总SOD活性检测试剂盒

1、00总SOD活性检测试剂盒(NBT法)产品编号产品名称包装S0107总SOD活性检测试剂盒(NBT法)100次产品简介：碧云天的总SOD活性检测试剂盒(NBT法TotalSuperoxideDismutaseAssayKitwithNET)是一种基于NBT的显色反应，通过比色来检测细胞.组织或其它样品中SOD即超氧化物歧化酶活性的试剂盒。超氧化物岐化(SuperoxideDismutase,SOD)能催化超氧化物阴离了发生岐化作用，生成过氧化氢(HQ)和氧气(O)是生物体内一种重要的抗氧化酶。本试剂盒采用经典的氮蓝四哇(NBT)显色法。通过黄嚓吟(Xanthine)及黄嚓吟氧化幽(Xantlu

2、neOxidase)反应系统产生超氧阴离了(O)，将氮蓝四醴还原为蓝色的川喷(fomuzcm),后者在560nm处有強吸收。而SOD可淸除超氧阴离了，从而抑制了甲喷的形成。反应液蓝色愈深，说明超氧化物岐化幽活性愈低，反Z则齣活性愈高。据此通过比色分析就可以计算出超氧化物岐化廨活性水平。本试剂盒的检测原理图如下：uricacidNBTformazanNBT00O2+H2O2基于黄瞟吟氧化幽痢联反应体系和NET的SOD腳活力检测原理图。XO：xanthineoxidase本试剂盒可以检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、全血.红细胞裂解产物、血清等生物样品中的SOD活性。个试剂盒共可以进行J00次检测。

3、包装清单:产品编号产品名称包装S0107-1SOD检测缓冲液20nilS0107-2NBT500卩1S0107-3的溶液50plSO107-4稀释液lOnil说明书1份保存条件:4C保存，半年有效。SO107-2NBT溶液需避光保存。注意事项：样本70C可保存1个月。需注意反复冻融会导致部分SOD失活。抗氧化物会对本试剂盒的检测产生T扰，例tillO.lniMascorbicacid,5m2vlGSH都会使测定出来的吸光度上升约10%。此时尽管样品没有颜色，如果设置了使用说明中的空口对照3,就可以消除样品中的抗氧化物的T扰。酚溶液可能会有少量沉淀，属正常现彖，请混匀后使用。为了您的安全和健康，

4、请穿实验服并戴一次性手套操作。使用说明：1.样品的准备：细胞样品的准备：收集细胞，用4CPES或生理盐水洗涤12遍。沉淀用碧云天的Western及IP细胞裂解液(P0013)裂解，或用具他适当的裂解液裂解，或进行匀浆。对于裂解液或匀浆液，4C离心取上淸作为待测样品。裂解或匀浆宜在冰浴或4C进行操作。组织样品的准备：动物纽织用生理盐水(0.9%NaCl,含有0.16mg/nil肝素钠)灌流淸除血液后获取纽织样品。取适量的组织样品，加I入碧云天的Western及IP细胞裂解液（P0013）或具他适当溶液进行匀浆。对于匀浆产物，4C离心取上清作为待测样品。裂解或匀浆宜在冰浴或4C进行操作。红细胞或血

5、浆样品的准备：用抗凝管收集血液，颠倒混匀。4Ceoog离心10分钟，移取上清至另一新的lml离心管中，适量生理盐水稀释后即可作为血浆样本进行检测。红细胞样品可同细胞样品的准备，可以用碧云天的Western及IP细胞裂解液（P0013）或其他适当的裂解液裂解。上述样品准备完毕后可以用碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒（P0009/P0010.P001OS/POO11.POO12/P0012S）测定蛋匚1浓度。通常1020微克蛋匚I的细胞或组织裂解液或匀浆液样品具中的SOD平均活力约1个活力单位左右。每种样品准备20J00微克蛋白量通常已经足够用于后续检测。根据蛋I浓度和预计的蛋匚I使用量，用本

6、试剂盒提供的稀释液适当稀释样品。裂解好的样品通常至少需要加入等体积的稀释液进行稀释。准备好的样品如果当日测定，可以冰浴保存，如果当天不能完成测定，可以70C冻存，但建议尽量当天完成测定。2试剂盒的准备工作：NBT工作液的配制：按照每1.8毫升SOD检测缓冲液中加入50微升NBT的比例进行配制（用SOD检测缓冲液将NBT稀释约36倍），混匀后即为NBT工作液。可以根据实验需耍配制适当量的NBTT作液，配制好的NBTT作液4C可以保存12天，但建议尽量现配现用。酶工作液的配制：先把试剂盒中的幽溶液轻轻混匀，并轻轻离心沉淀酶溶液至管底。按照每200微升稀释液中加入5微升幽溶液的比例进行配制（用稀释液

7、将酶溶液稀释约40倍），混匀后即为酚丁作液。可以根据实验需耍配制适当量的卿工作液，配制好的腳工作液4C可保存12周，但建议尽量现配现用。注意：由于酚溶液的用量比较少且易沉降，必须注意充分混匀。（可选做）SOD标准品准备：需自备SOD标准品，用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度：100U/1111,50U/1111,20U/1111.10U/D11,5U/1111,lU/ml,0.1U/nil,0.01U/ml,0.001U/mL在随后的检测中可以各取20微升，参考样品进行检测。说明：本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品，但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对S

8、OD活性定量的参考。3样品测定：a.参考下表使用96孔板设置样品孔和各种空白对照孔。参考下表依次加入待测样品和其他各种溶液。加入酚工作液后充分混匀。注意：加入酚工作液后反应即会开始，可以在低温操作或用扌IF枪操作以减小各孔间因为加入幽工作液的时间先后而导致的误差。样品(Sample)空白对照l（Blankl）空白对照2（Blank2）空白对照3（Blank3尸待测样品20gl20gl稀释液20gl40pl40glNBT工作液180pl180gl180pl180gl酶工作液20pl20gl兴如果样品有颜色或含有抗氧化物质，则需设置空匚I对照3：如果样品没有颜色并且也不含有抗氧化物则没有必要设置空

9、白对照337C孵冇20分钟。（说明：孵育20分钟至30分钟检测出来的SOD活力无显著差异）在560mn测定吸光度。可以使用大于650mn的波氏作为参考波2进行双波氏测定。4样品中总SOD活力的计算：抑制百分率的计算：参考如下计算公式计算抑制百分率:抑制百分率=（A空白对A空翊nJ（A杠一A空Mm）/（A空白财出一A空白2）x100%如果没有设置空口对照3,则可以把计算公式简化为：抑制白分率=叱一Anu）/（A空仙剛A叱白册2）x100%如果计算出来的抑制白分率小于30%或人于70%,则通常需要把该样品重新测定。尽量使样品的抑制白分率在30-70%范圉内。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀

10、释样品：如果测定出来的抑制白分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样品。SOD酚活力单位的定义：在上述黄喋吟氧化酚藕联反应体系中抑制白分率为50%时，反应体系中的SODM活力定义为一个酶活力单位。SODIW活力的计算：0.02A806040OH04051015SOD离活力(units)円1000.015-0.01-0.0050.20.4O.e0.81丿$0D蔚活力(1/units)参考上图A和E,SOD的齣活力和抑制白分率呈非线性的关系，而1/SOD酶活力和1/抑制白分率成线性关系。由此得出SOD酶活力的计算公式如下：待测样品中SOD酶活力单位=检测体系中SOD酶活力单位=抑制百分率/（1抑制

11、百分率）units例如当抑制白分率为50%时，待测样品中SOD酚活力单位=50%/（l-50%）umts=lunit：当抑制白分率为00%时，待测样品U|SOD廨活力单位=60%/（1C0%）units=1.5unitso如果样品为细胞或组织的裂解液或匀浆液，可以根据样品的蛋白浓度和稀释倍数，将SOD活力单位换算为U/g或U/mg蛋IX如果样品为红细胞抽提液，可以根据血红蛋匚1含量，可换算为U/克血红蛋口或U/毫克血红蛋白。附1：SOD腮活力计算的参考方案：可以先使用本试剂盒绘制SOD标准品的抑制白分率曲线，然后根据样品检测到的抑制白分率对比标准品的抑制白分率曲线计算岀样品中的SOD酶活力单位。本方案仅供参考，使用本试剂盒时不必使用本方案进行检测和计算。附2：SOD腳活力的动力学检测：如果条件许可，使用本试剂盒时也可以使用动力学方法检测SOD的酚活力。