原表达的比拟3讨论本

6、研究通过腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型，在造模后第12周，实验性糖尿病大鼠除血糖升高外，24huae、肌酐去除率均明显增加;形态学的检查观察到肾小球肥大、系膜细胞及系膜基质增生、肾小球基底膜增厚，符合dn早期功能及构造改变，说明实验造模成功。dn典型的病理改变是肾小球硬化，其组织学特征是肾小球基底膜增厚和细胞外基质积聚。细胞外基质主要由胶原、蛋白多糖、糖蛋白等物质组成，其中型胶原是肾小球系膜和基底膜的主要组分之一，是dn时细胞外基质增殖的主要成分3，故本研究选择型胶原来评价肾小球的病变程度;同时根据肾脏pas染色测得肾小球系膜基质分数，其更加准确地反映了肾小球系膜基质积聚的程度。本研究结果显示，早期应用坎地沙坦，肾小球系膜基质分数减小，型胶原表达减低，说明肾小球的硬化程度得到改善。大量临床试验已经证实，给伴有肾脏疾病的2型糖尿病患者使用at1受体阻滞剂可以获得比抚慰剂和其他抗高血压药物更好的肾脏保护作用。本研究在使用坎地沙坦干预12后，三组大鼠的血压无明显统计学差异，干预组大鼠的24huae减少，肌酐去除率降低，说明肾小球的高滤过状态得到改善;同时肾小球硬化的程度减轻，充分证实了坎地沙坦独立于降压以为的肾脏保护