同济医院检验科ISO15189体系文件03丙型肝炎抗体(抗-HCV)测定

1、同济大学附属同济医院检验科免疫组项目操作指导书TJYYJYKMY/XMZ203第2版标题：丙型肝炎抗体(抗HCV)测定第2章 第03号第 PAGE 4 页 共 NUMPAGES 4 页1. 目的：检测血清标本中的抗HCV-IgM抗体。2. 适用范围：同济医院检验科免疫室。3. 项目名称：丙肝抗体测定4. 检测方法：酶免疫分析法。5. 检测原理：包被抗原为合成多肽抗原和基因工程抗原（包括HCV病毒结构区核心抗原和非结构区抗原）。待测标本加入已包被抗原的反应孔内孵育，若标本中含用HCV抗体，则该抗体与微孔内抗原形成抗原抗体复合物，加入酶结合物，经孵育后，酶结合物连接至抗原抗体复合物上，在TMB底物

2、参与反应的情况下，产生显色反应。6. 试剂：购自上海科华公司，每一试剂盒包含以下成分：6.1 品牌:科华实业公司。6.2 包装规格:96人份。6.3 内含物:每盒试剂含以下成分：6.3.1 微孔反应条: 8孔X 126.3.2 酶联试剂：7.5mlX2瓶；6.3.3 阳性对照：1ml Xl瓶；6.3.4 阴性对照：1mlXl瓶；6.3.5 样品稀释液：20mlX1瓶；6.3.6 洗涤液 (使用前25倍稀释)：80mlXl瓶；6.3.7 显色剂A：8mlXl瓶；6.3.8 显色剂B：8mlXl瓶；6.3.9 终止液：7mlXl瓶；6.3.10封片：2片。6.3.11说明书1份。7 仪器品牌、型号

3、：意大利Alisei全自动酶免分析仪。8 操作步骤：8.1 打印工作单:8.1.1 打开LIS电脑及打印机电源，8.1.2 双击齐效检验系统，登陆工号与密码；8.1.3 双击报告处理，单击标本申请信息打开标本申请明细信息查询，打开左上角的所有信息，选择未生成报告信息。8.1.4 在检验项目处选择HCV执行查询，点击打印申请单，打印出工作单。8.2 排列待测标本:根据工作单上的库位号从标本架中找出相应标本，并按工作单上的顺序排列在Alisei全自动酶免分析仪的样本架上。8.3 装载试剂：开启Alisei全自动酶免分析仪，根据待测标本数量，点击编辑工作列表，出现试剂及酶标板界面。按照屏幕所示放好洗

4、板液，洗针液，标本试管，预稀释管和试剂。8.4 装载酶标板：点击Alisei分析仪界面的装卸反应板按钮进行装载反应板，按项目顺序进行装载。等所有项目酶标板装载完成后，点击开始按钮，机器开始检测。8.5 Alisei分析仪检测参数：试剂空 白阳性对照阴性对照质控品标 本单 孔双 孔双 孔单 孔单 孔100ul样本稀释液100ul/孔10ul标本+100ul样本稀释液37，30分钟洗涤，洗涤液350ul/孔 5次酶结合物100ul/孔混匀，37，30分钟洗涤，洗涤液350ul/孔 5次A液50ul/孔B液50ul/孔混匀，37，10分钟终止液50ul/孔450/630nm读取OD值8.6 结果：仪

5、器自动记录OD值并可打印测定结果，同时传入LIS中，发送报告详见免疫报告发送程序。8.7 结果判断：阳性对照OD值应大于或等于0.6，若大于2.5时，按2.5计算。阴性对照OD值不得大于0.05；Cutoff Value的计算，COV=0.1阳性对照平均OD值+阴性对照平均OD值；测试标本的OD值COV则为HCV抗体阴性；测试标本的OD值COV则为HCV抗体阳性。9. 参考范围：正常人阴性。10. 临床意义：抗HCVIgG、IgM抗体均为非保护性抗体，急性期为IgM型，慢性期多为IgG型，恢复期患者抗HCV均为IgG型，且滴度较低。11. 病人准备、标本要求：标本为血清时最好空腹采血，脂血、溶血不可使用。其它体液标本无特殊要求。12. 注意事项：12.1 从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应在室温平衡30分钟后方可使用，余者应及时封存于冰箱中，以备后用。12.2 使用前试剂液为绿色，加入血清或血浆时变为蓝紫色；当加入非血清或血浆时不变色或变为其它颜色，不影响检测结果。样品稀释液不宜长时间暴露于空气中，每次使用样品稀释液后，请尽快盖好瓶盖。12.3 手工操作时，封片不能反复使用。12.4 若洗涤液出现结晶，可置37使