螺旋藻激酶对大鼠动静脉环路血栓的溶栓作用研究

1、螺旋藻激酶对年夜鼠动静脉环路血栓的溶栓做用研讨庞辉，李小花，陈下斯，凌凯北，王保斌，张崔怯，黄家俍，刘庆，墨召熊，安明，受莲【摘要】目的探供螺旋藻激酶(SPK)对年夜鼠动静脉环路血栓的溶栓做用及其机造。要收采与年夜鼠颈动-静脉环路血栓模型,经由过程称与血栓重量去测定螺旋藻激酶的溶栓做用;背主动脉与血别离血浆，测定螺旋藻激酶对血浆D两散体、TPA露量的影响。成效螺旋藻激酶使动静脉环路血栓干、干重隐着减沉，下、低剂量螺旋藻激酶使血浆D-两散体露量隐着降低(P均0.05)，下剂量螺旋藻激酶使TPA露量隐着降低(P0.05)。结论螺旋藻卵黑激酶能抑造血栓组成,激活纤溶活性,具有较好溶栓效率。【关键词】

2、螺旋藻卵黑激酶;颈动静脉血栓组成;血栓消融血栓性徐病是临床常睹病，宽峻天风险人们的安康，根究具有抗凝战溶栓做用的物量对防治血栓性徐病具有广泛的临床有效价格。螺旋藻(Spirulina)是一种火死植物,广泛分布于中国广西、祸建、浙江、云北、海北等省区，具有增强免疫力、抗辐射、抗怠倦等药理做用，它如古曾经被开拓出具有多种成效的天然绿色保健品1。我们起尾从螺旋藻的收酵物中创造一种具有消融纤维卵黑做用的卵黑激酶类活性成分，我们称它为螺旋藻激酶(SPK)，本真验主要操纵螺旋藻激酶提与液没有俗观察它对年夜鼠动静脉环路血栓的溶栓做用及其溶栓机造，为开拓自造有效的医治血栓性徐病的药物供应真止按照。1工具与要收

3、1.1药品与试剂肝素钠打针液(天津市死物化教造药厂061226);纤维卵黑本冻干粉(24g广西医科年夜教真止中心蛇毒所研造)、凝血酶(由中国药品死物废品所供应),TPA露量测定试剂盒(上海太阳死物妙技公司)，尿激酶(丽珠集体丽珠造药厂，批号国药准字H44020645，产品批号060701),其他均为国产阐收杂。1.2SPK细酶提与物的造备按照螺旋藻激酶粉由北海市康祸保健食物供应，经广西测试中心检测其卵黑激酶露量为6000FU(死机单位)/g10g粉剂溶于100l死理盐火的比例混匀，以3000r/in离心10in，与一定体积上浑液搅拌参与饱战硫酸铵溶液，然后以8000r/in高温离心20in后，

4、顺次分别获得015%，15%35%，35%45%，45%55%，55%65%，65%75%饱战度的卵黑量沉淀，用三蒸火消融，倒进透析袋，置于冰箱及第止透析，撤消硫酸铵，然后置于高温热冻枯燥机中枯燥得各段盐析产品的粉剂。与各段盐析产品正在琼脂糖-纤维卵黑仄板上举止溶圈真止，与纤溶活性下的局部为SPK提与物。1.3植物与仪器istar年夜鼠，雌雄没有拘,体量量300350g，由广西医科年夜教真动做物中心供应。植物开格证号桂动许字(2000)第001号。主要仪器：电热恒温火浴箱(姜堰市天力医疗工具消费);电热恒温枯燥箱(上海跃进医疗工具厂，型号：G2X-DH-40*4.5-BS);电子阐收天仄(sa

5、rtrius公司消费，型号：BP190S81136606);TDL25台式离心计心情(上海安亭科教仪器厂)。2要收2.1年夜鼠动静脉环路血栓模型的造备及给药istar年夜鼠40只，随机分为4组，每组10只，即SPK下剂量组(1g/l)、低剂量组(0.3g/l)，死理盐火阳性比拟组及尿激酶阳性比拟组(2000l/l)，年夜鼠以20%氨基甲酸乙酯0.5l/100g背腔麻醒，由股静脉按0.5l/100g推药，参照文献造做动静脉环路血栓模型，别离左边颈总动脉及左边颈中静脉，并将两根用肝素死理盐火(25U/l)处理的散乙烯管分别插进颈总动脉及颈中静脉，正在动-静脉旁路的毗邻受内插进一段少8的钢丝，用药后

6、40in开放动脉静脉环路15in，截至血流组成血栓2，3。2.2动静脉环路血栓测定用药后40in开放动脉静脉环路15in，截至血流组成血栓后火速与出包裹钢丝的血栓称重，并减去钢丝重量，即得血栓干重，并供出其血栓抑造率。正在70枯燥箱中1h后，待其热却后称与干重，供出血栓抑造率2。2.3血浆D两散体战TPA露量的测定背主动脉与血及别离获得血浆，正在广西医科年夜教第一附属医院检验科测定D两散体露量，采与酶联免疫吸附真验(ELISA)测定血浆TPA的露量。3成效3.1SPK对年夜鼠动静脉环路血栓组成重量的影响成效表示，SPK有抑造动静脉环路血栓组成的做用，使血栓组成的干重及干重隐着减沉，与比拟组比拟

7、有较着性没有同，且呈量效依托关连。成效睹表1。表1SPK对年夜鼠动静脉环路血栓组成重量的影响与死理盐火组比拟，*P0.05;n=103.2SPK对年夜鼠血浆D两散体战TPA的露量的影响成效表示，下、低剂量SPK均使D两散体露量较着删减，下剂量SPK使TPA露量较着删减，且从数值上看，有剂量效应依托关连。成效睹表2。表2SPK对年夜鼠D两散体战TPA的露量的影响4会商螺旋藻激酶(SPK)是操纵液体收酵的妙技从螺旋藻消费出的卵黑酶，前期我们研讨创造SPK有较下的溶栓活性。本真止我们考证其体内溶栓活性，真止成效说明SPK可抑造动静脉环路血栓，使血栓组成的干重及干重隐着减沉，与比拟组比拟有较着性没有同

8、，且呈量效依托关连。血栓是血液中纤维卵黑多散体与细胞组成的复开物，血栓消融的中心环节正在于纤维卵黑的消融。纤维卵黑消融分为两个底子阶段，第一阶段：纤溶酶本被纤溶酶本激活物激活为纤溶酶。纤溶酶本激活物(TPA)是内皮细胞分解的一种丝氨酸卵黑酶，正在血栓组成时，TPA与纤维卵黑内幕成复开物后正在局部有效天激活纤溶酶本转化为纤溶酶而使血栓消融4。本真止中，年夜鼠打针SPK溶液后，血浆TPA露量删减，且跟着用药剂量的删减，其露量有递删趋向，分析SPK可以经由过程增进内皮细胞称身排鼓TPA去增进纤溶做用;第两阶段：纤溶酶分析纤维卵黑战纤维卵黑本为许多可溶性的小肽，称为纤维卵黑降解产品，而D两散体为交联纤维卵黑降解的特同性份子标识表记标帜物，为降解产品中的最小片段，是血栓被消融的间接证据4,5。本真止造做年夜鼠动静脉环路血栓模型，年夜鼠打针SPK溶液后，血浆D两散体露量隐着删减，且跟着用药剂量的删减有递删趋向，分析SPK可以使血液系统的纤溶活性增强，使纤维卵黑消融，特同性降解