己酮可可碱对内毒素诱导大鼠急性肺损伤的干预作用

1、己酮可可碱对内毒素诱导大鼠急性肺损伤的干预作用【摘要】目的：观察己酮可可碱(PTX)对内毒素(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)大鼠模型各项病理生理和生化指标的影响，讨论PTX对ALI的干预阻断作用.方法：将72只月龄和体质量相近的雄性SD大鼠随机分为3组：对照组(NS组)，实验组(LPS组)，治疗组(PTX组)，每组24只.给予对照组大鼠尾静脉注射生理盐水，实验组大鼠尾静脉内注射LPS4g/kg，治疗组大鼠尾静脉注射LPS前1h，由腹腔注射0.036l/LPTX10g/kg.确认实验组复制ALI模型成功之后，即刻给予PTX10g/kg腹腔注射，间隔1h重复给药，连续5次；其余两组大鼠与实验组同

2、样时间间隔给予腹腔注射等容积的生理盐水.测定各组动脉血氧分压(Pa2)，pH值，二氧化碳分压(Pa2)，肺系数，肺水含量，肺通透性指数，检测支气管肺泡灌洗液中性白细胞及巨噬细胞比例，检测丙二醛(DA)，超氧化物歧化酶(SD)，一氧化氮(N)，诱生性一氧化氮合成酶(iNS)含量，并进展肺组织大体，病理形态学观察.结果：治疗组与实验组相比，Pa2和pH值升高，Pa2降低，肺系数(0.590.17vs0.920.11,P0.05)，肺含水量(84.460.39vs80.220.37,P0.05)，肺通透性指数(7.280.54vs12.320.28,P0.05)均有明显下降；肺泡灌洗液中性粒白细胞比

3、例下降，肺通透指数减低，N，iNS明显下降，SD程度显著升高(P0.05).病理学观察治疗组肺组织病变较实验组为轻.结论：PTX对LPS诱导ALI大鼠模型具有保护作用，其机制可能与PTX改善能量代谢及减少部分细胞毒性物质有关.PTX对由LPS诱导的ALI具有一定保护作用.【关键词】急性病；肺/损伤；己酮可可碱；丙二醛；超氧化物歧化酶；一氧化氮；一氧化氮合酶急性肺损伤(autelunginjury,ALI)/急性呼吸窘迫综合征(auterespiratrdistresssyndre,ARDS)是多器官功能障碍综合征(ultiplergandysfuntinsyndre,DS)在肺部的部分表达1.

4、己酮可可碱(Pentxifylline,PTX)作为血管活性药物已用于治疗血管功能不全性疾病，近年的研究还发现PTX具有抑制中性粒细胞、单核细胞聚集，保护血管内皮细胞的作用而将其用于炎症性疾病的治疗，但详细机制尚未说明2-3.我们采用在鼠尾静脉注射内毒素(lipplysaharide,LPS)的方法复制大鼠ALI模型，通过观察PTX对ALI大鼠模型病理生理以及生化等项指标的影响，旨在进一步讨论PTX对ALI的防治作用及可能的机制.1材料和方法1.1材料1.2方法1.2.1模型建立与动物分组按文献2的方法建立大鼠模型.将大鼠随机分为3组：对照组，实验组和治疗组，每组动物24只.采用盐酸氯胺酮50

5、g/kg腹腔注射麻醉，给予对照组大鼠尾静脉注射生理盐水，实验组大鼠尾静脉注射LPS，剂量为4g/kg，治疗组大鼠尾静脉在注射LPS前1h由腹腔注射0.036l/LPTX10g/kg.确认实验组复制ALI模型成功之后，即刻给予PTX10g/kg腹腔注射，间隔1h重复给药，连续5次；其余两组大鼠与实验组同样时间间隔给予腹腔注射等容积的生理盐水.1.2.2血气及肺水肿参数测定注射LPS6h后，放血活杀动物之前，经由左心室采血3L，2L用于便携式血气分析仪做血气分析，其余1L血液别离血清后置-20冰箱冷冻待测定.活杀动物快速肺组织取材，常规包埋，切片进展HE染色.取材完毕，切开大鼠气管，经气管插入12

6、号针头行肺泡灌洗，每次1L，总量为5L，记录搜集的肺泡灌洗液量，并于显微镜下计数肺泡灌洗液中细胞总数及中性粒细胞，巨噬细胞数并计算所占百分比.测定各组动脉血气指标、肺系数、肺含水量、肺通透性指数；蛋白含量测定按Lry法进展，使用752型分光光度计比色(波长700n)，将各样品A值与标准曲线比照后，计算蛋白含量并以大鼠肺泡灌洗液上清液蛋白含量比血浆蛋白含量得到肺通透指数(lungpenetratinindex,LPI).1.2.3血液及组织中N,iNS,SD,DA的测定大鼠血中N含量测定按试剂操作说明书进展.注射LPS6h后迅速处死大鼠，取出一定量的肺组织，约222体积大小组织，按15%(/V)

7、比例参加预冷的BufferA，在冰浴中匀浆器匀浆，4，20000g离心30in，搜集上清液即为NS提取液，置-20保存.采用Lry法测定iNS提取液蛋白含量.SD，DA检测按试剂盒操作说明书进展.2结果2.1大鼠急性肺损伤模型评价SD大鼠静脉注射LPS后，可见大鼠呼吸加快，常规肺组织大体切片显微镜观察结果显示符合ALI的诊断标准3，说明模型制作成功，可用于实验研究图1.2.2PTX对大鼠血清各项血气指标以及巨噬细胞的影响检测结果显示，与对照组相比，实验组动脉血氧分压(Pa2)，pH值明显下降，二氧化碳分压(Pa2)明显升高(P0.01)；与实验组相比治疗组Pa2，pH值升高，Pa2降低(P0.

8、05)；治疗组与对照组相比，Pa2，Pa2和pH值那么无明显变化.治疗组肺泡灌洗液中的中性粒细胞及巨噬细胞比例相对实验组那么明显下降(P0.05，表1).表1各项血气指标和肺泡灌洗液中巨噬细胞的变化(略)2.3PTX对大鼠肺水肿的影响与对照组相比，实验组大鼠肺系数、肺水含LPI明显升高；治疗组与实验组相比肺系数、肺水含量、LPI下降，与对照组接近(表2).表2各组大鼠肺水肿参数的变化比拟(略)2.4PTX对大鼠肺组织中SD活性，DA含量的影响与对照组相比，治疗组肺组织中SD活性降低，DA含量增加，且差异具有统计学意义(P0.05)；与实验组相比，治疗组肺组织中SD活性增加，DA含量降低，差异具有统计学意义(P0.05，表3).表3PTX对大鼠脑组织中SD,DA,iNS和N的影响(略)2.5PTX对大鼠肺组织中iNS活性，N含量的影响与对照组相比，治疗组肺组织中iNS活性降低，N含量增加，差异具有统计学意义(P0.05)；与实验组相比，治疗组脑组织中iNS活性增加，N含量降低，差异具有统计学意义(P0.05，表3).2.6PTX对大鼠肺组织形态学的影响注射LPS后大鼠肺血管内巳有中性粒细胞滞留、聚集.随时间延长，滞留、聚集现象更加明显，并有向毛细血管外移行增多趋势.1h