DB32-T 2827-2015大蒜脱毒快繁技术规程-（高清现行）

1、ICS 65.020.20B31备案号：47711-2015DB32江苏省地方标准DB32/T 2827-2015大蒜脱毒快繁技术规程Technical regulations for rapid propagation of virus-free garlic2015 - 10 - 20 发布2015 - 12 - 20 实施江苏省质量技术监督局发 布DB32/T 2827-2015I前言本标准按照GB/T 1.1-2009标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写编制。本标准由江苏徐淮地区徐州农业科学研究所提出。本标准起草单位：江苏徐淮地区徐州农业科学研究所。本标准主要起草人：杨峰、陆

2、信娟、樊继德、张允刚、李勇。DB32/T 2827-2015 PAGE 3大蒜脱毒快繁技术规程范围本标准规定了大蒜脱毒快繁技术培养基、外植体、接种、培养、病毒检测、驯化与培育。本标准适用于江苏省大蒜茎尖脱毒快繁。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T 405-2000 脱毒大蒜种蒜（苗）病毒检测技术规程培养基初代培养基初代培养基诱导单个大蒜茎尖产生丛生芽（表1）。增殖培养基增殖培养基诱导试管丛生芽产生鳞茎（表1）。生根培养基生根培养基诱导试管丛生芽生根（

3、表1）。表1 大蒜初代培养基、增殖培养基与生根培养基配制表培养基类型初代培养基增殖培养基生根培养基基础培养基B51/2 B51/2 B56-BA5mg/L2mg/L0.01 mg/LKT1mg/LIAA0.01mg/L0.1mg/LNAA0.1mg/L0.05 mg/L活性炭0.2%蔗糖20g/L50 g/L20g/L琼脂6g/L6g/L6g/L外植体外植体选取选择种性纯正，生长势强的大蒜品种作为脱毒外植体。外植体处理外植体取样时间56月份为外植体最佳取样时间。外植体处理方法大蒜鳞茎于05冰箱冷藏38周（因品种而异）。外植体接种茎尖消毒将鳞芽保护叶剥离，切除鳞茎贮藏叶大部分，保留含茎尖体积约为

4、3mm2mm3mm块状，移到超净工作台上，先用75%乙醇（酒精）浸润3s5s，再用配制好的20%次氯酸钠溶液中浸泡6min8min，之后用无菌水冲洗45次，再用无菌滤纸吸去表面水分，置于无菌培养皿中备用。茎尖剥取将消过毒的茎尖置于40倍体视显微镜（双筒解剖镜）下，用解剖针逐次去掉幼叶，直至露出光滑的茎尖，用解剖刀切取含茎尖的生长点0.1mm0.3mm。接种用接种针将生长点移至初代培养基，每个容器接种一个生长点，酒精灯上烘烤试管（瓶）口和纱布棉球纸帽或封口膜（盖）后封口，在管（瓶）壁上注明品种、编号和接种日期等内容。培养培养条件培养条件为温度2325、光照强度25molm-2s-137.5mol

5、m-2s-1、光照时间14h16h/d，相对湿度60%以上。培养时间培养30d40d看到茎尖生长出810个芽且明显伸长，呈绿色。鳞茎诱导将丛生芽转入增殖培养基进行培养，经过23个月后，试管内形成脱毒微鳞茎。生根诱导有小叶发生时将小茎芽转入装有生根培养基，经45个月可发育成23个叶片的初代苗。病毒检测检测方法按照NY/T 405-2000脱毒大蒜种蒜（苗）病毒检测技术规程进行，最后选留在封闭容器内繁殖的无OYDV、GCLV的再生苗株系作为脱毒试管苗。试管苗驯化与培育驯化前处理脱毒试管苗在移栽前打开瓶塞，加入自来水（加水量高于培养基表面0.5 cm），同时关闭空调于室温炼苗3天。取出试管苗，洗净培养基，保湿待栽。土壤选择选择未种植过葱蒜类蔬菜，有机质丰富、土层深厚、排水良好的微酸性沙质田块。整地施肥深翻细耙，深度20 cm30 cm。在翻地时亩施充分腐熟有机肥3000 kg5000kg，三元复合肥（有效成份含量NP205K20=121618）47 kg，尿素(N=46%)24kg。防虫网室设立防虫网选用40目，于移栽之前12个月覆盖。移栽株行距6cm8cm。定植后插小拱棚覆膜保温保湿。追施肥水越冬前喷水1次，开春后（3月上旬）结合浇水