《荧光光度法测定硫酸奎尼丁含量》实验报告

1、第1页共 页生物分析化学实验报告专业：2011级医学检验姓名：许秋燕学号：201122*【实验名称】荧光光度法测定硫酸奎尼丁含量【实验目的】掌握荧光分光光度计的基本结构及操作方法；了解荧光产生及测量的过程；掌握荧光分析法的定量分析的方法（标准曲线法）;掌握荧光影响强度的因素。【实验原理】奎尼丁是抗疟疾奎宁的右旋体，属生物碱类抗心律失常药，主要用于阵发性心动过速、心房颤抖、早博；预防室性心动过速及对房室结折返性心动过速；还可预防有症状的室上性和室性早博。奎尼丁的分子式为：C20H24O2N2H2SO4H2O,分子量为782.96.分子结构如图所示。.h2so42H2O其分子结构中具有喹啉环结构（

2、奎尼丁为奎宁的右旋体），故能产生较强的荧光，可用直接荧光法测定其荧光强度，由校正曲线法或回归方程求出试样中奎尼丁的含量。【实验仪器与试剂】仪器：F93型荧光光度计500ml容量瓶6个、5ml移液管2只1cm石英荧光比色皿1个试剂：硫酸奎尼丁标准储备液（100ug/ml）硫酸溶液（0.050mol/l）硫酸奎尼丁样品溶液【实验步骤】标准系列溶液及样品溶液配制编号123456（硫酸奎尼丁样品溶液）100ug/ml硫酸奎尼丁样1.002.003.004.005.002.50品溶液(ml)说明以上溶液均用移液管移取至50ml容量瓶用0.050mol/L硫酸溶液稀释至刻度并摇匀系列标准溶液浓(ug/ml

3、)2.004.006.008.0010.00按照下表配制硫酸奎尼丁标准系列溶液剂样品溶液荧光光谱的绘制使用F93型荧光光度计，激发波长为365nm，荧光波长调节为380nm，用lcm石英荧光比色皿，以5号溶液作为测定溶液，置于荧光光度计样品室中，盖上样品室舱盖，调节荧光光度计灵敏度，使其荧光读数在100左右，然后按下表一次调节荧光波长，测定不同荧光波长下5号溶液的荧光强度，在坐标纸上以测定的荧光强度为纵坐标，荧光波长为横坐标绘图,绘制荧光光谱，并从荧光光谱曲线上找出最大荧光波长。激发波长(nm)365荧光波长(nm)380390400410420430440450460470荧光强度值3.46

4、.418.740.461.58088.988.27968.6激发波长(nm)365荧光波长(nm)480490500510520530540550560荧光强度值61.251.237.526.417.711.67.14.12.4选择的取大荧光波长为:入牙440(nm)3测定灵敏度选择荧光波长调节到久2即440nm处，用1cm石英荧光比色皿，以5号溶液作为测定溶液，置于荧光光度计样品室中，盖上样品室舱盖，调节荧光光度计灵敏度，是荧光光强读数在100左右，测定其灵敏度为3。4标准曲线制作用1cm石英荧光比色皿，装入0.050mol/l硫酸溶液，置于荧光光度计样品室中，盖上样品室舱盖，调节荧光光度计

5、调零使其读数为0,然后按照下表依次测定标准系列溶液和样品溶液荧光强度，平均测定3次，计算荧光强度平均值，在坐标纸上以荧光强度平均值为纵坐标系列标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。编号123456(样品)荧光强度F119.737.954.671.488.624.8荧光强度F220.037.854.471.288.524.7荧光强度F320.037.754.271.488.724.5F平均值19.937.854.471.3388.624.67【实验数据处理】(一)绘图：荧光光谱的绘制：荧光光谱001O-80604020+荧光强度值380420460500540580荧光波长(nm)所以：选择的最大

6、荧光波长为:入2=440(nm)2标准曲线的绘制：（二）数据计算及分析：样品溶液中硫酸奎尼丁含量计算根据6号样品溶液荧光强度测定的平均值，在标准曲线上采用作图法求出其对应的浓度值，采用下式计算样品溶液中硫酸奎尼丁含量：C样品溶液的荧光强度平均值为：24.67；由标准曲线得读取值=2.52ug/mlC=c*50.00X读取值250=50.4ug/ml数据分析：影响本次实验测量结果较大的是：标准溶液的配置、荧光强度的测量。而影响标准溶液配置，可能是溶液的测量和定容，主要是个人的主观因素和仪器的问题。测量荧光强度的过程中，比色皿的四面都是光的，可能是在测量的过程中始终对着光的那一面不同会影响实验结果

7、，开光盖也会引起荧光光度计的微小变化，从而影响测量结果。荧光光度法，使用的溶剂应无吸收才好，否则会降低荧光强度。在本实验中溶剂为H2S04。荧光波长为440nm时，H2S04产生的拉曼光对荧光的测定几乎无影响。标准曲线也较标准。荧光光度测量中，温度和酸度也会影响测量结果【实验讨论】为什么此次实验不用必须调零？调零主要是为了避免溶液中的溶剂的拉曼光（或瑞利光）谱与待测物的荧光光谱发生重叠，对测定产生误差。而此次实验当中，能够对实验测试产生影响的是溶剂0.05mol/LH2S04在激发光下产生拉曼光。在每次测荧光强度时，都有硫酸的影响，设为F0,次测得荧光强度均为F=KC+F0，最后的结果只是标准曲线在y轴的截距不同而已，并无其他影响。由此可见，拉曼光对荧光的测定几乎无影响，所以，固然调零更好，但此次实验不用必须调零。但是在标准对比法中必须调零。【注意事项】1.在比色皿未放入荧光光度计测定光路之前，必须将样品室沧盖打开；比色皿放入荧光光度计样品室前，必须用吸水纸将外表面擦拭干净；实验中，比色皿在换装不同浓度溶液时，要记得用待测溶液润洗至少3次，不必要用纸巾去擦干比色皿内部，应为纸巾可能会有碎屑残留，造成干扰，而且比色皿内部不容易完全擦