微生物学复习提纲 周德庆

1、微生物复习整理资料（知识点版本）P3巴斯德设计曲颈瓶推翻自然发生说建立胚种学说微生物学的奠基人P5科赫细菌学的奠基人实践-理论-实践的开创者建立了很多应用性的分支学科进入寻找病原菌的黄金时期P7-9微生物的五大共性：体积小，面积大；吸收多，转化快；生长旺，繁殖快E.coli分裂一次只需要15分钟左右；适应强，易变异；分布广，种类多。（联系作为模式生物的原因）P13细菌直径0.5pm长度0.5-5pm广义的细菌指所有的原核生物分为球菌、杆菌、弧菌、螺旋菌最大的细菌0.3-1mm最小的细菌直径0.2-0.5pmP15的几种染色方法活菌染色：美蓝染色、TTC染色P16关于细胞壁固定细胞外形提供机械强

2、度阻拦大分子有害物质进入细菌赋予细菌抗原性和对于抗生素的敏感性作为鞭毛等细胞结构生长所必须的条件革兰氏阳性菌细胞壁：百分之九十的肽聚糖含量较多的磷壁酸无脂质基本无蛋白质革兰氏阴性菌细胞壁：含量很低的肽聚糖无磷壁酸含量较高的脂质含量较高的蛋白质革兰氏的染色原理：通过结晶紫液和碘液媒染后形成不溶于水的结晶紫和碘的复合物。G+细菌因为细胞壁较厚，肽聚糖网层次多且交联致密，所以脱色剂（乙醇）处理的时候，失水网孔缩小且不含类脂所以不会溶出缝隙能把结晶紫与碘的复合物牢牢留在壁内，保持紫色。而G-细菌细胞壁薄而且外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄交联程度差，遇到乙醇之后外膜（类脂）迅速溶解，所以细胞退成无色。此时

3、再进行复染（沙黄等红色染料，此时G-为红色，G+为紫色（紫色+红色）肽聚糖的结构：分为肽和聚糖两个部分肽包括四肽尾和肽桥聚糖由N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸两种单糖相互间隔连接形成长链（结合P17的图片）三个部分双糖四肽尾肽桥合理想象其中两种单糖之间以p-1,4-糖苷键连接阴性和阳性的肽聚糖差别：四肽尾的第三个氨基酸分子不同且没有特殊的肽桥，形成的肽聚糖网套非常的稀疏，机械强度很差。磷壁酸的功能（阳性）1）浓缩细胞周围的镁离子和钙离子以提高细胞膜上的一些酶合成的活力；2）贮藏元素；调节细胞的自溶素的活力，防止细胞自溶；3）作为噬菌体的特异性吸附受体；赋予细菌特异表面抗原用于鉴定；关于脂多糖（位

4、于外膜成分，外膜是阴性细菌细胞壁所特有的结构）：脂多糖结构：位于细胞壁最外层，类脂多糖类物质，由类脂A、核心多糖和0-特异侧链3部分组成脂多糖作用（脂多糖，非外膜）：1）类脂A是细菌致病物质内毒素的物质基础；2）负电荷较强，吸附镁离子和钙离子提高其在细胞表面浓度；3）结构多变，使细菌细胞表面抗原决定簇呈现多样性；4）噬菌体在细胞表面的吸附受体；具有选择性吸收功能；5）因为存在LPS外膜，所以阴性菌更能抵抗毒物和抗生素的毒害;抗酸性细菌细胞壁：革兰氏阳性；细胞壁中有大量的分枝菌酸，所以被酸性复红染色后不能像其他的G+细菌那样被盐酸乙醇脱色。在细胞壁外层有一层厚实的、无定型的蜡质可以使营养物、染料

5、和抗菌药物难以进入，所以生长很缓慢，对药物有高度的抵抗，因为类脂达到60%。肽聚糖含量低，所以反应为阳性但实际上构造像G-学习青霉素（破坏肽桥）和溶菌酶（”,4-糖苷键）的作用原理P25细胞质：被细胞膜包围的除了核以外的一切的半透明、胶体状、颗粒状物质的总称。内含物：贮藏物、磁小体、羧酶体、气泡。荚膜：看P27的内容荚膜为糖被的一种，为部分细菌细胞壁外的一层厚度不定的透明胶状物质，荚膜含水量高，大小相对较大，有固定层次，可起到保护作用，贮藏养料，控制部分离子交换，表面附着，信息识别和堆积代谢废物等作用。鞭毛及其结构：看P28-29的内容鞭毛具备运动功能，其中的基体包含以鞭毛杆为中心的，从上至下

6、的四个环，分别为L，P，S-M和C环，S-M和C附近包含Mot蛋白和Fli蛋白。基体类似于超微型马达，驱动基体自身带动鞭毛丝发生运动，其间通过钩形鞘连接。关于芽孢：在某些细菌的生长发育后期形成的细胞内形成一个圆形或椭圆形厚壁含水量低抗逆性强的休眠构造，每一个营养细胞内仅形成一个芽孢，所以其没有繁殖功能。抗逆性最强的一种构造，抗热、抗化学药物也抗辐射。G+细菌的芽孢杆菌属和梭菌属主要可以产生芽孢。芽孢形成的原因和复生看P31其结构也在31页芽孢，从外至内：孢外壁（透性差），芽孢衣（多价阳离子难通过），皮层（体积大，渗透压高，含水多），芽孢壁（可发展为新的壁），芽孢质膜（发展为新细胞膜），芽孢质（

7、含核糖体，RNA，酶类等），芽孢核区（DNA）,其中从芽孢壁到核区为核心。其耐热性假说之一为渗透调节皮层膨胀学说：芽孢衣对多价阳离子和水的透性差，皮层的高离子强度吸收了核心的水分，造成了核心高度失水，皮层高度膨胀，以此赋予了芽孢高度耐热性。伴孢晶体：少数芽孢杆菌产生的糖蛋白昆虫毒素，部分形成于芽孢旁，对特定宿主有毒杀作用而对人畜无害，可作为生物农药。P34菌落的定义：将单个细菌（或者其他的微生物）细胞或一小堆同种细胞接种到固体培养基表面（内层），当它占有一定的发展空间并处于适宜的培养条件下的时候，就会迅速生长繁殖并形成细胞堆，此乃菌落。看34页和63页放线菌的繁殖方式P38页上方放线菌有两种菌

8、丝，基内菌丝可以吸收营养物质与排泄代谢废物，气生菌丝成熟后有产生分生孢子的结构。其繁殖可以依靠孢子（无性）或者菌丝（菌丝的断裂。P54酵母菌的特点其芽殖的方式P56重点关注芽殖同时也稍微看一下其他的生殖方式酵母菌总体约60%为蛋白质结构，可直接作为牲畜饲料成分之一，其细胞膜上的麦角甾醇为维生素D的前体，可以作为维生素D的来源之一。酵母菌既可以无性繁殖，如芽殖（快速，裂殖（与二分裂相似，产生无性孢子，也可以有性繁殖（形成子囊和子囊孢子。P67病毒的结构核酸蛋白质关注病毒的特性直径在100nm左右重点关注二十面体结构以及其他出现的对称结构。只有螺旋对称和二十面体对称螺旋对称：杆状、丝状、卷曲状、弹

9、状以及还有复合对称两种一起的比如噬菌体其中螺旋对称的代表：烟草花叶病毒二十面体对称的代表：腺病毒（主要引起肺炎）复合对称的代表：T偶数噬菌体记住病毒细菌真菌三类微生物个体直径比约为1:10:100P76病毒的一步生长曲线：定量描述烈性噬菌体生长规律的实验曲线，叫做一步生长曲线。分为潜伏期，裂解期和平稳期。主要看书上的内容（关注噬菌体数目的变化作为变量观察点）1）潜伏期指噬菌体的核酸侵入宿主细胞后至第一个成熟噬菌体粒子释放前的一段时间，可分为隐晦期（宿主细胞裂解液无侵染力）和胞内累积期（裂解液已具备部分侵染力）2）裂解期指潜伏期后宿主细胞迅速裂解，溶液中噬菌体粒子急剧增多的时间3）平稳期指宿主细

10、胞全部裂解完毕，溶液中噬菌体效价达最高值的时期。P77溶源性：病毒侵入相应宿主细胞后，由于前者的基因组整合到后者的基因组上，并随后者的复制而同步进行复制，因此，这种温和噬菌体的侵入不引起宿主细胞的裂解。溶源菌是一种被温和噬菌体感染后能够长期互存而不会迅速裂解的宿主细菌（不是病毒哈，是宿主！）检查溶源菌的方法：将少量的溶源菌和大量的敏感性指示菌（遇溶源菌裂解后所释放的温和噬菌体会发生裂解循环的）相混合，然后混匀到平板，溶源菌会长成小菌落，因为溶源菌会有极少数会裂解，其中的噬菌体就会不断侵染周围的菌苔，所以会形成一个个中央有溶源菌的小菌落，周围有透明圈围着的噬菌斑。朊病毒：称作蛋白侵染子，不含核酸

11、的传染性蛋白质分子，能够引起宿主体内或者现成的同类蛋白质分子发生与其相似的感应性构相变化从而使宿主致病。朊病毒侵入大脑的过程：借食物进入消化管，再经淋巴系统侵入大脑，所以在患者的扁桃体中科院找到朊病毒颗粒。朊病毒和构型变化的蛋白PrPc和PrPSc均来源于宿主中同一编码基因，并具有相同的氨基酸序列，但是三维结构相差甚远（蛋白质三维结构的重要性）。关于培养基：常用的碳源：糖类，其次是有机酸类、醇类和脂质。在糖类中最优的是单糖、葡萄糖，在多糖中最优的是淀粉双功能营养物：对一切异养微生物来说，他的碳源同时又作为能源，所以这种碳源成为双功能营养物（difunctionalnutrient）生长因子：对

12、于调节微生物正常代谢所必需的，但不能用简单的碳、氮源自行合成的微量有机物。需要量一般很少。广义的生长因子除了维生素，还包括碱基、卟啉以及其衍生物、甾醇、胺类，C4-C6的分支或者直链脂肪酸，有时候还包括氨基酸缺陷突变株所需要的氨基酸；狭义的生长因子仅仅限于维生素；通过对于生长因子需要与否，把微生物分为三种类型：1）生长因子自养性微生物（不需要从外界吸收任何的生长因子，多数真菌放线菌以及不少细菌都属于这类）2）生长因子异养型微生物（需要从外界吸收多种生长因子才能维持正常的生活，比如各种乳酸菌、动物致病菌等，乳酸菌需要多种微生物）3）生长因子过量合成型微生物（能在代谢活动中合成并大量分泌某些维生素

13、等生长因子，因此可以作为有关维生素的生产菌种）在我们配置培养基时一般可以用生长因子含量丰富的天然物质作为原料来保证微生物对于他们的需要（比如母膏、玉米浆、肝浸液、麦芽汁等）设计培养基四个原则：1、目的明确：明确培养什么菌、获产什么东西，作实验室研究还是大量生产。根据不同的工作目的来配置培养基；2、营养协调：微生物细胞内各种成分间有比较稳定的比例，一般顺序是水碳源（能源）氮源P、S源K、Mg生长因子；其中碳源和氮源的含量之比称作碳氮比，为微生物培养基中所含碳源中的碳原子摩尔数和氮源中氮原子摩尔数之比。在不同的分子中，其碳氮比差别很大。一般真菌培养基的碳氮比比较大，而细菌以及动物病原菌的培养基碳氮

14、比小一些；3、理化适宜：培养基的pH、渗透压、水活度和氧化还原电势等物理化学条件比较适宜；在一些微生物的代谢过程中会引起培养基pH改变的代谢产物，所以需要进行培养基成分调节，称作“内源调节”例如添加缓冲对（K2HP04和KH2PO4可以把溶液的pH稳定在6.8）用CaC03或者小苏打作为备用碱进行调节（不会改变本生的pH，但是在菌种产酸的时候可以溶解碳酸石起到稳定酸碱度的作用）与内源调节相对的还有外源调节：按实际需要不断从外界流入酸液或者碱液，以调整培养液的pH保持稳定。4、经济节约：坚守经济节约的原则，以粗代精、以“野”代“家”以废代好、以简代繁、以氮代朊（尽量利用氨基酸自养微生物的生物合成

15、能力，用廉价的大气中的氮、铵盐等来代替氨基酸或者蛋白质，作为配置培养基的原料）、以纤代糖、以烃代粮、以“国”代“进；”培养基的基本分类（按组成成分分）：1）天然培养基（利用动植物或者微生物体包括其提取物制成的培养基）2）组合培养基（按微生物营养要求精确设计后用多种高纯化学试剂配制而成的培养基）3）半组合培养基（主要以化学试剂配制同时还加有某种天然成分的培养基）培养基的基本分类（按功能分类）：1）选择性培养基（根据某微生物的特殊营养要求对其化学、物理因素抗性的原理设计而成的培养基，可以使劣势菌变成优势菌的功能）在培养基中加入营养物把它制成一种加富性选择培养基，起到富集或者增殖的目的。或者利用该分

16、离对象对某种制菌物质所特有的抗性，在培养时加入这种制菌物质，经过培养使得原有试样中对此抑制剂表现敏感的优势菌的生长受到抑制，而分离对象便可以大量繁殖，这种称作抑制性选择培养基。我们设计的选择性培养基通常兼有上述两种功能，充分提高其选择效率。甘露醇可以富集自生固氮菌，纤维素可以富集纤维分解菌，石蜡油可以富集分解石油的微生物，较浓的糖液可以用来富集酵母菌。抑制性的物质可以选择染料（结晶紫）、抗生素、脱氧胆酸钠和叠氮化钠等关于氧化的四条途径以及硝化作用生物固氮作用详见生物化学书P140好养保护机制：呼吸保护：固氮菌科的菌种能以极强的呼吸作用迅速将周围环境中的氧消耗掉，使细胞周围处于低氧状态，从而保护

17、固氮酶构象保护：在高氧分压条件下固氮酶能形成一个无固氮活性但能够防止氧害的特殊构象，称之为构象保护。构象保护的原理是存在一种耐氧蛋白也就是铁硫蛋白II，which在高氧条件下可以和固氮酶的两个组分形成耐氧的复合物。P153微生物的一步生长曲线：根据微生物的生长速率常数（每小时分裂次数R不同），把典型的生长曲线粗分为1）延滞期（少量单细胞微生物接种到新鲜培养液中后，在开始培养的一段时间内，因为代谢系统需要适应新的环境，细胞数目没有增加的一段时期，但是细胞形态变大或者增长，且RNA含量高合成代谢十分活跃。影响延滞期长短的因素除菌种外还和接种龄、接种量培养基成分和种子损伤度有关）2）指数期（紧接着延

18、滞期的一段细胞数以几何级数增长的时期）3）稳定期（又称恒定期或者最高生长期，特点是生长速率常数R等于零，此时新繁殖的细胞数和衰亡的细胞数相等，菌体产量和营养物质消耗间呈现出了有规律的比例关系）和4）衰亡期（微生物的个体死亡速度超过新生速度，整个群体呈现负增长的状态）四个时期其中影响指数期的因素（point）:1）菌种（不同菌种代时很大）2）营养成分（在营养丰富的培养基上代时比较短）3）营养物浓度（既可以影响生长速率也可以影响生长总量）4）培养温度连续培养:向容器中连续流加新鲜培养液，使微生物的液体培养物长期维持稳定、高速生长状态的一种溢流培养技术，也称作开放培养。相对的是上述典型生长曲线所采用

19、的单批培养或者密闭培养而言的。高密度培养:微生物在液体培养条件下细胞群体密度超过常规培养十倍以上时候的生长状态或培养技术，现在其技术主要用在基因工程菌（主要是E.coli）生产多肽类药物中。理想条件下，E.coli的高密度是可以达到200g/l甚至更多。P160影响微生物生长的主要因素:温度、氧气、pH其中有关氧气的五种微生物类型进行记忆:1）专性好氧菌:必须在较高浓度分子氧的条件下才能生长，他们有完整的呼吸链，以分子氧作为最终归的氢受体；2）兼性厌氧菌:在有氧或无氧条件下都可以生长，在有氧时靠呼吸产能，在无氧时靠发酵或者无氧呼吸产能，许多酵母菌和不少细菌都是兼性厌氧菌；3）微好氧菌：只能在较

20、低的氧分压（1.01-3.04kpa,平时正常大气的氧分压是20.2kpa）下才能正常生长的微生物，也是通过呼吸链并且以氧为最终的氢受体产能；4）耐氧菌：在分子氧存在下进行发酵性厌氧生活的厌氧菌，他们的生长不需要任何氧但是分子氧对他们无害，他们不具有呼吸链。5）厌氧菌：有一般厌氧菌和严格厌氧菌之分，分子氧对他们有毒，即使短期接触也会抑制甚至致死。生命活动是通过发酵、无氧呼吸、循环光合磷酸化或者甲烷发酵所提供的。P165调节pH:治标”过酸时加入NaOH或者Na2CO3进行中和，过碱时加入H2SO4或者HCL进行碱液中和。“治本”过酸时加入适当氮源比如尿素、NaNO3或者蛋白质或提高通气量，过碱

21、时添加适当碳源比如糖、乳酸、醋酸或者柠檬酸或者适当降低通气量最适ph：般放线菌（7.0-8.0）般酵母菌（3.8-6.0）般霉菌（4.0-5.8）P172概念记忆：1）灭菌：采用强烈的理化因素使任何物体内外部的切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施，有高温灭菌、辐射灭菌。杀菌指菌体虽死但形体尚存，溶菌指菌体杀死后细胞发生自溶、裂解等而消失的现象。2）消毒：采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部部分对人体或动植物有害的病原菌，而对被消毒对象基本无害的方法，例如常见的药剂消毒，还有对啤酒等进行的巴氏消毒法。3）防腐：利用某种理化因素完全抑制霉腐微生物的生长繁殖，通过制菌作用防止食品、生物制品等对

22、象发生霉腐的措施，方法有低温、缺氧、干燥、高渗、高酸、高纯度、加防腐剂等。4）化疗：利用高度选择毒力对病原菌具有高度毒力而对其宿主基本无害的化学物质来一直宿主体内病原微生物的生长繁殖，这类具有作用的化学物质成为化学治疗剂，包含合成药物、抗生素、生物药物素和若干中草药的有效成分。可以学习P173的表格进行学习比较四种控制有害微生物方式的异同P173高温灭菌的两种种类干热灭菌法：金属器械或者洗净的玻璃器皿放入电热烘箱内，在15091709下维持12h后可以达到彻底灭菌（包括芽孢）的目的，干热可以使细胞膜破坏，蛋白质变性原生质干燥。其中灼烧是一种最彻底的干热灭菌法但是仅限于接种环、接种针的灭菌。湿热

23、灭菌法；利用高温的水或水蒸气进行灭菌的方法，多指用1009以上的加压蒸汽进行灭菌，在同样的温度和作用时间下，湿热灭菌的效果更好。过滤除菌法：对培养液内某些不耐热成分有时候可以采用过滤除菌法除菌，利用各种滤器来达到，例如滤膜过滤装置、烧结玻璃板过滤器等。过滤除菌的缺点是无法滤除液体中的病毒和噬菌体。P176最低抑制浓度：评定某化学药物药效强弱的指标，指在一定条件下某化学药剂完全抑制特定微生物生长时的最低浓度；半致死剂量：评定药物毒性强弱的指标，指在一定条件下，某化学药剂能够杀死50%试验动物时的剂量；最低致死剂量:评定药物毒性强弱的另一指标，指在一定条件下，某化学药物能引起试验动物群体100%死

24、亡率的最低剂量（一般用试管稀释法测定。在一排试管中，分别注入培养液和不同稀释度的化学药剂，经过培养后，可以观察到其浑浊度以确定是否生长）P177石炭酸系数：这一指标指的是在一定时间内，被试药剂能杀死全部供试菌的最高稀释度与达到同效的石炭酸的最高稀释度之比，一般规定的处理时间为10min，供试菌为伤寒沙门氏菌（一般用来测定表面消毒剂的相对杀菌强度，which对活细胞、病毒粒和生物大分子都具有毒性的药剂，适用于消除传播媒介物上的病原体）P178磺胺类药物是一种抗代谢药物which在化学结构上与细胞内必要代谢物结构相似，并可干扰正常代谢活动的化学物质。磺胺类的作用机制是其结构域细菌的一种生长因子对氨

25、基阿苯甲酸高度相似，所以是它的代谢类似物，所以两者之间会发生拮抗作用。关于实际例子可以看P178的例子二氢蝶酸合成酶的时候会错把磺胺作为底物，从而合成无功能的假二氢叶酸。所以在这例子中凡能够利用二氢蝶啶和PABA合成叶酸的细菌就无法合成叶酸，所以生长会受到抑制。P180抗生素如何作用：抑制细胞壁合成、引起细胞壁降解、干扰细胞膜功能、抑制蛋白质合成、抑制DNA合成、抑制DNA复制、抑制RNA转录、抑制RNA合成关于具体的例子可以看180页的表格微生物产生耐药性的原因：1）产生一种能使药物失去活性的酶2）把药物作用点靶点加以修饰和改变形成“救护途径(变为仍能合成原来产物的新途径)使药物不能透过细胞

26、膜通过主动外排系统把进入细胞内的药物泵出细胞外。半合成抗生素：对天然抗生素的结构进行人为改造后的抗生素，具有毒性低、抗菌活力高的特点，但是也存在易过敏、不稳定、不能口服和易产生耐药菌株等缺点。P186模式生物的特点：物种与代谢类型的多样性；个体的体制极其简单；营养体一般都是单倍体；易于在成分简单明确的组合培养基上大量繁殖；繁殖速度极快；易于积累不同的中间代谢物或最终产物；菌落形态的可见性和多样性；环境条件对微生物群体中各个体的作用的直接性和均一性；易于形成营养缺陷型突变菌株和抗药性突变株；各种微生物一般都有其相应的病毒；以及存在多种处于进化过程中、富有特色的原始有性生殖方式；P187看看三个经

27、典的转化实验P194质粒：凡游离于原核生物核基因组外，具有独立复制能力的小型共价闭合环状的dsDNA分子，就是典型的质粒。仔细阅读194-195质粒的介绍以及质粒的分类质粒的分类：1）结合性质粒；2）抗药性质粒（抗各种抗生素、重金属等离子）；3）产细菌素和抗生素质粒；4）具有生理功能的质粒（利用乳糖、蔗糖、尿素固氮等；降解辛烷、樟脑水杨酸等；产生色素；结瘤和共生固氮）；5）产毒质粒（外毒素、K抗原、内毒素；致瘤；引起龋齿；产凝固酶、溶血素、溶纤维蛋白酶和肠毒素）典型质粒：F质粒：是大肠杆菌等细菌决定性别并具有转移能力的质粒R质粒：又称R因子或者抗性因子，其一称抗性转移因子，主要调节DNA复制和

28、拷贝数的基因以及转移基因，具有转移功能；其二为抗性决定子，其上含各种抗性基因，如抗青霉、氨苄青霉素等。Col质粒：大肠杆菌素质粒，具有通过抑制复制、转录、翻译或能量代谢等方式而专一地杀死他种肠道菌或同种其他菌株的能力。Ti质粒：诱癌质粒，其上的T-DNA片段会在有一些植物受伤后与植物细胞的核基因整合，合成正常植株所没有的冠瘿碱类，从而破坏细胞分裂的激素调节系统使其转化为癌细胞。P198营养缺陷型（丧失合成生长因子的能力）：某一野生型菌株因发生基因突变而丧失合成一种或几种生长因子、碱基或氨基酸的能力，因而不能再基本培养基上正常生长繁殖的变异类型。抗性突变型（产生抗性）：发生基因突变而产生对某化学

29、药物、致死物理因子或噬菌体的抗性变异类型，可以通过加相应药物、用相应物理因子处理或含噬菌体的培养基平板上选出。条件致死突变型（某种条件会死亡）：某菌株或病毒经基因突变后，在某种条件下可以正常生长，繁殖并呈现其固有的表型，而在另一条件下却无法正常生长、繁殖。形态突变型、抗原突变型、产量突变型P200看看三个经典的突变实验P206DNA修复作用：光复活作用：把经UV照射后的微生物立即暴露在可见光下就会出现明显降低其死亡率的现象。经UV照射后的带有嘧啶二聚体的DNA分子在黑暗下会被一种光激活酶一一光解酶结合，这种复合物在300500nm的可见光下，其中的酶会因获得光能而被激活并使二聚体重新分解为单体

30、。切除修复：活细胞内一种用于被UV等诱变剂损伤后的DNA的修复方式（又称作暗修复），通过酶切作用去除嘧啶二聚体随后重新合成一段正常的DNA链的核酸修复方式。P209诱变育种的几个原则：1）选择简便有效的诱变剂，一般使用UV照射最为方便，一般用15W的UV灯，照射距离为30cm在无可见光的接种室或箱体内进行。2）挑选优良的出发菌株，最好选用来自生产中的自发突变菌株；3）选用具有有利于进一步研究或应用性状的菌株，如生长快、营养要求低；4）选用已发生过其他突变的菌株、选用对诱变剂敏感性较高的增变变异株。处理单细胞或单孢子悬液，尽量选用单核细胞，如霉菌或放线菌的分生孢子或细菌的芽孢等。选用最适的诱变剂

31、量，充分利用复合处理的协同效应（同一诱变剂的重复使用，两种或多种诱变剂的先后使用，以及两种诱变剂的同时使用）Amestest（艾姆斯试验）（非常重要）是一种利用细菌营养缺陷型的回复突变来检测环境或食品中是否存在化学致癌剂的简便有效办法。营养缺陷型鉴定看书上P214216关于营养缺陷型菌株的几种特定的检测方法其中特别注意的有：生长谱法：在混有供试菌的基本培养基平板表面点加微量营养物，视某营养物的周围是否有菌落来确定该供试菌的营养要求。（在培养皿上分区并添加不同的营养物质）P217原核生物的基因重组特点：1）片段性（仅仅有一小段DNA序列参与重组）2）单向性（从供体菌向受体菌作单方面转移）3）多样

32、性（转移机制独特而多样）主要的原核基因重组方式：转化：直接吸收供体菌的DNA片段从而获得部分遗传性状的现象，称为转化。后代称为转化子。其中有感受态（重要）：感受态是指受体细胞最易接受外源DNA片段并能实现转化的一种生理状态，虽受遗传控制，但是表现得差别却很大。调节感受态的一类特异蛋白称为感受态因子，主要有三种主要成分：膜相关DNA结合蛋白、细胞壁自溶素和几种核酸酶。转化因子：离体的DNA片段，一般是一条环状DNA长链，通常只是15kb左右。转导：通过缺陷噬菌体为媒介，把供体细胞中的小片段DNA携带到受体细胞中，通过交换与整合，使后者获得前者部分遗传性状的现象。1）普遍转导：分为完全普遍转导和流

33、产普遍转导。指的是通过极少数完全缺陷噬菌体对供体菌基因组上任何小片段DNA进行“误包”，而将其遗传性状传递给受体菌的现象称为普遍转导。一般用温和噬菌体作为普遍转导的媒介，其中流产普遍转导指的是经转导噬菌体的媒介获得了供体菌DNA片段的受体菌在目标微生物中既不交换也不整合和复制，仅表现稳定的转录、翻译和性状表达就成为流产转导。2）局限转导：通过部分缺陷的温和噬菌体把少数供体菌的特定基因携带到受体菌并进行整合、重组，形成局限转导子的现象。其中又分为低频转导和高频转导，字面意思。3）溶源转变：正常的温和噬菌体感染其宿主而使其发生溶源化时，噬菌体基因整合到了宿主的核基因组上，而使宿主获得了除免疫性外的

34、新遗传性状的现象。与局限转导的区别：1）这是不携带任何外源基因的正常噬菌体；2）是噬菌体基因而不是供体菌基因提供了宿主新的性状；3）新性状是宿主细胞溶源化时候的表现，不是经遗传重组形成的稳定转导子。4）获得的性状可随噬菌体的消失而同时消失；接合：供体菌（雄性）通过性菌毛和受体菌（雌性）直接接触，把F质粒或其携带的同长度的核基因组片段传递给后者，使后者获得若干新遗传性状的现象称为接合。E.coli中的四种接合型菌株：1)F+菌株：细胞内存在一个或几个F质粒，并在细胞表面生一至几条性菌毛的菌株。与F-菌株接合时通过性菌毛可以把F质粒传递到F-菌株内F+中的质粒也得到复制，从而得到两个F+菌株；F-

35、菌株:与F+菌株相对应的，细胞内无F质粒、细胞表面无性菌毛的菌株；Hfr菌株(高频重组菌株)：F质粒转变为在核染色体组特定位点上的整合态，Hfr与F-菌株接合后，发生基因重组的频率比单纯F+和F-接合后的频率高出数百倍。F菌株：Hfr菌株细胞内F质粒因不正常切离而脱离染色体组，可以形成游离的、携带整合位点临近一小段核染色体基因的特殊F质粒，F质粒或者F因子。原生质体融合：通过人为的方法，使遗传性状不同的两个细胞的原生质体进行融合，借以获得兼有双亲遗传性状的稳定重组子的过程，由此获得的重组子成为融合子。P231衰退是指某纯种微生物群体中的个别个体由于发生自发突变的结果，而使该物种原有一系列生物学

36、性状发生衰退型的量变或者质变的现象。特征有：1)原有形态性状变得不典型生长速度变慢，产生的孢子变少、代谢产物的生产能力下降致病菌对于宿主的侵染力下降、对外界不良条件包括低温、高温或噬菌体的抵抗能力下降。防止衰退的方法：1）控制传代次数：尽量避免不必要的移种和传代，并将必要的传代降低到最低限度。2）创造良好的培养条件3）利用不易衰退的细胞传代4）采用有效的菌种保藏方法复壮：一种积极的措施，即在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退之前，经常有意识的采取纯种分离和生产性状的测定工作，从中选择到自发的正变个体（狭义指的是菌种已经发生衰退的情况下，通过纯种分离和测定典型性状、生产性能等指标，从已衰退的群体中

37、筛选出少数尚未退化的个体，以达到恢复原菌株固有性状的相应措施）菌种保藏法：1）冷冻干燥保藏法：集中了低温、干燥、缺氧和加保护剂等多种有利菌种保藏条件于一身，可以达到长期保藏菌种的效果。（对石油发酵微生物不适宜）2）液氮超低温保藏法：把微生物细胞混悬于含保护剂（20%甘油、10%DMSO等）的液体培养基中，适宜保存难以用冷冻干燥保藏法保藏的微生物。P239土壤中微生物数量的排序（说是肯定要考）细菌（108）放线菌（107）霉菌（106，孢子）酵母菌（105）藻类（104）原生动物（103）P241饮用水的微生物标准：良好的饮用水，其细菌总数应少于100个每毫升，当大于500个每毫升的时候就不宜作

38、为饮用水了。检验饮用水的微生物种类主要采用以E.coli为代表的大肠杆菌数为指标的大肠菌群实验。which是温血动物肠道中的正常菌群，数量极多，根据指标可以灵敏推断该水源的污染程度。大肠杆菌的测定通常可以用滤膜培养法，在选择性和鉴别性培养基上进行，然后数出其上所长的菌落数。此外，也要求饮用水中可引起人体肝损伤和肝癌的微囊蓝细菌毒素的含量不超过1pg/L滤膜培养法：1：稀释水样,滤膜灭菌.2：用无菌镊子夹取滤膜边缘,粗糙面向上,贴在无菌虑床上,固定好滤器.3：将水样注入滤器中,打开滤器阀门,抽滤.4：抽滤完毕,用无菌镊子夹取滤膜边缘,移放到相应的培养基上.（滤膜的截留细菌面向上,且与培养基完全贴

39、紧）.5：倒置培养,根据菌种的不同选择合适的温度及培养时间.P248微生态学：1）研究正常菌群本质及其与宿主间的相互关系2）阐明微生态平衡与失调的机制；3）指导微生态制剂的研制，以用于调整人体的微生态平衡。人体有五大微生态系统，包括消化道、呼吸道、泌尿生殖道、口腔和皮肤，其中以消化道最值得注意。在胃肠道中的微生物数量占了人体总携带量的78.7%厌氧菌是肠道正常菌群的主体（约占99%）P249宏基因组：就是人体的从父母遗传的人体基因组和出生后才入住人体中的，尤其是肠道中1000种左右的正常菌群共生微生物群的总基因组，即宏基因（metagenomics），其中包含330余万个编码基因（人体基因的1

40、50倍），与人体防治慢性病、富贵病有重要的联系。微生态制剂：依据微生态学理论而制成的含有有益菌的活菌制剂，其功能在于维持宿主的微生态平衡、调整宿主的微生态失调并兼有其他的保健功能。which主要分为益生菌剂和益生元两类：益生菌剂：一类分离自正常菌群，以高含量活菌为主体，一般以口服或黏膜途径投入，有助于改善宿主特定部位微生态平衡并兼有若干其他有益生理活性的生物制剂。用于生产益生菌剂的优良菌种主要属于严格厌氧菌类；益生元:又称双歧因子，专指一类人体不能消化吸收的低聚糖类食物成分，如寡果糖、寡半乳糖、菊粉、寡异麦芽糖和寡木糖等。which进入大肠后，可以被其中的双歧杆菌、乳酸菌等所消化吸收、促进了这类有益菌的增殖的产生和对宿主健康有益的物质，进而发挥肠道调节作用微生态平衡和其他的保健作用。P276毒力：表示病原体致病能力的强弱，对细菌性病原体来说，毒力就