正交法提取木耳多糖及对大鼠血清超氧化物歧化酶和体外肝脏脂质过

1、正交法提取木耳多糖及对大鼠血清超氧化物歧化酶和体外肝脏脂质过【摘要】目的用正交法优选木耳粗多糖的提取工艺及其对血清超氧化物歧化酶SD及肝脏体外脂质过氧化的影响。方法选取料水比、温度、提取次数以及提取时间为考察因素，采用正交法L934为方案，确定木耳粗多糖提取的最正确工艺。按15gkg-1d-1(为人类摄取木耳中木耳多糖的10倍)给istar大鼠灌胃，血清中SD活性和肝脏中的丙二醛DA含量分别采用邻苯三酚自氧化和TBA法测定。结果木耳多糖的最正确提取条件是：料水比为145，提取温度为80，水提时间1h，提取次数3次，得率4.37%；灌胃大鼠较空白组肝脏的DA含量明显下降P0.05；血清SD活性对

2、邻苯三酚自氧化抑制率明显进步(P0.05)。结论优化条件可进步木耳粗多糖产率,并保证较高多糖的含量和平安性；木耳多糖应用于抗衰老和保肝作用前景良好。【关键词】木耳多糖；正交法；超氧化物歧化酶；丙二醛木耳AuriulariaauriulaL.Under，别名黑木耳、光木耳。真菌学分类属担子菌纲，木耳目，木耳科，是药食两用的物品。分布广泛，人工培育产量高，具有良好的深加工前景。木耳子实体富含多糖胶体，有良好的清滑作用，是矿山工人、纺织工人的重要保健食品。木耳多糖具有多种生物活性，对细胞免疫和体液免疫功能具有良好的促进作用；具有降低血脂、胆固醇、血液黏度，抗血栓形成作用；具有降低血糖、抗糖尿病的功能

3、；同时还能促进核酸、蛋白质的生物合成和防治多种老年性疾病1。为了进步木耳多糖提取的科学性和产率，采用正交实验优选其提取工艺的最正确条件，并研究其对血清SD及肝脏脂质过氧化的影响。2方法与结果2.1因素及程度考察根据前期探索实验得知木耳的粒度决定料水比例，粒度越小，黏度越低。将木耳磨成粉状，在粒度固定的情况下，采取一样的浸泡时间，影响提取的主要因素有料水比、温度、提取次数以及提取时间。每个因素选择3程度，进展正交实验设计L9342，考察上述4个因素对木耳多糖提取效率的影响，实验因素程度如表1所示。表1变量因素及相应程度略2.2提取方法取木耳子实体10g，按L934正交表设计方案进展实验，蒸馏水煎

4、煮，合并煎液，过滤，滤液浓缩至50l，sevag法脱蛋白3次，根据木耳粗多糖的分子量选择1000012000的透析袋，蒸馏水透析3d，浓缩后，用2倍于浓缩液的无水乙醇进展醇沉，根据乙醇的挥发温度在80水浴下挥干，得灰白色片状物。蒽酮法测定多糖含量。正交结果见表2。结合对正交实验数据的分析可得出提取工艺为A2B21D3，即料水比为145，水提温度为80，水提时间为1h，水提次数为3次。根据极差值可知，各因素对提取率影响的大小依次为水提次数、水提时间、料水比和水提温度。表2正交实验产率及SPSS13.0得到的预测产率略转贴于论文联盟.ll.2.3木耳粗多糖中糖含量的测定2.3.1对照品溶液的制备称

5、取105枯燥至恒重的葡萄糖0.1020g，置于100l容量瓶中，分别汲取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6l定容至10l，即得不同浓度的标准液。2.3.2样品溶液的制备分别精细称取不同条件下提取的木耳粗多糖10g，置于100l的容量瓶中，80恒温水浴溶解，定容，即得样品。2.3.3绘制标准曲线分别取不同浓度标准液2l，参加2%的蒽酮-硫酸试剂内含1%硫脲，下同5l，沸水浴中加热10in，取出后流水冷却，在620n波长下比色，得回归方程：Y=6.8804X+0.001，R2=0.9914，浓度与A值所做标准曲线如图1。2.3.4样品中糖的含量的测定准确称取不同条件下木

6、耳粗多糖1l+1lH2，参加2%的蒽酮-硫酸试剂5l，沸水浴中加热10in，取出后流水冷却，在620n波长下比色见表3。木耳粗多糖中平均总含糖量为50.1%。表3木耳多糖含量略2.4木耳多糖对血清SD及肝脏体外脂质过氧化的影响istar大鼠10只，购回后在紫外消毒、温度23的室内自由喂清洁级大鼠专用饲料和水进展1周的适应性饲养后，随机分空白组和药物组，药物组每天给予1.5l浓度为1%的木耳多糖溶液按15g/kg体重,为人类摄取木耳中木耳多糖的10倍，5d后乌拉坦麻醉，腹主动脉取血并取肝脏。2.4.1对血清SD的影响血清SD的制备及SD测定液的配制3，取0.4l血清，参加0.4l乙醇-氯仿混合液

7、两者体积比为53，振荡2in，4000r/in离心5in以除去蛋白质，上清液为SD抽提液。试剂及反响条件：取3支试管，分别为对照管、样品管1和2正常和药物实验动物血清。反响条件如下：样品管分别取SD抽取液100l，参加4.8l的pH8.2Tris-Hl缓冲液含0.1l/EDTA，对照管参加4.9l的pH8.2Tris-Hl缓冲液含0.1l/EDTA，混匀，在25恒温水浴中保存10in后各参加6l/L邻苯三酚100l，邻苯三酚参加后，摇匀，5in内测定对照管和样品管的吸光率A对照和A样品，测定波长为320n，利用邻苯三酚法测定SD抽取液的A值并计算抑制率。抑制率越高，SD活性越高，否那么相反。实

8、验结果的值进展t检验。结果见表4。抑制率I%=A对照-A样品/A对照100%实验结果的值进展t-检验。结果见表4。表4木耳多糖对邻苯三酚自氧化的影响略药物空白组与正常组比拟,P=0.0130.05；n=52.4.2对肝脏体外脂质过氧化的影响4试剂及反响条件：分别为对照、样品管1和2正常和药物实验动物血清。样品管分别取测定DA的肝匀浆1.0l于试管中，再参加蒸馏水1l，对照组取蒸馏水2l代替，混匀后于37空气恒温浴震荡器中振荡1.5h，取出后参加10%的三氯醋酸2.0l，0.67%TBA1.0l，混匀后在沸水浴中反响15in，取出后流水冷却，以3000r/in离心15in，其上清液在532n波长

9、处比色，测定A值，计算对DA的抑制率，此间接反响实验条件对肝脏DA的影响。实验结果的值进展t-检验。结果见表5。表5木耳多糖对体外肝脏脂质过氧化的作用略抑制率I%=A对照-A样品/A对照100%3讨论本实验的提取剂采用蒸馏水，尽管木耳粗多糖得率低于酸碱及各种酶参与的提取，但环保且提取的木耳多糖没有有害物质的残留，而且含糖量比拟高，合适应用于保健及治疗过程。通过正交实验对木耳多糖的提取工艺条件进展优化，在料水比为145、水提温度为80，水提时间为1h，水提次数为3次的条件下比批量消费木耳多糖的产率高出35倍。根据极差值看出，提取温度对得率影响最小，可以降低温度，节省资源。对istar大鼠灌胃结果说明：木耳多糖不仅可以显著进步血清SD的活性P0.05，通过血液循环去除全身各处的超氧阴离子，到达抗衰老的目的，也可以明显降低肝脏DA的含量P0.05，保护肝脏。【参考文献】1季宇彬.中药多糖的化学与药理.北京：人民卫生出版社，2022：382.2余松林.医学统计学.北京：人民卫生出版社，2002.3Zhajingang,DianhuiLu,aiEna，etal.ptiizatinfplysaharidesextratinfrGynstea