同济医院检验科ISO15189体系文件05尿液标本的细菌学检验

1、同济大学附属同济医院检验科微生物组项目操作指导书TJYYJYKWSW/XMZ105第2版标题：尿液标本的细菌学检验第1章 第05号第 PAGE 3 页 共 NUMPAGES 3 页1 概述1.1 尿培养常见病原菌：80%为革兰阴性杆菌，其中以大肠埃希菌最为常见，占尿路感染的70%以上，其次为变形杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、产气肠杆菌、沙门菌等；20%为革兰阳性菌，以肠球菌为多见，次为葡萄球菌、粪链球菌、结核分枝杆菌、少数为厌氧菌等；支原体、依原体、真菌感染呈上升趋势。1.2 尿培养常见污染菌：类白喉棒状杆菌，枯草杆菌等。2 病人准备和标本采集：2.1 中段尿采集法： 2.1.1 女性:

2、成年女性外阴部先以肥皂水清洗，再以无菌水冲洗，用无菌沙布檫拭，以手指将阴唇分开，弃去前段尿,留取中段尿5-7ml于无菌试管内送检。2.1.2 男性: 翻转包皮，用肥皂水清洗尿道口，用清水冲洗，留取中段尿5-7ml于无菌试管内送检。2.1.3 儿童、婴儿: 先以无菌生理盐水棉球洗净其外阴部和外生殖器，将无菌试管或瓶对准尿道口，以胶布固定于皮肤上，待尿排出后送检。2.1.4 两侧肾盂尿: 由专科医生采集，左右侧标本必须注明，避免混淆而误诊。2.1.5 膀胱穿刺: 此法用于厌氧菌培养。耻骨上皮肤经碘伏消毒后，再以75%乙醇檫拭，用无菌注射器作膀胱穿刺，吸取尿液后排去注射器内的空气，针头插于无菌橡皮塞

3、上送检。3 培养基与试剂：3.1 血平板、麦康凯平板、MTM 平板，见: 基本分离培养基及配制。3.2 革兰染液，本室自配。4 标本的处理：4.1 涂片检查: 中段尿标本无需离心，取一滴制成涂片，待其自然干燥，革兰染色后镜检，每油镜视野查见1个以上细菌，有诊断意义，依据染色性状报告结果，如： 查见革兰阴性杆菌，1/油镜视野。 4.2 淋球菌涂片: 一般取晨尿10-15ml，离心沉淀涂片，革兰染色后镜检。报告：找到革兰阴性双球菌或未找到革兰阴性双球菌。4.3 抗酸染色：参见:抗酸菌检验操作规程4.4 分离培养：取中段尿接种绵羊血琼脂平板、麦康凯琼脂平板，置35、5% CO2 培养18-24 小时

4、,观察结果；有些细菌生长较慢，可延长培养一天后观察。 4.5 菌落计数： 用定量接种环(10ul)取尿液10ul，接种血平板，涂抹均匀，待表面干燥后，置35、5% CO2 培养18-24小时，计数菌落，乘以100，即为每ml尿液的菌落数。4.6 淋病奈瑟菌培养：接到标本后立即离心沉淀，接种“淋球菌培养基” 置35、5% CO2 培养48小时，观察结果。4.7 结核分枝杆菌培养：参见抗酸菌检验操作规5 结果观察:5.1 MTM 平板：菌落无色透明、半透明样小菌落，直径1-2mm,氧化酶阳性，革兰染色为阴性双球菌，必要时作生化鉴定。报告：检出淋病奈瑟菌5.2 血平板及麦康凯琼脂平板：可视需要作菌落

5、涂片观察，作菌种鉴定和药敏试验，参见“细菌鉴定操作规程”。6 报告方式：6.1 10%的尿路感染患者，可分离出两种病原菌；若同一份标本分离出了3种以上不同细菌，应认为受到污染，报告：杂菌生长，重送标本。6.2 革兰阴性杆菌菌落计数大于105cfu/ml；革兰阳性计数大于104cfu /ml有诊断意义；报告鉴定及敏感试验结果。6.3 考虑到病人留取尿标本时可能已使用过抗生素，细菌生长受抑制, 菌量减少,因此当菌落计数小于上述诊断标准，仅有一种细菌生长时，亦报告鉴定及敏感试验结果。7 操作流程:中段尿 离心沉淀 定量培养 分离培养 涂片检查 T-M 培养基 计数菌落 血琼脂、麦康凯平板 直接涂片革兰染色 离心沉淀涂片找镜检 淋病奈瑟菌 35 5% CO2 培养 观察菌落、染色镜检 生化鉴定试验 药敏试验 报告 8 临床意义: 8.1 尿标本的细菌学检验对泌尿道感染性疾病的诊断、治疗有重要意义。革兰阴性杆菌菌落计数大于10万/ml；革兰阳性计数大于1万/ml有诊断意义。8.2 通过药物敏感试验，指导临床医生用药。8.3 抗酸菌检查：明确诊断泌尿道结核。8.4 淋病奈瑟菌检查 确诊淋病。9 注意事项:9.1 通常应取晨起第一次尿液送检。9.2 患者接受抗菌素治疗，使有关细菌受到抑制，可影响标本的阳性