同济医院检验科ISO15189体系文件27血清蛋白电泳测定VIP

1、同济大学附属同济医院检验科生化组项目操作指导书TJYYJYKSH/XMZ127第2版标题：血清蛋白电泳测定第章 第27节第 PAGE 5 页 共 4 页1. 目的：保证血清蛋白电泳检测结果准确、可靠2. 适用范围：血清蛋白电泳在全自动电泳仪上的检测3. 项目名称：血清蛋白电泳4. 检测方法：琼脂糖凝胶电泳原理：胶体颗粒在一定条件下可以带有电荷，带有点荷的胶体颗粒又可以借静电吸引力在电场中泳行，带正电荷者泳向负极，带负电荷者泳向正极，此种现象称为电泳。血清中各种蛋白质都有它特有的等电点。各种蛋白质在各自的等电点时呈电中性状态，它的分子所带正电荷量与所带负电荷量相等。将蛋白质置于比其等电点较高的p

2、H缓冲液中，它们将形成带负电荷质点，在电场中均向正极泳动。由于血清中各种蛋白质的等电点不同，带电荷量多少有差异，蛋白质的分子量大小也不同，所以在同一电场中泳动速度也不同。蛋白质分子小带电荷多，泳动速度较快；分子大而带电荷少，泳动较慢。血清蛋白按其泳动速度可以分出以下的主要区带，从正极端起依次为白蛋白、1球蛋白、2球蛋白、球蛋白及等区带。试剂：6.1 检测试剂：6.1.1 品牌： Helena6.1.2 货号：31476.1.3 包装规格：10片18人份的琼脂片，酸蓝粉剂1瓶6.2 辅助试剂： 界面液：货号：3100；规格：250ml/瓶；7. 仪器：Helena全自动电泳分析系统8. 操作：8

3、.1 试剂的配制：8.1.1 酸蓝染色液：酸蓝粉剂 + 1000ml脱色液 用1000ml脱色液溶解试剂盒中的整小瓶酸蓝粉剂，用脱色液冲洗干净小瓶，使小瓶 中的粉剂全部溶解，放置过夜，然后过滤，储存在带盖的瓶中。8.1.2 脱色液：（5%HAC）：100mlHAC + 1900ml蒸馏水8.2 REP的开机操作8.2.1 打开主电源开关，电脑自行启动，选择“7”，按回车键，进入Program Selection Menu菜单8.2.2 打开REP的电源开关8.2.3 在Program Selection Menu菜单中选择“2REP”， 按回车键，屏幕显示：Loading，REP开始进入运行程

4、序及自检，自检通过后显示电泳菜单界面8.3 刀锋法加样的操作：8.3.1 准备好加样盘，18人份的加样位置是：A：2-7，B：22-27，C：41-478.3.2 按相应位置手工加血清12-17ul于样本盘中8.3.3 胶片的准备：取出胶片用滤纸吸去多余的饱和液将一定量的界面液加到电泳槽上胶片平放于电泳槽中，按照圆孔在左长孔在右的方向放入电泳槽，琼脂片和温控板之间不可产生气泡，将多余的界面液擦掉8.3.4 将自动加样器置于样本盘上方，在相应位置（2、9、16）放好加样刀锋，按自动加样器上的上下键使刀锋浸入样本中，吸样30秒8.3.5 时间到，刀锋上升，转移加样器至准备好的胶片上，按上下键使刀锋

5、置于琼脂上，点样30 秒8.3.6 时间到，移开加样器，在胶片两端的外侧放上碳棒，盖上电泳槽盖，准备电泳8.4 电泳仪的操作；8.4.1 在TESTS处用键盘上的PageUp、PageDown选择“SPE”，按F1键开始运行8.4.2 电泳参数为： Electrophoresis Time 9:30 mm:ss Electrophoresis Voltage 480 volts Electrophoresis Temperatrue 12 Dry Time 7:00 mm:ss Dry Temperatrue 50 Standby Temperatrue 208.4.3 电泳结束后，按F5键退

6、出系统8.5 染色操作：8.5.1 取出已跑好的电泳片，除去盐桥，准备染色8.5.2 打开染色仪，将电泳片反置于染色板上，拧紧各个开关，选择SPE选项，按START键，开始染色、烘干8.5.3 染色结束后，拧松各个开关，关掉染色仪电源8.6 EDC光密度扫描仪的操作：8.6.1 打开扫描仪的电源8.6.2 在Program Selection Menu菜单中选择“3CEZSCAN”，按回车键，进入EZ-Scan主菜单8.6.3 电泳片按照圆孔在上长孔在下的方向置于扫描架上，用磁铁固定，关上门8.6.4 选择主菜单中的病人资料，按回车键8.6.5 选择工作单，按回车键，出现下拉菜单，选择“spe

7、”， 按回车键8.6.6 选择进入，按回车键，光标移到工作菜单内，根据提示输入病人资料，每次正确输入后,按回车键，继续下一个样本的输入，当所有样本的资料输入后，按Esc键回到主菜单8.6.7 选择清除扫描资料，出现对话框，选择“是”， 按回车键8.6.8 选择主菜单中的扫描，按回车键8.6.9 选择工作单，按回车键，出现下拉菜单，选择“spe”， 按回车键8.6.10 选择测试，按回车键，出现下拉菜单，选择“SPE-18”， 按回车键8.6.11 选择参数，按回车键，根据提示内容设定： 序号：1-18 调零：A自动 强制分带：N否 增益：A自动 编辑： Y是 定位：A自动 打印： N否 外输出

8、：Y是 保存： Y是8.6.12 选择开始，按回车键，仪器开始自动扫描8.7 扫描图形的编辑： 具体操作详见全自动电泳仪的操作指导书（编号：TJYYJYKSH/YQZ03）9. 参考范围： 蛋白质组分占总百分比（%）白蛋白52 63球蛋白10.8 3.2球蛋白24.5 9.0球蛋白5.8 12.0球蛋白10.0 19.010. 临床意义： 血清蛋白电泳，通常可分离出白蛋白（AIB）、1、2、-球蛋白5个组分。正常人血清中各种蛋白质浓度的差别较大，所以在许多疾病时仅表现出轻微变化，往往没有特异的临床诊断价值。下列几种疾病时电泳分析结果可有较显著的变化。几种疾病的蛋白电泳变化病名白蛋白球蛋白12肾病弥慢性肝损害 肝硬化桥原发性肝癌AFP多发性骨髓瘤慢性炎症妊娠无丙种球蛋白血症双白蛋白血症双峰 注：.异常球蛋白，可出现M区带显著。 .“”轻度增加；显著增加；轻度减少；显著减少.标本要求：必须采用血清标本，因血浆内纤维蛋白原可以在球蛋白区形成一条额外的区带。血清标本置封闭容器中，室温下可稳定1天，48可储藏1周。12. 注意事项：REP开机后，上部运行的Granty部分不能用手硬行推动，只有通过程序进入和运行后，按仪器前部的两个黑色按钮左右移动12.2 避免使用过量的界面液，琼脂