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文档简介

1、通用型一步法RT-PCR试剂盒说明书前言本试剂盒适用于对各种动、植物、病毒RNA进行PCR检测。用户可根据被分析基因，配合一对引物，或同时采用Taqman 荧光探针，先将提取的RNA反转录(reverse transcription).成cDNA，再经过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction) 技术对特异性片段进行扩增，进行电泳或实时荧光分析。一步法RT-PCR可使RT及PCR过程在单管中完成，比分开进行RT及PCR更方便。由于不需要在RT完成后打开反应管， 尽可能地避免了样品间的相互污染。规格20人份适用仪器适用于各种普通PCR仪器和实时荧光PCR仪器。15 XR

2、T-PCR缓冲液200p l2混合酶40p l3DEPC 水1000U l试剂准备根据下表配制反应液:试剂盒组成试剂名 称浓度荧光PCR用量普通PCR用量1DEPC 水-530p l540p l25 XRT-PCR缓冲液-200p l200p l4引物120p M10 pl10p l5引物220p M10 pl10p l6Taqman 荧光探 针(可 选)20p M10 pl-7混合酶-40 pl40pl振荡混匀后，按每管40 p l(可根据需要调整)分装，备用。PCR扩增将均一化后的RNA提取样本10 p】加入各反应管，混匀、离心后，置普通PCR仪器或实时荧光PCR仪器上进行扩增及实时检测。

3、扩增程序:温度时间循环数137 C3045分钟1294 C3分钟1393 C30秒354055 C30秒72 C60秒472 C5分钟154C保温结果判断扩增产物可直接进行电泳检测；实时荧光检测可根据相应仪器的配套软件进行结果分析。保存及有效期-20P保存，有效期为6个月。注意事项开始检测前请仔细阅读本说明书全文。整个检测过程中，反应体系的配制、样本处理及加样、PCR扩增（荧光检测）应分区进行以避免污染。操作人员应戴口罩，经常更换一次性手套，以避免RNA酶的污染；实验中所用器具均应经过除RNA酶处理。试剂盒组成中的试剂使用前应充分融化并混匀。进行实时荧光分析时，应使用透光性能较好的一次性薄壁离心管；.荧光探针应避光保存，加入缓冲液中后，应尽快进行 扩增。

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