同济医院检验科ISO15189体系文件07解脲及人型支原体检测

1、同济大学附属同济医院检验科微生物组性病检验操作指导书TJYYJYKWSW/XBZ406第2版标题：解脲及人型支原体检测第4章 第06号第 PAGE 4 页 共 NUMPAGES 4 页1 目的:培养检测生殖道分泌物及尿液等标本中的支抗原、进行药物敏感试验。2 适用范围：同济医院检验科微生物实验室。3 项目名称：解脲及人型支原体分离鉴定、计数、药敏试验。4 检测方法：液体培养基培养及药敏。5 检测原理：利用人型支原体和解脲支原体在选择性分离培养基生长并分解特定底物，支培养基的颜色由黄色转变成红色或红紫色，检测Uu和Mh生长与否，并根据生长出现的快慢估算菌落数量。6 试剂6.1 品牌：美国安氏。6

2、.2 包装规格：20人份。6.3 内含物 稀释液10ml7瓶、冷冻干燥培养基20瓶、无菌石蜡油10ml2瓶、试剂条20条、报告单20张等7 标本采集 参见“性病检验标本采集验收(拒收)及保存指导”。7 操作步骤： 7.1 标本接种与培养7.1.1 取出所需数量的冷冻干燥培养基，滴加稀释液到培养瓶中，充分摇匀，培养基完全溶解后液面至标签2.9 标线处。7.1.2 将50ul培养基加入C-空白孔中。7.1.3 接种分泌物标本 将无菌拭子采集的标本插入培养基中，挤压旋转拭子数次，使拭子中标本渗入，弃拭子。7.1.4 接种液体标本 尿液经每分钟2000转离心10分钟，取沉渣约0.2ml； 其他体液标本

3、取0.2ml，用无菌滴管或定量加样器接种。7.1.5 充分混匀接种了标本的培养液，用加样器接种50ul至余下各孔中；每孔家石蜡油约50ul ,盖上盖子。7.1.6 将剩余培养基及试剂条一起置CO2培养箱培养（5% CO2 ,351）,分别于24和48小时观察结果。7.3 结果观察 7.3.1 C-孔（空白孔）阴性（-），试验有效，判断余下各孔结果。C-孔（空白孔）阳性（+），表示污染，试验无效。7.3.2 C孔（对照孔）阳性（+），有Uu或（和）Mh生长，判断余下各孔结果，见结果判读表。7.3.3 C孔（对照孔）阴性（-），报告Uu和Mh阴性。试剂孔编号阳性阴性结果判断质控孔1.C-空白孔红黄

4、阳性：试验无效； 阴性：判断余下各孔结果2.C 对照孔阳性：判断余下各孔结果试验； 阴性：报告Uu和Mh培养阴性分离鉴定与半定量计数3.Uu红黄阳性：解脲脲原体生长；根据临床情况决定是否治疗4.Uu104阳性：Uu104CCU。需进行临床干预治疗（结果必须在24小时判断）5.Mh阳性：人型支原体生长6.Mh104阳性：Mh104CCU, 结果必须在48小时判断注：尿液、精液及其它正常无菌部位采集的标本，Uu培养阳性，即使小于104CCU，结果仍然具临床意义。药敏：DOX等红黄敏感（S）：L、H均不生长；耐药（R）：L、H均生长；中敏：仅L生长 报告方式：解脲支原体或人型支原体：阳性（阴性）；培

5、养阳性时，报告计数及药敏结 果。菌落计数104cfu/ml时，报告阴性。 注意事项 试剂盒应在2-8冰箱内，有效期18个月。不同批号的试剂不能混用。 培养基复溶后和接种试剂条前均须充分混匀。结果判断以试剂条为准。 支原体生长应保持培养基透明清亮，遇杂菌污染引起浑浊变红不得报告支原体阳性（但 部分含分泌物较多的样本，接种到培养基中可能引起培养基澄清度降低，请注意区别）。 另外培养瓶变红，而试剂条分离孔无支原体生长，多为标本中支原体含量很低引起。 Uu的计数结果必须在24小时判断，Mh的计数结果必须在48小时判断。 试剂开封后，如保存不当受潮或长期放置室温会出现变色和浑浊，则该部分拭子不得 再用。 因为大部分标本是不均一分泌物，可能导致试剂条微孔接种量不均一，药物敏感性结 果不和理（如：H孔生长，L不长！）。如出现这种情况，请重做药物敏感试验或弃用此药物。10 临床意义 支原体培养是检测支原体最好的