固相萃取―高效液相色谱法测定豆制品中丙酸钙

1、固相萃取一高效液相色谱法测定豆制品中丙酸钙摘要：本文探讨利用固相萃取技术在豆制品检测前处 理过程中去除干扰成分，使用液相色谱测定食品中丙酸钙， 与国标法相比较，本方法优于现有国标方法，本方法可操作 性强，使用本方法可以快速高效测定豆制品中丙酸钙的成 分，且大大降低样品测定结果产生假阳性的可能。实验结果 表明，利用Ultimate XB-SAX强阴离子交换柱净化样品，使 用高效液相色谱法测定，可作为豆制品中丙酸钙有效的测定 方法，方法的检出限为0.001g/kg，空白样品的加标回收率为 94.3 %96.9 %，测定结果的相对标准偏差为1.08 (n=5)。关键词：豆制品丙酸钙固相萃取 液相色谱

2、法中图分类号：TS255文献标识码：A文章编号：1672-5336 (2015) 02-0021-02丙酸钙是酸型食品防腐剂，在酸性条件下，产生游离丙 酸，具有抗菌作用，同时丙酸钙与其它脂肪一样可以通过代 谢被人畜吸收，并供给人畜必需的钙，这一优点是其它防霉 剂所无法相比的，其使用广泛。其在酸性介质(淀粉、含蛋 白质和油脂物质)中对各类霉菌、革兰氏阴性杆菌或好氧芽 孢杆菌有较强的抑制作用，还可以抑制黄曲霉素的产生，而 对酵母菌无害，是食品、酿造、饲料、中药制剂诸方面的一 种新型、高效的食品与饲料用防霉剂。但是长期过量的食用 丙酸钙也会对人体造成一些伤害，严重的甚至造成中毒乃至 休克；同时丙酸钙

3、对婴幼儿以及老人等特殊人群的潜在威胁 更大1。我国卫生部在食品安全国家标准食品添加剂使用标 准中规定丙酸钙可以在豆类制品食品中作为添加剂使用， 最大使用量为2.5g/kg。国家标准3中，样品的前处理方法分为蒸馏法和直接浸 提法，蒸馏法需要对行样品逐个进行处理，且处理过程复杂， 费时费力，不适用于大批量样品的检验操作；而直接浸提法 对于豆制品并不适用，在标准物质保留时间处样品会出现干 扰峰，出现假阳性，严重影响样品的检验结果。本文讨论的 使用强阴离子交换柱固相萃取进行前处理的方法，可降低样 品的基质干扰，提高样品分析的准确度和灵敏度4，且本方 法可操作性强，重复性好，大大提高检验效率，适用于大批

4、 量样品的检验工作。1材料与方法1.1仪器沃特世高效液相色谱系统（e2695）、紫外检测器（e2998）、 液相色谱工作站（EMPOWER2）、超声波提取装置。1.2 材料磷酸氢二铵：化学纯，国药集团有限公司;丙酸钙：99.0%，国药集团有限公司；实验室用超纯水：实验室纯水制备系统；强阴离子交换柱：500mg/6ml，月旭科技（上海）股份 有限公司；甲醇：色谱纯，国药集团有限公司；盐酸溶液：国药集团有限公司.1.3检验方法1.3.1样品处理5称取5.000 g （精确至0.001 g）的样品至50 mL比色管 中，加入15mL水用，超声提取30min后，用10 %的氨水调 pH至碱性，用水定容

5、至25mL，混匀后溶液过滤纸待用。固相萃取条件：固相萃取过程中始终保持液体通过固相 萃取柱的速度保持匀速，尽量保持为1mL/min。固相萃取过 程：先将固相萃取柱依次用3mL甲醇、3mL水活化，活化 后取上述样品提取液1 mL通过固相萃取柱，然后以2 mL纯 水淋洗，弃去淋洗液，用2 mL 10%的盐酸溶液进行洗脱并收 集洗脱液，过0.45m m滤膜，供HPLC分析。1.3.2 色谱条件色谱柱:Zorbax C18 （250 mmX4.6 mm id.）；柱温：30C； 紫外检测波长214 nm；流动相：1.5g/L的磷酸氢二铵溶液 （pH3.03.5）；流速：1.0 mL/min；进样体积

6、10.0m L。1.3.3标准曲线绘制准确称取1.26g丙酸钙（精确至0.000 1 g）于100 mL容 量瓶中，用水定容至刻度，此储备液相当于10.0mg/mL。准确吸取上述标准贮备液0.1、0.2、0.4、0.8、1.0 mL 10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，配制成浓度分别为0.1、0.2、 0.4、0.8、1.0mg/mL的标准使用液。2结果与分析2.1方法的精密度和检出限在空白样品中添加丙酸及双乙酸钠标准物质，添加水平 为10mg，按照1.3.1方法处理样品，做5个平行样，记录峰 面积及保留时间。根据5次测定结果的峰面积计算出丙酸的 含量，并计算相对标准偏差。结果见表1。保留时间

7、的标准 偏差为0.05 %。以3倍的信噪比计算检出限，最低检出限浓 度可达0.001g/kg。由表3可以看出，丙酸钙含量相对标准偏 差为 0.70 %（n=5）。2.2与国标方法的比较2.2.1与国标蒸馏法比较蒸馏法加标回收率和固相萃取法加标回收率的比较间 表2。从表2可以看出，固相萃取法的回收率多在90%以上， 远远高于蒸馏法的回收率。2.2.2与国标直接浸提法比较取相同阴性样品加入同样量的丙酸钙，分别用水浸提法 和固相萃取进行处理，分别得到图1一直接浸提法样品液相 色谱图和图2一固相萃取法样品液相色谱图。从图1和图2的比较可以看出，固相萃取法样品液相色 谱图杂峰少，基质干扰小，色谱峰峰形更

8、好，可以大大排除 假阳性的出现。3结语本实验应用强阴离子交换固相萃取柱对食品样品进行 净化处理后经HPLC测定食品中的丙酸钙，回收率在90%以 上，最低检出限可达0.001g/kg，相对标准偏差小于5%。而 国标蒸馏法的回收率多在70%左右，丙酸钙的检出限为 0.03g/kg。同时本方法快捷方便，可操纵性强，适用于大批 量操作，并提高了方法的准确度和灵敏度。利用强阴离子交 换固相萃取柱，对丙酸这种弱酸有较好的净化提取效果。有 效地去除了豆制品产品基质中存在的干扰，方法的精密度和 准确度相对于国标法都大大提高，同时提高了方法的重现性 并提高了检验的工作效率。参考文献赵天华.化学试剂化学药品手册M.2版.北京：化学 工业出版社，2006： 223.中华人民共和国卫生部.GB 2760-2011食品安全国家 标准食品添加剂使用标准S.北京：中国标准出版社，2011： 10.中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国 家标准化管理委员会.GB/T 23382-2009食品中丙酸钠丙酸 钙的